检索结果-南通市图书馆

鸡减蛋综合征病毒中和性单克隆抗体的制备、鉴定及在双抗体夹心ELISA中的应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

河南农业科学 2024年第2期53卷 128-135页

作者：魏蔷李青梅金前跃宋亚鹏白怡霖张改平河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 郑州大学农学院河南郑州450001

为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iE... 详细信息

为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)效价最高达到1∶409 600,间接免疫荧光试验(IFA)效价最高达到1∶12 800。取效价最高免疫小鼠脾细胞进行细胞融合制备杂交瘤细胞,结合iELISA和IFA检测,经过多轮亚克隆,最终成功获得了2株稳定分泌中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株9G12和10E11。iELISA结果显示,单克隆抗体9G12和10E11的腹水效价分别为1∶128 000和1∶1 020 000;IFA效价分别为1∶2 000和1∶8 000。Western blot检测结果显示,单克隆抗体9G12和10E11均不能识别变性的EDSV纤维蛋白,表明二者识别纤维蛋白的构象型表位。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体9G12和10E11均具有中和活性,中和效价分别为1∶2~7和1∶2~4。亚型鉴定表明,这2种单克隆抗体的轻链均为Kappa型,重链均为IgG1亚型。将基于单克隆抗体9G12和10E11建立的双抗体夹心ELISA方法应用于临床检测EDSV抗原,与荧光定量PCR检测结果的符合率为91.7%。综上,成功筛选出9G12和10E11杂交瘤细胞株,二者分泌抗EDSV特异性抗体,且这2种抗体具有中和EDSV感染活性,可应用于EDSV的临床检测。

关键词：减蛋综合征病毒纤维蛋白中和性单克隆抗体抗体中和效价双抗体夹心ELISA

减蛋综合征病毒在不同品系小鼠体内的组织分布

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国实验动物学报 2019年第2期27卷 160-166页

作者：范涛梁琳李嘉阳李刚中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国食品药品检定研究院北京102629

目的通过人工感染减蛋综合征病毒(egg drop syndrome virus,EDSV),观察病毒在不同品系小鼠体内增殖情况以及动态变化规律,为EDSV构建载体提供理论依据与数据支持。方法选取免疫系统正常的BALB/c小鼠、T细胞免疫缺陷裸鼠(Nu)以及高度免... 详细信息

目的通过人工感染减蛋综合征病毒(egg drop syndrome virus,EDSV),观察病毒在不同品系小鼠体内增殖情况以及动态变化规律,为EDSV构建载体提供理论依据与数据支持。方法选取免疫系统正常的BALB/c小鼠、T细胞免疫缺陷裸鼠(Nu)以及高度免疫缺陷小鼠(NSG)为研究对象,每品系32只,雌性,5～6周龄,经腹腔注射人工感染EDSV,分别于攻毒后1、3、5、7、14、21、28、35 d采集血清,应用间接ELISA方法进行抗体监测;选择攻毒后1、7、14、21、28 d小鼠,采集心脏、肺、肝、脾、肾、小肠、子宫、气管、食管、脑10种组织,应用荧光定量PCR相对定量比较Ct法(△△CT)进行各组织内病毒载量的检测。结果 BALB/c小鼠于攻毒后3 d即可在血清内检测到抗体的表达,14 d抗体水平达到最高,并一直维持至监测期内35 d;Nu小鼠也可于攻毒后3 d检测到抗体,表达水平较BALB/c小鼠有所降低,攻毒14 d后,Nu小鼠血清中抗体水平出现下降,至35 d抗体一直维持在较低的水平;NSG小鼠在整个监测过程中,抗体水平一直处于阴性状态。核酸相对定量结果显示,BALB/c小鼠感染后1 d,肝组织中的病毒表达量最高,达到5.45个数量级,其次由高到低依次是脾、食管、子宫、小肠、肺、气管、肾、心脏,脑组织中病毒含量最低,随感染时间的延长,各组织内病毒表达量较感染1 d均有所下降,至攻毒后28 d,肝、脾病毒表达量依然维持着较高的水平;Nu小鼠和NSG小鼠感染1 d表现为脾中病毒表达量最高,分别为3.95和4.05个数量级,其次为肝,攻毒28 d,两种小鼠体内各器官内仍可以检出阳性信号,肝、脾病毒表达量较高。结论 EDSV可刺激小鼠产生免疫应答,在免疫缺陷小鼠体内抗体水平表达量较低。该病毒在小鼠体内有肝、脾等组织嗜性,为EDSV开发成为载体以及在实验动物模型上的进一步研究与应用提供了参考数据。

关键词：减蛋综合征病毒不同品系小鼠病毒组织分布

减蛋综合征病毒NE4株全基因组序列测定与分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

甘肃农业大学学报 2010年第5期45卷 21-28页

作者：董春娜李刚邱文英张坤哈小琴甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 兰州军区总医院医学实验中心甘肃兰州730050

根据减蛋综合征病毒(EDSV-76)AV-127株的全基因序列(序列号BK000404),用Premier5.0软件设计22对引物,利用PCR方法对EDSV-76病毒NE4株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定,并用DNAStar分析软件对各片段的测序结果进行拼接,将该序列... 详细信息

根据减蛋综合征病毒(EDSV-76)AV-127株的全基因序列(序列号BK000404),用Premier5.0软件设计22对引物,利用PCR方法对EDSV-76病毒NE4株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定,并用DNAStar分析软件对各片段的测序结果进行拼接,将该序列与GenBank中已登录的相应序列进行同源性分析,并用六邻体蛋白构建进化树.结果表明:NE4株基因组序列全长33214bp,GC含量为43%,与国际标准株AV-127相比,核苷酸序列同源性为99.6%.碱基的插入或缺失主要在非编码区,在100K蛋白编码区距羧基端1/10处插入了1个碱基C,其ORF编码696个氨基酸,而AV-127株100K蛋白编码709个氨基酸,预计其发挥功能的基团在N端.蛋白同源性分析表明,EDSVNE4株主要蛋白与羊腺病毒OAV(Ovine adenovirusD)、牛腺病毒BAV(Bovine adenovi-rusD)和蛇腺病毒SAV(Snake adenovirus)有较高的同源性,而与禽腺病毒Ⅰ群(CELO)的同源性较低,说明NE4株与禽腺病毒Ⅰ群亲缘关系较远,进化树分析也证实了此特性.

关键词：减蛋综合征病毒基因组同源性序列分析

减蛋综合征病毒五邻体基因的原核表达及其表达蛋白的部分活性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2010年第7期40卷 688-691页

作者：杨华刘晓民于志丹马波王君伟东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

通过PCR方法扩增得到减蛋综合征病毒(EDSV)结构蛋白五邻体(Penton)基因,将其克隆到原核表达载体pET-30a(+)的多克隆位点,构建了原核表达载体pET-30a-Penton,将其转化到感受态细胞Rosetta(DE3)pLysS中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得... 详细信息

通过PCR方法扩增得到减蛋综合征病毒(EDSV)结构蛋白五邻体(Penton)基因,将其克隆到原核表达载体pET-30a(+)的多克隆位点,构建了原核表达载体pET-30a-Penton,将其转化到感受态细胞Rosetta(DE3)pLysS中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了54.0ku的融合蛋白。用纯化的融合蛋白免疫家兔制备抗血清,通过血凝试验、Western-blot、血凝抑制试验、细胞中和试验进行分析,表明该融合蛋白不能引起鸡红细胞凝集,无血凝活性;可与EDSV阳性血清发生特异性反应,能够诱导机体产生中和抗体,具有良好的抗原性。

关键词：减蛋综合征病毒五邻体原核表达活性分析

减蛋综合征病毒环介导等温扩增检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

甘肃农业大学学报 2011年第2期46卷 1-5页

作者：董春娜李刚李伟张坤史利军哈小琴胡永浩中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 兰州军区总医院医学实验中心甘肃兰州730050

根据GenBank登录的减蛋综合征病毒(EDSV)六邻体基因的保守区,设计了3对环介导等温基因扩增(LAMP)引物,优化反应体系,并对其灵敏性、特异性进行验证.结果表明:LAMP优化后的反应体系为外引物浓度0.1μmol·L-1,内引物浓度0.8μmol·L-1,... 详细信息

根据GenBank登录的减蛋综合征病毒(EDSV)六邻体基因的保守区,设计了3对环介导等温基因扩增(LAMP)引物,优化反应体系,并对其灵敏性、特异性进行验证.结果表明:LAMP优化后的反应体系为外引物浓度0.1μmol·L-1,内引物浓度0.8μmol·L-1,环引物浓度0.4μmol·L-1,Mg2+浓度8.0 mmol·L-1,dNTP浓度0.8 mmol·L-1,甜菜碱浓度0.5 mmol·L-1,BstDNA聚合酶浓度8 U,最佳反应温度65℃;扩增出的EDSV基因呈特征性梯状条带,显色反应呈绿色荧光;检测EDSV的灵敏度高,是普通PCR检测的10倍,可检测到60个拷贝的基因组DNA;特异性强,与鸡新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡胚致死孤儿病毒(CELO)无交叉反应;该方法重复性好,稳定性高,可准确快速地进行减蛋综合征病毒的检测.

关键词：减蛋综合征病毒环介导等温扩增检测

减蛋综合征病毒pVⅢ基因和E3区序列测定及结构分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 1998年第1期18卷 27-31页

作者：李茂祥金奇章金钢曾力宇殷震侯云德中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室

克隆了减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）中国分离株基因组ＨｉｎｄⅢ－Ｅ片段，并分析了其核苷酸序列。该片段位于基因组中央５８．７～６８．９物理图谱单位（ｍｕ），片段全长共３１９４ｂｐ。其中含有１个完整的和２个不完整的开放性读码... 详细信息

克隆了减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）中国分离株基因组ＨｉｎｄⅢ－Ｅ片段，并分析了其核苷酸序列。该片段位于基因组中央５８．７～６８．９物理图谱单位（ｍｕ），片段全长共３１９４ｂｐ。其中含有１个完整的和２个不完整的开放性读码框架（ＯＲＦ），分别编码ｐＶⅢ蛋白、１００Ｋ蛋白基因Ｃ端和纤维蛋白Ｎ末端部分。ｐＶⅢ蛋白基因由７５３个碱基（ｎｔ）组成，编码２５０个氨基酸（ａａ），编码产物的分子量为２８５００。氨基酸水平的同源性比较表明，ＥＤＳＶ的ｐＶⅢ蛋白与禽腺病毒１型（ＦＡＶ１）及人和其他动物腺病毒ｐＶⅢ蛋白的同源性为２８％～３６％，而与羊腺病毒（ＯＡＶ）的同源性高达５２％，提示ＥＤＳＶ与ＯＡＶ间的亲缘关系更近。按照人腺病毒基因组结构的特征，在ｐＶⅢ和纤维蛋白基因之间，应为Ｅ３区，但该序列只有２４５个ｎｔ组成，序列中保留了ＴＡＴＡＢｏｘ和ｐｏｌｙＡ信号。但除了２个仅编码４９ａａ和３２ａａ多肽的ＯＲＦｓ外，不编码任何产物，且核苷酸序列与其他腺病毒的Ｅ３区无同源性，证实此区无明显Ｅ３区样结构。

关键词：减蛋综合征病毒 PVⅢ 蛋白基因序列分析

减蛋综合征病毒六邻体重组蛋白的表达和初步应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

病毒学报 2006年第1期22卷 58-61页

作者：汪铭书程安春郭万柱陈孝跃四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心

The plasmid PE which harbored the whole hexon-encoding gene of egg drop syndrome virus(EDSV) was identified and the hexon protein gene was obtained from it by restriction endonucleases.The gene was then directionally inserted into the PphI/KpnI sites of pQE32 and fused with the 6×His gene.This recombinant plasmid was transformed into E.coli M15 for expression and induced with IPTG.It was demonstrated by SDS-PAGE and Western blot that one expressed protein,110kD in size,could be specifically recognized by polyclonal anti-EDSV serum.The objective product was principally soluble and accounted for 21% of the total cellular proteins.The protein was used to detect the existence of antiEDSV IgG in 41 clinical chicken sera by agar diffusion test,and the result was in accordance with that when EDSV was used as antigen.These results showed that the expressed hexon recombinant protein can be used as diagnostic antigen of EDSV.

关键词：减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因表达诊断抗原应用

减蛋综合征病毒五邻体重组蛋白的原核表达及抗原性鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

东北农业大学学报 2009年第2期40卷 83-87页

作者：肖妙于志丹马波王君伟东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

根据减蛋综合征病毒(EDSV)AV-127株的全基因序列(GenBank序列号AC000004)设计了1对引物,采用PCR扩增出五邻体(Penton)完整基因,将其连接到克隆载体pMD18-T,经过鉴定后测序。序列分析表明,所获得的DNA片段核苷酸序列和GenBank中AV-l27株... 详细信息

根据减蛋综合征病毒(EDSV)AV-127株的全基因序列(GenBank序列号AC000004)设计了1对引物,采用PCR扩增出五邻体(Penton)完整基因,将其连接到克隆载体pMD18-T,经过鉴定后测序。序列分析表明,所获得的DNA片段核苷酸序列和GenBank中AV-l27株的五邻体比较有9个碱基突变,但利用DNAstar分析,两者的氨基酸完全一致。然后酶切胶回收后将目的片段连接到质粒表达载体pET-30a(+),获得的阳性克隆命名为pET-30a-Penton。将pET-30a-Penton转化E.coli Rosetta,经37℃、1.0 mmol·L-1 IPTG诱导表达5 h,SDS-PAGE分析超声裂解后的上清和沉淀,结果显示目的蛋白以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为54.0 ku。Western Blot试验结果表明目的蛋白具有较好的抗原活性。

关键词：减蛋综合征病毒五邻体原核表达抗原性

减蛋综合征病毒四川分离株六邻体蛋白基因的序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

病毒学报 2003年第2期19卷 183-186页

作者：汪铭书程安春陈孝跃郭万柱王小玉四川农业大学动物科技学院动物生物技术中心四川雅安625014

According to the nucleotide sequence of egg drop syndrome virus(EDSV)AV-127 strain (a foreign standard isolate)from the GenBank,a pair of oligonucleotide primers was designed and synthesizedWith use of polymerase chain reaction(PCR),the hexon-encoding gene fragment was amplified from the genome of EDSV SG9301 strain that was isolated from Sichuan Province of China and the amplified fragment was directly inserted into pMD-T vectorThe recombinant plasmid harboring the hexon-encoding gene was identified by digestion of restriction endonucleases and PCRThen,a positive clone was sequencedThe result showed that the recombinant plasmid contained the complete sequence of the hexon-encoding gene and the hexon-encoding gene was 2733 base pair long which encoded 910 amino acids, identical with AV-127 strain and AAV-2 strain (an attenuated strain)Comparison with AV-127 strain indicated that there was 9985% homology at the nucleotide levelThe homology of the deduced amino acid sequence with AV-127 strain and AAv-2 strain was over 98%,which indicated that the hexon protein was conservativeBut comparatively,the homology of the hexon protein of SG9301 strain with AV-127 strain was higher(9978%),the homology of the hexon protein of AAV-2 strain with AV-127 strain and SG9301 strain were 9868% and 9846% respectivelyComparison of nucleotides and amino acids suggested that the biological character is consistent with the homologies of nucleotide and amino acid of the hexon(Namely,the homology of the hexon of virulence strain with virulence strain was higher than that of virulence strain with attenuated strain),the hexon was one of the most conserved viral proteins among EDSV

关键词：减蛋综合征病毒四川分离株六邻体蛋白基因序列分析腺病毒科