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凝血酶适配体的功能基修饰及生物活性

高等学校化学学报 2018年第11期39卷 2445-2450页

作者：杜闪闪李阳郭磊李朋羽柴智龙王涛全东琴何军林贵州大学药学院贵州550025 军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所北京100850

在2'-脱氧胸苷(d T)的5位引入2-胺乙基胺酰基,获得了化合物5-[(2-胺乙基)胺酰基甲基]-2'-脱氧胸苷(1),将其用于对凝血酶适配体(TBA)的2个单链结构域(T3T4和T12T13)进行功能基修饰.化合物1的引入对TBA的分子内折叠产生了一定的影响. TBA... 详细信息

在2'-脱氧胸苷(d T)的5位引入2-胺乙基胺酰基,获得了化合物5-[(2-胺乙基)胺酰基甲基]-2'-脱氧胸苷(1),将其用于对凝血酶适配体(TBA)的2个单链结构域(T3T4和T12T13)进行功能基修饰.化合物1的引入对TBA的分子内折叠产生了一定的影响. TBA的结构单元T4和T13分别被化合物1取代后,5位的2-胺乙基胺酰基降低了分子的稳定性及抗凝血作用,表明T4和T13是高度保守的碱基; T3和T12分别被化合物1取代后,5位上的2-胺乙基胺酰基可能处于适配体-凝血酶相互作用界面,加强了与凝血酶的相互作用,从而提高了抗凝血作用.

关键词：凝血酶适配体热稳定性圆二色光谱凝血时间

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微流控电阻抗检测系统构建及其应用

分析科学学报 2020年第2期36卷 295-298页

作者：张思祥竭霞胡雪迎李默张英杰周围河北工业大学天津300130

凝血时间检测主要用于凝血障碍性疾病的初步诊断、抗凝药物的监测以及外科手术前的评估,是医生对患者自身凝血功能进行评价的一项重要指标。本文应用微流控电阻抗技术,提出了一种基于叉指电极的微流体凝血时间检测方法。使用软刻蚀方式... 详细信息

凝血时间检测主要用于凝血障碍性疾病的初步诊断、抗凝药物的监测以及外科手术前的评估,是医生对患者自身凝血功能进行评价的一项重要指标。本文应用微流控电阻抗技术,提出了一种基于叉指电极的微流体凝血时间检测方法。使用软刻蚀方式制作微流控芯片,将固化后带有微通道的聚二甲基硅氧烷(PDMS)与带有刻蚀电极的导电玻璃键合,搭建微流控电阻抗检测系统。本实验通过对血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)的检测,得出血液凝固过程中阻抗值的变化曲线,引入微积分概念,确定血液凝固时间。

关键词：微流控凝血时间叉指电极电阻抗活化部分凝血活酶时间(APTT)

双模式响应的压电石英晶体传感器检测凝血参数

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双模式响应的压电石英晶体传感器检测凝血参数

作者：王桢昌中南大学

学位级别：硕士

压电石英晶体传感器是一种厚度剪切模式的体声波传感器,具有粘弹性响应模式及质量响应模式,仪器易于小型化,可实现高灵敏的实时监测,在临床诊断、食品检测等领域具有重要应用价值。本文针对压电石英晶体检测凝血参数中存在的问题,对仪... 详细信息

压电石英晶体传感器是一种厚度剪切模式的体声波传感器,具有粘弹性响应模式及质量响应模式,仪器易于小型化,可实现高灵敏的实时监测,在临床诊断、食品检测等领域具有重要应用价值。本文针对压电石英晶体检测凝血参数中存在的问题,对仪器结构及检测参数进行了改进与设计,提出双模式响应的压电石英晶体传感器用于检测凝血参数,实现了凝血时间的快速检测及凝血酶的低浓度检测。具体研究内容如下:(1)提出毛细进样压电石英微滴血凝监测系统,设计了一种自动进样微流控压电石英晶体检测池,成功用于凝血时间的快速检测。基于压电石英晶体的粘弹性响应采用血液凝固法检测凝血时间,在常规U型压电石英晶体检测池中采用频移法成功实现对血浆及全血凝固过程频率信号的检测,并选取聚苯乙烯作为信号放大的界面修饰。在验证毛细进样压电石英微滴血凝监测系统稳定性的前提下,对检测池进行改进,成功制备出自动进样微流控压电石英晶体检测池,实现小型化、一次性的检测需求,并采用频移法及相移法实现了微滴(15μL)全血的检测。(2)开发了一种双振幅正弦波激励压电石英频移法传感系统,其抗干扰能力及分辨率大幅提高,成功实现凝血时间的快速检测。基于压电石英晶体的粘弹性响应,该系统采用两个不同振幅(CCC控制符下的0.7 V及2FFF控制符下的3.2 V)正弦波分别激励压电石英晶体,并使用高、低振幅下的频率差表征体系粘度变化,解决了常规频移法粘度检测中所存在的干扰问题。采用不同浓度蔗糖溶液进行实验,验证了信号值与粘度变化之间的关系,并将其应用于血液,证明该系统对不同稀释度全血也具有较好的传感性能。最后采用该系统激励压电石英晶体,基于频移法在自动进样微流控压电石英晶体检测池中实现了凝血时间的快速检测。(3)基于压电石英晶体的质量响应,分别采用倍频模式和提高基频的方式提高灵敏度,基于适配体分子探针实现了p M级凝血酶的检测。倍频模式和提高基频是增加压电石英晶体灵敏度的两种有效方法,本文对两种方式均进行验证:一方面采取倍频模式激励10 MHz金电极压电石英晶体,通过分析倍频模式的扫频峰认为5倍频是此实验条件下的最佳倍频模式;另一方面制作了33 MHz高频无极小型压电石英晶体,提高基频并缩小晶体大小,同时采取无极压电石英晶体面作为传感面,验证无极压电石英晶体的免疫传感能力。在流动进样实验条件下,两种方式均可实现低浓度凝血酶的特异性检测,且表现出良好的检测性能。其中,5倍频模式的10 MHz金电极石英晶体在5 p M-150 p M凝血酶浓度范围内具有良好线性关系,检测限为1.69p M,小型33 MHz单面无极石英晶体对55 p M-500 p M浓度范围内的凝血酶呈良好的线性关系,检测限为17.39 p M。图59幅,表20个,参考文献144篇

关键词：压电石英晶体双幅激励凝血时间质量灵敏度凝血酶

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白及非多糖组分止血活性成分研究

天然产物研究与开发 2021年第3期33卷 426-432页

作者：赵菲菲李靖徐国波王永林席晓岚廖尚高贵州医科大学药学院贵阳550004 贵阳市第一人民医院药剂科贵阳550001 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵阳550004

初步研究白及非多糖组分(BS-80EE)中止血活性成分。采用超高压液相色谱-电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱(UHPLC-ESI-Q-TOF MS)联用技术分析BS-80EE中化学成分;利用二磷酸腺苷(ADP)、凝血酶(THR)诱导的血小板聚集实验和小鼠凝血时间(CT)... 详细信息

初步研究白及非多糖组分(BS-80EE)中止血活性成分。采用超高压液相色谱-电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱(UHPLC-ESI-Q-TOF MS)联用技术分析BS-80EE中化学成分;利用二磷酸腺苷(ADP)、凝血酶(THR)诱导的血小板聚集实验和小鼠凝血时间(CT)实验初步评价其止血活性。结果显示,从BS-80EE中共成功指认了12个化合物。其中4-hydroxymethylphenylβ-D-glucoside(1)、blestroside(5)、gymnoside I(7)、gymnosideⅨ(14)、armatuside(17)能显著促进血小板聚集作用。4-Hydroxymethylphenylβ-D-glucoside(1)、α-isobutylmalic acid(3)、blestroside(5)、gymnoside I(7)、militarine(8)、gymnosideⅨ(14)、1-p-hydroxybenzyl-4-methoxyphenanthrene-2,7-diol(18)可显著缩短肝素化小鼠的CT值。该研究结果初步明确了BS-80EE发挥止血的物质基础。

关键词：白及非多糖组分止血血小板聚集凝血时间

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穿山甲高温砂炒炮制增效机制研究

中草药 2019年第7期50卷 1603-1609页

作者：刘逊刘睿赵呈雷吴芝园朱晔谈如蓝刘竞天张迪苏州卫生职业技术学院江苏苏州215009 南京中医药大学江苏南京210023 江苏省中医药研究院江苏南京210028

目的穿山甲传统生品不入药,需炮制后方可入药,因此对穿山甲高温砂炒的炮制机制进行研究。方法采用TLC、Nano LC-Q Exactive Orbitrap MS对穿山甲炮制前后的脂溶性成分及蛋白成分的变化进行分析,同时,对炮制过程中显著增加的环二肽成分... 详细信息

目的穿山甲传统生品不入药,需炮制后方可入药,因此对穿山甲高温砂炒的炮制机制进行研究。方法采用TLC、Nano LC-Q Exactive Orbitrap MS对穿山甲炮制前后的脂溶性成分及蛋白成分的变化进行分析,同时,对炮制过程中显著增加的环二肽成分的形成进行模拟炮制。并对L-丝-L-酪环二肽的活性进行筛选。结果穿山甲经砂炒炮制后,脂溶性成分无显著变化、蛋白成分显著减少,环二肽显著增加。环二肽的形成主要与炮制过程中的受热有关,在低温条件下,直链肽N端可环化生成L构型的环二肽,在高温环境下,直链肽N端及C端均可快速环化生成环二肽。L-丝-L-酪环二肽可延长凝血时间并增加奶牛乳腺上皮细胞增殖率和乳蛋白合成相关基因表达,同时还具有显著的镇痛活性,这与穿山甲传统功效相一致。结论穿山甲经炮制后产生的L-丝-L-酪环二肽可能是穿山甲炮制增效的物质基础。这对揭示穿山甲药效物质基础、寻找穿山甲替代资源、保护穿山甲具有重要意义。

关键词：穿山甲炮制机制 Nano LC-Q Exactive Orbitrap MS 脂溶性成分蛋白成分 L-丝-L-酪环二肽模拟炮制凝血时间镇痛活性

基于热分析技术及综合评价的栀子炭炮制工艺研究

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中草药 2019年第21期50卷 5253-5259页

作者：吕辰子张晓燕苏晓娟宁晨旭王勃孟祥龙张朔生山西中医药大学中药学院

目的优化栀子炭炮制工艺,并结合药效学研究对所得炮制工艺进行验证。方法运用热分析技术分别对栀子中不同有效成分进行热解特性分析,得出栀子炭最佳炮制温度范围;同时,以栀子炭中鞣质含量为指标,选择炒制温度、炒制时间2个因素,结合响... 详细信息

目的优化栀子炭炮制工艺,并结合药效学研究对所得炮制工艺进行验证。方法运用热分析技术分别对栀子中不同有效成分进行热解特性分析,得出栀子炭最佳炮制温度范围;同时,以栀子炭中鞣质含量为指标,选择炒制温度、炒制时间2个因素,结合响应面法试验优化栀子炭炮制工艺,并通过药效学实验(止血实验)对栀子炭炮制工艺进行验证。结果热分析实验综合分析得出栀子炭最佳炮制温度为290.3~387.0℃;响应面法优化得出栀子炭最优炮制工艺为炒制温度330℃,炒制时间5.91 min;与空白组比较,新法组、传统组均能极显著缩短小鼠凝血时间(P凝血时间(P凝血活酶时间(APTT)(P凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)的影响差异不显著。结论结合热分析技术和响应面法优化栀子炭炮制工艺,并进行相关药效学实验验证,结果合理可行,该法可为改进传统中药炮制工艺,合理量化炮制过程中火力火候参数提供借鉴。

关键词：栀子炭热分析技术炮制工艺响应面法止血药效学热解特性鞣质凝血时间活化部分凝血活酶时间凝血酶原时间凝血酶时间

基于主成分分析研究山楂叶4种提取物对血瘀证相关指标的影响

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中草药 2018年第8期49卷 1871-1876页

作者：高婧姚建伶赵胜男潘海峰承德医学院河北省中药研究与开发重点实验室河北承德067000 承德市食品药品检验检测中心河北承德067000 北京四环制药有限公司北京100025

目的运用主成分与单因素方差分析有机结合的方法,从整体和局部双重角度观察山楂叶4种提取物对血瘀证大鼠血液流变学类、红细胞类、血小板类和凝血时间等27个指标的影响,分析指标所蕴含的信息,为山楂叶提取物活血化瘀作用机制的研究提供... 详细信息

目的运用主成分与单因素方差分析有机结合的方法,从整体和局部双重角度观察山楂叶4种提取物对血瘀证大鼠血液流变学类、红细胞类、血小板类和凝血时间等27个指标的影响,分析指标所蕴含的信息,为山楂叶提取物活血化瘀作用机制的研究提供新的思路。方法将48只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和给药组,利用冰水浴联合sc盐酸肾上腺素制备血瘀证模型,对照组和模型组ig等剂量生理盐水,给药组分别ig 4种山楂叶提取物(A、B、C、D)水溶液。采集大鼠血液样本,选取血液流变学、红细胞类、血小板类和凝血酶原时间等27个指标进行检测。采用主成分分析法对所有指标数据进行无纲量化及降维处理,生成互不相关的主成分,再将新变量(即主成分)进行单因素方差分析,将分析结果结合各主成分的贡献率和各指标的相关系数,对各组中指标群及单个指标进行综合分析,得出规律性结论。结果通过主成分分析提取8个主成分,贡献率达到77.992%,根据主成分的信息结合单因素方差分析结果,得出第1主成分中的9个指标性成分可以取代原27个指标反映山楂叶提取物活血化瘀作用,分别是纤维蛋白原水平(FIB),红细胞总数,血小板总数,血小板平均体积,血小板压积,低、中、高切变率全血黏度,血浆黏度。山楂叶4种提取物对指标性成分的作用有所不同。结论山楂叶提取物的活血化瘀作用主要是通过降低血液和血浆黏度、促进血红蛋白降解、增加血小板的数量、缩短凝血时间等来实现的。

关键词：山楂叶提取物活血化瘀主成分分析单因素方差分析血浆黏度血红蛋白凝血时间

酢浆草乙醇提取物的凝血止血作用和急性毒性初步探究

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Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences 2022年第7期31卷 530-535页

作者：杨加琼刘英宗大庆赵静峰昭通卫生职业学院云南昭通657000 教育部自然资源药物化学重点实验室云南省天然产物转化与应用重点实验室云南大学化工学院云南昆明650091

本文主要观察酢浆草乙醇提取物对小鼠出血时间(BT)、凝血时间(CT)和急性毒性作用。首先取40只小鼠,随机均分为正常对照组、云南白药组、酢浆草乙醇提取物低剂量组和高剂量组。给药组以酢浆草乙醇提取物低剂量(0.6 g/kg)、高剂量(1.2 g/... 详细信息

本文主要观察酢浆草乙醇提取物对小鼠出血时间(BT)、凝血时间(CT)和急性毒性作用。首先取40只小鼠,随机均分为正常对照组、云南白药组、酢浆草乙醇提取物低剂量组和高剂量组。给药组以酢浆草乙醇提取物低剂量(0.6 g/kg)、高剂量(1.2 g/kg)灌胃,应用玻片法、剪尾法测定小鼠的凝血时间(CT)、止血时间(BT);再取50只小鼠,采用半数致死量法,对小鼠进行灌胃给药,观察小鼠生理状态、中毒反应及死亡,于试验第14天剖检观察其脏器有无异常情况。结果在凝血止血试验中,我们发现各组间无统计学差异(P>0.05),但具有明显的剂量反应关系,且BT时间和CT时间明显低于阴性对照组,和云南白药对照组相当。在急性毒性试验中,酢浆草乙醇提取物半数致死量为6.0291g/kg,95%可信区间为5.3065–6.7829 mg/kg。

关键词：酢浆草乙醇提取物止血作用凝血时间急性毒性

基于成分-活性整体相似性的重楼替代资源筛选

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中草药 2018年第18期49卷 4366-4373页

作者：张海珠赵飞亚陶爱恩董洪李若诗黎氏文梅夏从龙大理大学药学与化学学院云南大理671000 云南省昆虫生物医药研发重点实验室云南大理671000

目的考察不同种重楼成分-活性的整体相似性,建立重楼替代资源筛选的新方法。方法采用HPLC法及镇痛、止血药理学模型比较了重楼属7种药用植物中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的量及其镇痛、止血的药效,采用离差标准化法对数据进行标准化,以《... 详细信息

目的考察不同种重楼成分-活性的整体相似性,建立重楼替代资源筛选的新方法。方法采用HPLC法及镇痛、止血药理学模型比较了重楼属7种药用植物中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的量及其镇痛、止血的药效,采用离差标准化法对数据进行标准化,以《中国药典》2015年版一部规定的重楼皂苷含量及阿司匹林、云南白药组"镇痛、止血"药效数据作为标准对照,建立了成分指数和活性指数,采用SPSS 20.0软件对成分指数和活性指数进行主成分分析和聚类分析。结果重楼属7种药用植物主要皂苷类成分的总质量分数为0.125%~1.649%,其中长柱重楼最高(1.649%),大理重楼最低(0.125%);云南重楼镇痛活性最强、小鼠出血停止时间(BT)最短、小鼠凝血时间(CT)最短;长柱重楼组小鼠活化部分凝血活酶时间(APTT)最短,黑籽重楼组最长;南重楼组小鼠凝血酶原时间(PT)最短;大理重楼组小鼠BT最长,多叶重楼组小鼠CT和PT均最长;云南重楼、南重楼、黑籽重楼聚为一类,多叶重楼、长柱重楼、大理重楼、毛重楼聚为一类,说明南重楼、黑籽重楼与云南重楼的成分-活性整体之间相似度较高,可考虑作为替代资源使用。结论通过成分-活性等指标的整体相似性,评价不同种重楼之间的品质关系,为濒危植物重楼替代资源的寻找提供了思路和方法。

关键词：重楼替代资源整体相似性化学计量学镇痛活性凝血时间