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凝血酶滴定法测定宽体金线蛭抗凝血活性的影响因素

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中国药师 2014年第5期17卷 789-793页

作者：刘义梅喻珊崔瑞勤陈艳明陈科力教育部中药资源与中药复方重点实验室&湖北中医药大学药学院武汉430065 牡丹江友博药业

对测定宽体金线蛭抗凝血活性的凝血酶滴定方法的影响因素进行分析。方法：用白瓷点滴板代替试管进行滴定反应（简称白瓷板法），考察白瓷板法和常规的试管法、不同凝血酶滴定间隔时间和凝血酶浓度对抗凝血活性测定的影响。结果：在同样... 详细信息

对测定宽体金线蛭抗凝血活性的凝血酶滴定方法的影响因素进行分析。方法：用白瓷点滴板代替试管进行滴定反应（简称白瓷板法），考察白瓷板法和常规的试管法、不同凝血酶滴定间隔时间和凝血酶浓度对抗凝血活性测定的影响。结果：在同样条件下，白瓷板法测定抗凝血活性的精确度和稳定性较试管法高。用白瓷板法测定，宽体金线蛭样品浓度在一定范围内（0．125～0．333g·ml^-1）、凝血酶浓度为20u·ml^-1或10U·ml^-1时，每隔1min滴加1次，每次5μ1，样品浓度与消耗的凝血酶体积呈线性相关，r值分别为0．961和0．992；所测得样品的抗凝血活性分别为（33．08±2．64）和（31．24±1．32）U·g^-1．RSD分别为8．0％和4．2％；对于0．333g·ml^-1的样品，其测量产生的理论误差不大于10％和5％。结论：白瓷板法可用于测定宽体金线蛭样品的抗凝血活性，用10U·ml^-1的凝血酶溶液，每分钟滴加一次，每次5山进行测定，其线性和精确度均较好。

关键词：宽体金线蛭抗凝血活性凝血酶滴定法滴定间隔时间凝血酶浓度

凝血酶滴定法测定云南菲牛蛭中水蛭素含量的改进研究

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云南中医学院学报 2017年第1期40卷 70-73页

作者：张利李志远风云昉云南省食品药品监督检验研究院云南昆明650011 昆明医科大学云南昆明650500

目的改进原云南省菲牛蛭质量标准中水蛭素的含量测定方法。方法考察白瓷板法代替原试管方法、两种浓度的凝血酶溶液、几种滴定体积对含量测定的影响;用原方法和改进后的方法分别对五批样品进行滴定比较。结果改进后,用白瓷板法测定,配... 详细信息

目的改进原云南省菲牛蛭质量标准中水蛭素的含量测定方法。方法考察白瓷板法代替原试管方法、两种浓度的凝血酶溶液、几种滴定体积对含量测定的影响;用原方法和改进后的方法分别对五批样品进行滴定比较。结果改进后,用白瓷板法测定,配制两种浓度的凝血酶溶液(40NIH·m L-1与20NIH·m L-1),采用几种滴定体积(1~5μL),每1min滴加1次,先滴加高浓度凝血酶溶液初测消耗的凝血酶溶液体积后,再用两种浓度的凝血酶溶液重新进行精确测定;增加空白对照实验,限定反应时间为10min;菲牛蛭样品浓度在0.00678~0.0597g·m L-1(r=0.9983)内与消耗的凝血酶单位量呈线性相关;五批样品的含量为156.68~234.25U·g-1,RSD均小于5%;含量供试品溶液在4℃下24h内稳定。结论改进后的方法简便、快速,重复性和准确度较原方法好,可作为一种新的云南菲牛蛭水蛭素含量测定方法。

关键词：云南菲牛蛭凝血酶滴定法水蛭素

血蛭康胶囊提取工艺优化及其体外抗凝、溶栓活性研究

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中成药 2023年第6期45卷 1969-1972页

作者：龚铃刘贵金张鑫邓世明海南大学药学院海南海口570228

目的优化血蛭康胶囊提取工艺,并评价其体外抗凝、溶栓活性。方法在单因素试验基础上,以渗漉体积流量、乙醇体积分数、浸泡时间、乙醇用量为影响因素,阿魏酸提取率、干膏得率的综合评分为评价指标,正交试验优化提取工艺。采用凝血酶滴定... 详细信息

目的优化血蛭康胶囊提取工艺,并评价其体外抗凝、溶栓活性。方法在单因素试验基础上,以渗漉体积流量、乙醇体积分数、浸泡时间、乙醇用量为影响因素,阿魏酸提取率、干膏得率的综合评分为评价指标,正交试验优化提取工艺。采用凝血酶滴定法考察体外抗凝活性,血凝块溶解法考察体外溶栓活性。结果最佳条件为4倍量70%乙醇浸泡24 h,渗漉体积流量2 mL/min,综合评分为108.49分。胶囊体外抗凝活性值为240 U/g。与阴性组比较,血蛭康胶囊中、高剂量组小鼠血凝块溶解率升高(P<0.05,P<0.01)。结论该方法稳定可行,可用于提取体外抗凝、溶栓活性良好的血蛭康胶囊。

关键词：血蛭康胶囊提取工艺正交试验体外抗凝活性体外溶栓活性凝血酶滴定法血凝块溶解法

基于抗凝血酶活性效价的麝香质量生物评价方法研究

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中国中药杂志 2018年第10期43卷 2112-2117页

作者：罗云谭婷梁新丽赵海平廖正根杨明江西中医药大学现代中药制剂教育部重点实验室江西南昌330004 江西中医药大学中药固体制剂制造技术国家工程研究中心江西南昌330006

该文尝试建立麝香体外抗凝血酶活性效价测定方法,探索品种和产地对麝香抗凝血酶生物活性的影响,为麝香质量生物评价提供科学依据。采用凝血酶滴定法,考察麝香供试品溶液浓度、纤维蛋白原浓度、凝血酶浓度、凝血酶滴定时间间隔对麝香抗... 详细信息

该文尝试建立麝香体外抗凝血酶活性效价测定方法,探索品种和产地对麝香抗凝血酶生物活性的影响,为麝香质量生物评价提供科学依据。采用凝血酶滴定法,考察麝香供试品溶液浓度、纤维蛋白原浓度、凝血酶浓度、凝血酶滴定时间间隔对麝香抗凝血酶活性测定的影响,并比较不同品种和产地麝香抗凝血酶活性的大小。结果显示,麝香供试品溶液浓度在一定范围内（0.010.02 g·m L-1）,纤维蛋白原浓度为0.5%,凝血酶浓度为10 U·m L-1,滴定间隔时间为1 min,每次滴定2μL时,麝香供试品溶液浓度与凝血酶消耗体积呈良好的线性关系（r=0.991 4）。不同产地林麝麝香抗凝血酶活性效价为（105.0±10.4）U·g-1,马麝麝香抗凝血酶活性效价为（102.4±5.5）U·g-1,原麝（安徽）麝香抗凝血酶活性效价为（97.7±6.6）U·g-1,人工麝香抗凝血酶活性效价为（58.6±6.4）U·g-1。结果表明,抗凝血酶活性效价测定方法简便、快速、准确、可靠,可用于麝香质量生物评价;品种和产地对麝香抗凝血酶活性影响较大,在麝人工饲养时应注意品种和产地的选择;人工麝香和天然麝香的抗凝血酶活性差异较大,提示人工麝香处方配比可能有待进一步优化。

关键词：麝香抗凝血酶活性凝血酶滴定法产地品种生物测定

酶解水蛭地龙混合药渣的工艺研究及其产物的抗凝活性评价

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天津中医药 2022年第3期39卷 392-396页

作者：李淑楠金慧倪开岭于洋李正王娜天津中医药大学天津301617 牡丹江友搏药业有限责任公司牡丹江157000

[目的]考察蛋白酶酶解水蛭地龙混合药渣的工艺条件,评价其酶解产物的抗凝活性。[方法]分别采用碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和中性蛋白酶对混合药渣进行酶解实验。采用凝血酶滴定法和纤维蛋白原平板溶圈法评价酶解产物的体外抗凝活性,以确定... 详细信息

[目的]考察蛋白酶酶解水蛭地龙混合药渣的工艺条件,评价其酶解产物的抗凝活性。[方法]分别采用碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和中性蛋白酶对混合药渣进行酶解实验。采用凝血酶滴定法和纤维蛋白原平板溶圈法评价酶解产物的体外抗凝活性,以确定最佳酶种类。溶液pH、酶底比、酶解时间、酶解温度为考察因素,单因素实验优化酶解工艺。[结果]与药渣对照组和蛋白酶对照组对比发现,水蛭地龙混合药渣酶解液显示出较强抗凝活性。其中,碱性蛋白酶酶解产物的抗凝效果最好。其最佳工艺条件为酶底比0.95%、pH 11.4、酶解温度45℃,酶解时间4 h。[结论]经碱性蛋白酶酶解后,水蛭地龙药渣酶解液的抗凝活性最强。实验为废弃药渣的再利用提供实验依据和开发方向。

关键词：水蛭地龙酶解法纤维蛋白原平板溶圈法凝血酶滴定法

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铅污染对水蛭的体外抗凝血活性的影响

北京中医药 2022年第3期41卷 260-263页

作者：杨超杰孟杰亲陈秀芬杨瑶珺北京中医药大学中药学院北京102488

目的探讨重金属铅污染对水蛭抗凝血活性的影响。方法选取市场上主流的水蛭品种—蚂蟥Whitmania pigra Whitman,将蚂蟥种苗随机分为正常对照组、铅低残留组、铅中残留组、铅高残留组各70条,分别养殖在含有原始土壤、低剂量硝酸铅土壤、... 详细信息

目的探讨重金属铅污染对水蛭抗凝血活性的影响。方法选取市场上主流的水蛭品种—蚂蟥Whitmania pigra Whitman,将蚂蟥种苗随机分为正常对照组、铅低残留组、铅中残留组、铅高残留组各70条,分别养殖在含有原始土壤、低剂量硝酸铅土壤、中剂量硝酸铅土壤、高剂量硝酸铅土壤的水族箱中。50 d后获得不同程度铅污染的水蛭样品,分别采用凝血酶滴定法和凝血酶时间(TT)法评价其抗凝血活性。结果凝血酶滴定法测定结果显示,与生理盐水相比,各组水蛭样品均显示出抗凝血活性,且效价均高于药典对水蛭药材的规定(3 U/g);与正常对照组相比,铅高残留组水蛭的U值较低(P凝血活性。

关键词：水蛭抗凝血凝血酶滴定法凝血酶时间法铅污染

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水蛭胶囊质量标准研究

中国民族民间医药 2022年第16期31卷 30-32页

作者：杨元凤杨仁惠韩云霞徐冉陈启乾周训蓉贵州中医药大学第二附属医院贵州贵阳550003 贵州中医药大学医院制剂研发中心贵州贵阳550003 贵州中医药大学医院中药制剂研究中心贵州贵阳550003 贵州医科大学贵州贵阳550004

目的:建立水蛭胶囊的质量标准。方法:采用薄层色谱法(TLC)对水蛭胶囊中的水蛭进行定性鉴别,采用凝血酶滴定法对水蛭胶囊抗凝血酶活性进行测定。结果:水蛭的TLC色谱斑点清晰,分离度好。水蛭胶囊抗凝血酶活性均值为142.0 U/g。结论:本研... 详细信息

目的:建立水蛭胶囊的质量标准。方法:采用薄层色谱法(TLC)对水蛭胶囊中的水蛭进行定性鉴别,采用凝血酶滴定法对水蛭胶囊抗凝血酶活性进行测定。结果:水蛭的TLC色谱斑点清晰,分离度好。水蛭胶囊抗凝血酶活性均值为142.0 U/g。结论:本研究建立的质量标准方法简便、准确,可用于水蛭胶囊的质量控制。

关键词：水蛭胶囊薄层鉴别凝血酶滴定法抗凝血酶活性

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宽体金线蛭抗凝血活性物质的提取方法

中国医院药学杂志 2012年第6期32卷 414-417页

作者：万明汪蜜刘义梅喻珊陈科力教育部中药资源和中药复方重点实验室湖北中医药大学药学院湖北武汉430064

目的:比较不同提取方法对宽体金线蛭提取物抗凝活性的影响,确定抗凝活性物质的较佳提取方法。方法:应用凝血酶滴定法、APTT试剂盒法、PT试剂盒法等3种检测方法比较干品冷提、干品热提、干品脱脂后热提及鲜品冷提等提取物中抗凝活性的差... 详细信息

目的:比较不同提取方法对宽体金线蛭提取物抗凝活性的影响,确定抗凝活性物质的较佳提取方法。方法:应用凝血酶滴定法、APTT试剂盒法、PT试剂盒法等3种检测方法比较干品冷提、干品热提、干品脱脂后热提及鲜品冷提等提取物中抗凝活性的差异。结果:与空白对照组比较,各种提取方法所得提取物均具有明显的抗凝活性,各种检测方法所得结果一致。其中,水蛭鲜品和干品脱脂后提取物中抗凝活性较强。结论:水蛭提取物的抗凝活性强弱与原料的处理和提取方法有关。水蛭干品脱脂有利于提高提取物的抗凝活性。凝血酶滴定法可作为提取物抗凝活性的初步检测方法,其结果稳定,易于操作。APTT、PT试剂盒法可作为抗凝活性进一步检测的方法。

关键词：宽体金线蛭抗凝活性凝血酶滴定法 APTT试剂盒法 PT试剂盒法

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水蛭中水蛭素含量测定的改进

中国中药杂志 2008年第19期33卷 2277-2279页

作者：范尚坦李金兰张勇赖丽萍南京军区福州总医院福建福州350025

水蛭素活性测定方法目前主要有以chromonym TH为生色底物的比色法、光散射法和凝血酶滴定法。2005年版《中国药典》收载了用凝血酶滴定法测定水蛭药材中的水蛭素，其原理是水蛭素可与凝血酶以1：1比例结合，而凝血酶已有标准的国际单位... 详细信息

水蛭素活性测定方法目前主要有以chromonym TH为生色底物的比色法、光散射法和凝血酶滴定法。2005年版《中国药典》收载了用凝血酶滴定法测定水蛭药材中的水蛭素，其原理是水蛭素可与凝血酶以1：1比例结合，而凝血酶已有标准的国际单位NIH，因此可以用抗凝血酶活力单位ATU来表示水蛭素的活性，即1个ATU等于中和1个NIH凝血酶的水蛭素量。在对宽体金线蛭和柳叶蚂蟥中水蛭素含量进行测定时发现药典方法存在一定缺陷。

关键词：水蛭素活性测定方凝血酶滴定法《中国药典》酶活力单位宽体金线蛭光散射法国际单位