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冻融抗原负载的树突状细胞抗子宫内膜癌的体内研究

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冻融抗原负载的树突状细胞抗子宫内膜癌的体内研究

作者：宋文惠河北医科大学

学位级别：硕士

目的:目前,手术,化疗和放疗是肿瘤治疗的3大手段,这些手段均不能消灭最后一个残留的癌细胞,而生物治疗最有希望达到这一目标。近年来,开展DC细胞作为肿瘤生物治疗和基因治疗的方案已经获得FDA标准进入Ⅲ期临床,该疗法比传统的LAK细胞治... 详细信息

目的:目前,手术,化疗和放疗是肿瘤治疗的3大手段,这些手段均不能消灭最后一个残留的癌细胞,而生物治疗最有希望达到这一目标。近年来,开展DC细胞作为肿瘤生物治疗和基因治疗的方案已经获得FDA标准进入Ⅲ期临床,该疗法比传统的LAK细胞治疗和CIK细胞疗法更有特异性,以及更强大的杀瘤活性。但子宫内膜癌树突状疫苗的研究国内外鲜有报道。由于目前子宫内膜癌的肿瘤特异性抗原不明确,应用全细胞性肿瘤抗原冲击致敏DC的方法来制备树突状疫苗不失为一种简便而有效的方法。本研究目的在于观察人子宫内膜癌细胞株Ishikawa冻融抗原致敏的人脐带血单核细胞来源的DC活化的CTL对裸鼠移植瘤的预防和治疗作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法:1分离正常足月产妇分娩后新生儿脐血单个核细胞(mononu- clear cells ,MNCs),加入含细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4的培养剂常规培养,每3天半量换液1次,补全量细胞因子。第3天向DC诱导体系中按照1:10的细胞比例加入Ishikawa冻融抗原,第五天加入TNF-α。第7天收集细胞;与分离的T淋巴细胞按照1:10的比例混合培养3天。倒置显微镜下观察树突状细胞以及T淋巴细胞形态。2将30只裸鼠随机选择15只,收集处于对数生长期(logarith- mic growth phase)的细胞系Ishikawa,建立裸鼠子宫内膜癌皮下移植瘤模型。选择肿瘤体积长至100mm3的10只裸鼠,在瘤旁皮下分别注射DC活化的CTL、冻融抗原活化的CTL及完全培养基,每7天接种1次,连种3次。每4天测量一次移植瘤大小,并以公式V=1/6πabc计算肿瘤体积(abc为肿瘤互相垂直的直径),绘制移植瘤生长曲线。3从余下的15只裸鼠中随机分为3组,每组5只,分别于左侧背部皮下接种DC活化的CTL、冻融抗原活化的CTL及完全培养基。3天后将对数生长期的细胞系Ishikawa接种于这两组裸鼠的右侧背部皮下;每4天观察一次裸鼠移植瘤的形成情况,并以公式V =1/6πabc计算移植瘤体积(V为体积,abc为肿瘤互相垂直的直径),直到接种后第20天。4镜下观察各治疗组Ishikawa移植瘤标本的形态:透射电子显微镜下观察Ishikawa移植瘤标本肿瘤细胞超微结构。5应用流式细胞仪检测DC活化的CTL组和冻融抗原活化的CTL组以及治疗组对照组Ishikawa移植瘤的凋亡率。6应用流式细胞仪检测DC活化的CTL组和冻融抗原活化的CTL组以及治疗组对照组Ishikawa移植瘤细胞中Fas膜蛋白的表达。7应用免疫组化SP法检测DC活化的CTL组和冻融抗原活化的CTL组以及治疗组空白对照组Ishikawa移植瘤组织中Survivin的表达。结果1脐血来源的单个核细胞体外应用rhGM-CSF, rhIL-4, TNF-α和冻融抗原培养7天后,生成了具有典型形态的成熟DC。冻融抗原负载DC活化的T淋巴细胞比单纯冻融抗原活化的T淋巴细胞形成的集落大,且增殖快。2 Ishikawa裸鼠皮下移植瘤生长曲线:冻融抗原负载DC激活的CTL治疗组较单纯冻融抗原负载的CTL治疗组抑制肿瘤生长作用明显。3不同CTL治疗组间移植瘤体积比较:冻融抗原负载DC活化CTL治疗组,移植瘤组织治疗后的体积较前明显缩小(P冻融抗原活化的CTL治疗组移植瘤组织治疗后的体积较前略缩小(P冻融抗原负载DC活化CTL治疗组治疗后的体积明显小于单纯冻融抗原活化的CTL治疗组,二者比较有统计学差异(P冻融抗原负载DC活化的CTL治疗组仅一只于第8天出现瘤结节,移植瘤发生率16. 6 %;单纯冻融抗原活化的CTL治疗组中,于接种肿瘤细胞系Ishikawa后4天即见移植瘤出现,移植瘤发生率63 %。而对照组移植瘤发生率100 %。前组与后两组有显著性差异(P冻融抗原负载DC活化的CTL组中,扫描电镜下观察到肿瘤组织凋亡的早期信号,表现为:凋亡细胞的部分核膜向外呈锐角突起和凋亡征象表现为细胞核染色质浓缩并凝结成块,聚集在核膜周围呈半月或新月状,细胞浆浓缩,内质网变疏松并与胞膜融合形成空泡。在其他两治疗组中,则未见到明显凋亡征象。6流式细胞术凋亡率的测定:冻融抗原负载DC活化的CTL治疗组与对照组相比差异有显著性(P冻融抗原活化的CTL治疗组与对照组相比有统计学意义(P<0.05)

关键词：树突状细胞子宫内膜癌冻融抗原裸鼠凋亡 Fas Survivin

卵巢癌细胞株冻融抗原负载的树突状细胞诱导CTL抗卵巢癌免疫应答的体外研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第12期24卷 964-967页

作者：叶枫陈怀增谢幸叶大风浙江大学医学院附属妇产科医院杭州310006

目的研究卵巢癌冻融抗原负载的树突状细胞(dendriticcells,DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外杀伤卵巢癌细胞的细胞毒性效应。方法利用免疫磁珠分离法(MACS)分离纯化脐血CD34+细胞并在体外诱导分化为DC,用反复冻融法从卵巢癌细胞系SKOV... 详细信息

目的研究卵巢癌冻融抗原负载的树突状细胞(dendriticcells,DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外杀伤卵巢癌细胞的细胞毒性效应。方法利用免疫磁珠分离法(MACS)分离纯化脐血CD34+细胞并在体外诱导分化为DC,用反复冻融法从卵巢癌细胞系SKOV3中提取的可溶性相关抗原负载DC。流式细胞学检测负载抗原后DC表面各种分化相关抗原的表达,ELISA法检测DC上清中IL12的表达,混合淋巴细胞反应(MLR)测定DC体外刺激T细胞增殖的能力,MTT法检测抗原负载DC激活的抗原特异性CTL对卵巢癌细胞的杀伤作用。结果与未经抗原负载的DC相比,经卵巢癌抗原负载的DC不仅能更高地表达各种DC分化相关抗原CD1α(73.35%±2.94%vs34.1%±2.35%)、CD83(73.9%±8.46%vs54.68%±3.26%)、CD80(91.95%±2.48%vs52.53%±3.18%)、HLADR(70.05%±2.35%vs48.7%±2.07%)以及CD54(88.9%±5.52%vs71.45%±2.29%),同时具有更强的刺激同种异体T淋巴细胞增殖和IL12分泌的能力(P均冻融抗原负载DC激活的CTL在体外对SKOV3的杀伤率为77.35%,显著高于未经抗原负载的DC(P=0.0001)。结论经卵巢癌细胞冻融抗原负载DC激活的CTL在体外具有更强的增殖能力和杀伤卵巢癌细胞的作用。

关键词： DC CTL 冻融抗原卵巢癌细胞相关抗原树突状细胞表达 SKOV3 分化分离纯化

负载U937细胞冻融抗原的DC诱导CTL的特异性杀伤

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第2期20卷 251-252页

作者：贺白邱国强谢晓宝常州市第一人民医院血液科江苏常州213000

树突状细胞(DC)作为重要的专职抗原提呈细胞,其抗原提呈能力远强于巨噬细胞和B细胞等抗原提呈细胞.因而,以DC为中心的免疫治疗是肿瘤生物学治疗的主要方向之一.我们应用当前普遍采用的rhGM-CSF、rhIL-4培养体系,自骨髓单个核细胞诱导产... 详细信息

树突状细胞(DC)作为重要的专职抗原提呈细胞,其抗原提呈能力远强于巨噬细胞和B细胞等抗原提呈细胞.因而,以DC为中心的免疫治疗是肿瘤生物学治疗的主要方向之一.我们应用当前普遍采用的rhGM-CSF、rhIL-4培养体系,自骨髓单个核细胞诱导产生CD14-CD1a+的前体DC,使其负载U937细胞冻融抗原(frozen-thawed antigen,FTA),致敏T淋巴细胞,产生CTL特异性杀伤U937细胞,观察其对所激发的T淋巴细胞表型及抗肿瘤免疫功能的影响.

关键词：树突状细胞冻融抗原白血病 U937细胞

rhHSP70联合冻融抗原修饰树突状细胞诱导的抗肝癌作用

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rhHSP70联合冻融抗原修饰树突状细胞诱导的抗肝癌作用

作者：魏云涛中国医科大学

学位级别：硕士

目的树突状细胞（Dendritic cells,DCs）是目前发现的功能最强大的抗原递呈细胞（Antigen presenting cells,APC）,能高效能递呈抗原,且是唯一能激活初始型T淋巴细胞的抗原递呈细胞,具有独特的诱导初始免疫反应对抗肿瘤的能力。... 详细信息

目的树突状细胞（Dendritic cells,DCs）是目前发现的功能最强大的抗原递呈细胞（Antigen presenting cells,APC）,能高效能递呈抗原,且是唯一能激活初始型T淋巴细胞的抗原递呈细胞,具有独特的诱导初始免疫反应对抗肿瘤的能力。目前在DCs疫苗抗肿瘤实验研究和临床研究方面已取得了令人振奋的进展,显示了广泛的应用前景。但肿瘤疫苗研制中仍然存在着一个主要问题:大多数肿瘤抗原的免疫原性很弱,不能正常的被呈递以激活细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxictlymphocytes,CTLs）,为了提高其免疫原性,必须加入佐剂。研究已表明HSP70具有佐剂样作用,HSP70可以促进DCs成熟,刺激多种细胞因子的分泌而增强免疫功能。本研究对DCs被重组人热休克蛋白70（recombinant human heat shock protein70,rhHSP70）和肝癌冻融抗原共同修饰前后的表型变化、形态变化及诱导CTLs产生的体外杀伤肝癌细胞作用进行了观察,以其明确rhHSP70联合肝癌冻融抗原共同修饰DCs后,体外可诱导产生针对肝癌细胞的高效杀伤作用,并初步探讨了rhHSP70增强DCs疫苗抗肿瘤能力的机制,为设计以DCs为基础的针对肝癌的生物治疗的高效瘤苗提供实验依据和理论基础。方法分离健康人外周血获得单个核细胞,经粒-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF）,白细胞介素4（interleukin-4,IL-4）诱导生成DCs,负载冻融抗原的同时加入rhHSP70,分为四组:①A组:DCs+冻融抗原（Ag）;②B组:DCs+rhHSP70;③C组:DCs+Ag+rhHSP70;④D组:单独DCs。流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测各组DCs表型（CD80,CD83,CD86）变化,倒置显微镜和扫描电镜观察各组DCs形态特点。不同分组修饰的DCs激活淋巴细胞生成CTLs,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测DCs刺激淋巴细胞增殖能力以及CTLs对肝癌细胞的体外杀伤活性,荧光染色观察各组肝癌细胞凋亡差异。结果 rhHSP70,冻融抗原及二者联合修饰的DCs表型较对照组相比差异显著（P＜0.05）。CD80:A组为80.2±2.5%,B组为79.6±2.6%,C组为81.6±2.3%,D组为21.5±1.4%。CD83:A组为71.3±2.9%,B组为68.3±2.4%,C组为73.4±2.1%,D组为33.4±2.4%。CD86:A组为74.2±3.6%,B组为75.3±4.8%,C组为82.5±5.0%,D组为48.2±2.8%。光镜及扫描电镜下可见rhHSP70,冻融抗原及二者联合修饰的DCs较对照组树枝状突起明显增加,表现出成熟DCs的形态特征,而对照组表现出相对不成熟DCs的形态特征。不同分组修饰的DCs刺激淋巴细胞增殖能力不同,结果以增殖指数（proliferation index,PI,增殖指数=实验组OD值/对照组OD值）表示。其中A组为2.10±0.05,B组为2.06±0.05,C组为2.60±0.06,D组为1.20±0.05,PI以C组为最高,与其他两试验组（A,B组）相比差异显著（P＜0.05）,其次为A组,但A组与B组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。不同分组DCs呈递肿瘤抗原诱导的CTL产生杀伤率不同,杀伤百分率=（1-实验组的OD值/对照组的OD值）×100%。在效靶比（效应细胞:靶细胞,即CTLs:肝癌细胞）为10:1,20:1,50:1时,A组杀伤率分别为40.27±4.89%,47.13±8.05%,51.64±6.73%,B组杀伤率分别为13.58±4.77%,12.13±4.26%,15.57±5.55%,C组杀伤率分别为61.09±7.89%,64.71±3.90%,74.59±3.34%,D组杀伤率分别为11.94±4.11%,13.90±4.11%,13.52±4.61%,在三种效靶比下杀伤率以C组为最高,与其他两试验组（A组,B组）相比差异显著（P＜0.05）,更远强于对照组（P＜0.05）;其次为A组;B组与D组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 rhHSP70联合肝癌冻融抗原修饰DCs,能够促进DCs的成熟,增强DCs刺激淋巴细胞增殖的能力,诱导的CTLs在体外对肝癌细胞能产生高效杀伤。rhHSP70增强DCs抗肿瘤能力的机制可能与其促进DCs成熟有关。

关键词：重组人热休克蛋白70 树突状细胞冻融抗原肝癌

DC-白血病细胞融合及白血病细胞冻融抗原负载DC诱导特异性T细胞应答的比较

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DC-白血病细胞融合及白血病细胞冻融抗原负载DC诱导特异性T细胞应...

作者：盛立霞苏州大学

学位级别：硕士

目的:比较树突状细胞(DC)与白血病细胞融合及白血病细胞冻融抗原负载DC两种白血病DC疫苗诱导抗原特异性CTL应答的能力,旨在寻求DC白血病疫苗的最佳抗原负载方案,为设计安全、高效的DC疫苗提供实验依据。方法:取健康志愿者外周血200... 详细信息

目的:比较树突状细胞(DC)与白血病细胞融合及白血病细胞冻融抗原负载DC两种白血病DC疫苗诱导抗原特异性CTL应答的能力,旨在寻求DC白血病疫苗的最佳抗原负载方案,为设计安全、高效的DC疫苗提供实验依据。方法:取健康志愿者外周血200mL,肝素抗凝,采用羟乙基淀粉-Ficoll两步法分离获得单个核细胞(PBMC),用RPMI1640洗4～5次去除血小板,用10%FBS-RPMI1640调整细胞的密度为2×10/L,接种于24孔培养板中,37℃、5%CO培养箱中孵育2h后,洗去非贴壁的细胞(培养CTL用),收集贴壁的细胞用含rhGM-CSF(8×10IU/L)、rhIL-4(8×10IU/L)的完全培养基在37℃、5%CO培养箱中培养,每3d半量换液并补充新鲜的细胞因子,于培养的第5天,将DC分成4组:A组(融合组),将DC与K562细胞或原代慢性粒细胞白血病(CML)细胞在500g/L PEG-100mL/L DMSO诱导下融合;B组(冻融抗原负载DC组)加入相应细胞数量的白血病细胞冻融抗原;C组(共培养组),将K562细胞或CML细胞与DC共培养:D组为未负载抗原的单独DC培养组。部分K562细胞先标记上红色荧光染料PKH26再与DC融合,采用流式细胞仪(FCM)检测PKH26/FITC-抗HLA-ABC抗体双标细胞并评估融合率。于培养的第6天,加入TNF-α诱导DC成熟,于第8天将各组细胞分别与自体T细胞共培养5d,用MTT比色法检测各组自身混合淋巴细胞反应,并以K562或CML细胞的冻融抗原负载的自体DC作为靶细胞,MTT比色法检测各组CTL的MHC限制性抗原特异性杀伤作用。结果:GM-CSF加IL-4和TNF-α依次诱导成熟的DC具有经典的形态特征,并表达DC的特性标记CD83和CD1a,同时可表达高水平的CD80、CD86等共刺激分子及HLA-DR。在倒置显微镜下可见在融合剂PEG-DMSO的介导下,部分K562细胞与DC先发生细胞膜融合,形成双核或多核的细胞,然后,细胞胞核也逐渐发生融合,形成K562细胞与DC的杂交细胞。在PEG-DMSO作用下,白血病细胞与DC杂交细胞的形成率在(17.33～29.94)%。在S∶R为1∶50时,A、B、C及D组对T细胞的刺激指数(S1)分别为3.12±0.11、3.16±0.12、3.18±0.10和3.08±0.03(P>0.05),而FCM检测发现,冻融抗原负载组及融合组扩增的自身淋巴细胞中CD8Tc细胞的比率可明显增加,分别由诱导前的(32.63±4.76)%升至(63.25±6.23)%和(69.32±5.69)%

关键词：树突状细胞白血病细胞细胞融合冻融抗原特异性CTL

冻融抗原冲击致敏的树突状细胞抗肿瘤作用的研究

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医药论坛杂志 2010年第1期31卷 32-35页

作者：任颖银平章孔令非河南省人民医院病理科郑州市450003

目的研究MC-38肿瘤冻融抗原致敏的树突状细胞(DC)对荷瘤小鼠是否有抗肿瘤作用。方法用MC-38肿瘤冻融抗原体外冲击致敏小鼠骨髓来源的DC,观察其诱导的CTL对MC-38肿瘤细胞的杀伤活性;体内以1×106DC/只多次接种于已荷瘤小鼠同侧腹股沟皮下... 详细信息

目的研究MC-38肿瘤冻融抗原致敏的树突状细胞(DC)对荷瘤小鼠是否有抗肿瘤作用。方法用MC-38肿瘤冻融抗原体外冲击致敏小鼠骨髓来源的DC,观察其诱导的CTL对MC-38肿瘤细胞的杀伤活性;体内以1×106DC/只多次接种于已荷瘤小鼠同侧腹股沟皮下,观察抗原冲击的DC对肿瘤生长的抑制作用以及对荷瘤小鼠生存期的影响。结果体外抗原冲击致敏的DC诱导的CTL对MC-38肿瘤细胞具有显著的杀伤作用,在效靶比为50∶1,25∶1,12.5∶1,6.25∶1时其杀伤率分别为68.84%,58.36%,41.56%,24.96%,;抗原冲击致敏的DC体内多次皮下免疫后对肿瘤的生长具有显著的抑制作用,能显著延长荷瘤小鼠的生存期。结论肿瘤冻融抗原致敏DC多次皮下免疫对荷瘤小鼠具有显著的抗肿瘤作用。

关键词：树突状细胞免疫治疗冻融抗原

负载卵巢癌冻融抗原对树突状细胞分泌细胞因子的影响

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临床输血与检验 2009年第3期11卷 193-198页

作者：李素萍杨宏友王震吕蓉方勤赵刚李敏刘忠安徽省合肥市红十字会中心血站合肥230031 Progenics Cord Blood Cryobank 中国科技大学热科学和能源工程系

目的探讨负载卵巢癌冻融抗原对树突状细胞分泌细胞因子的影响。方法采用反复冻融法获得卵巢癌细胞株SKOV3细胞抗原,联合应用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、重组人白细胞介素-4和重组人肿瘤坏死因子-α,体外诱导人外周血CD14+单核... 详细信息

目的探讨负载卵巢癌冻融抗原对树突状细胞分泌细胞因子的影响。方法采用反复冻融法获得卵巢癌细胞株SKOV3细胞抗原,联合应用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、重组人白细胞介素-4和重组人肿瘤坏死因子-α,体外诱导人外周血CD14+单核细胞为成熟DCs并负载卵巢癌肿瘤抗原;采用ELISA法检测培养细胞上清液中分泌IL-12p70、IFN-γ和IL-10含量,评价非成熟DCs和成熟DCs以及肿瘤抗原负载DCs和未负载肿瘤抗原DCs激活的CTL分泌细胞因子的能力。结果联合应用重组人的GM-CSF、IL-4和TNF-α可在体外诱导出成熟DCs;经ELISA方法检测,不同状态下的DCs分泌IL-12p70、IFN-γ的量不同,成熟DCs较非成熟DCs有更强的分泌IL-12p70、IFN-γ的能力(P抗原DCs激活的CTL较未负载抗原DCs激活的CTL有更强的分泌IL-12p70[(182.89±4.57)pg/ml和(99.76±5.42)pg/ml,P0.05)。负载抗原后DCs激活的CTL与未负载抗原DCs激活CTL上清液中IL-10的浓度相比,两者之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论细胞因子的分泌量受DCs的成熟状态及某些刺激信号的影响,卵巢癌冻融抗原是其刺激信号之一。

关键词：树突状细胞细胞因子卵巢癌冻融抗原

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肝癌细胞冻融抗原制备树突状细胞瘤苗的研究

岭南现代临床外科 2003年第1期3卷 57-59页

作者：高维实闵军褚忠华陈涛魏箐区庆嘉中山大学附属第二医院普外科广州510120 中山大学附属第二医院中心实验室广州510120

目的探讨获得高效肝癌树突状细胞瘤苗(Dendritic Cells,DCs瘤苗)的优化方法。方法取健康人新鲜血,Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMC),诱导DCs。A组:用重组人粒巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)诱导DCs,B组:... 详细信息

目的探讨获得高效肝癌树突状细胞瘤苗(Dendritic Cells,DCs瘤苗)的优化方法。方法取健康人新鲜血,Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMC),诱导DCs。A组:用重组人粒巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)诱导DCs,B组:用GM-CSF和IL-4诱导,肝癌细胞冻融抗原冲击,C组:用GM-CSF、IL-4和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导,D组:用GM-CSF、IL-4和TNF-α诱导,肝癌细胞冻融抗原冲击。结果荧光抗体CD11c和CD54均高表达,各组间无显著性差异(P>0.05),TNF-α可明显上调CD86和CD80表达(P冻融抗原可进一步激活不同条件下诱导的DCs,促进CD86、CD80和人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)表达。结论经GM-CSF、IL-4加TNF-α诱导的DCs可有效的摄取肝癌细胞冻融抗原,促进DCs的成熟,可制备高效的肝癌DCs瘤苗,用于肝癌过继性免疫治疗。

关键词：树突状细胞肝癌细胞冻融抗原

宫颈癌细胞冻融抗原负载树突状细胞激发细胞毒性T淋巴细胞杀伤宫颈癌细胞的体外研究

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浙江预防医学 2005年第10期17卷 1-3页

作者：王健敏程琪浙江大学医学院附属妇产科医院浙江杭州310006

目的研究HeLa、SiHa两种宫颈癌细胞株冻融抗原负载的树突状细胞(dendritic cells,DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外抗原特异性杀伤宫颈癌细胞的能力。方法利用免疫磁珠分离法(MACS)分离纯化脐血CD34+细胞并在体外诱导分化为DC,用反复... 详细信息

目的研究HeLa、SiHa两种宫颈癌细胞株冻融抗原负载的树突状细胞(dendritic cells,DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外抗原特异性杀伤宫颈癌细胞的能力。方法利用免疫磁珠分离法(MACS)分离纯化脐血CD34+细胞并在体外诱导分化为DC,用反复冻融法分别从两种宫颈癌细胞株(HeLa利SiHa)中提取可溶性冻融抗原并负载DC。流式细胞学检测负载两种抗原后DC表面分子的表达,ELISA法检测DC上清中IL-12的表达,MLR测定DC刺激T细胞增殖的能力,MTT法检测DC经抗原负载后激活的CTL分别对HeLa和SiHa细胞的杀伤作用。结果与未经抗原负载的DC相比,经HeLa和SiHa冻融抗原负载的DC能更好的表达各种DC分化相关抗原(CD1α、CD83、CD80、HLA-DR以及CD54),刺激T淋巴细胞增殖和IL-12分泌的能力也显著加强(P抗原负载相比,两种宫颈癌细胞冻融抗原负载DC后激发的CTL在体外对宫颈癌细胞的杀伤能力也明显加强。此外,HeLa细胞抗原负载DC诱导的CTL在体外对HeLa细胞的杀伤率为72.2%,显著高于它对SiHa细胞的杀伤率(22.3%);而SiHa细胞抗原负载DC诱导的CTL对SiHa细胞的杀伤率为69.5%,也明显高于它对HeLa细胞的杀伤率(28.1%),具有显著的抗原特异性。结论经宫颈癌细胞冻融抗原负载DC激活的CTL在体外具有更强的增殖能力,并具有抗原特异性杀伤宫颈癌细胞的作用。

关键词：树突状细胞宫颈癌冻融抗原细胞毒性T淋巴细胞