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冷诱导rna结合蛋白(CIRP)过表达载体的构建及鉴定

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应用与环境生物学报 2015年第2期21卷 381-384页

作者：李静辉孟宇李玉恒李昌盛杨焕民李士泽黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 黑龙江八一农垦大学食品学院大庆163319

为构建携带冷诱导rna结合蛋白(Cold inducible rna-binding protein,CIRP)的过表达载体,首先从4℃条件下冷处理8 h的SD大鼠睾丸组织中获得CIRP基因的c DNA序列,然后扩增CIRP基因的编码区,将其克隆到真核表达载体p Lenti6/V5中,酶切鉴定... 详细信息

为构建携带冷诱导rna结合蛋白(Cold inducible rna-binding protein,CIRP)的过表达载体,首先从4℃条件下冷处理8 h的SD大鼠睾丸组织中获得CIRP基因的c DNA序列,然后扩增CIRP基因的编码区,将其克隆到真核表达载体p Lenti6/V5中,酶切鉴定并测序.将克隆成功的质粒转染HEK293T细胞,用Western blot检测CIRP的表达水平.成功扩增CIRP编码区,并将其克隆至载体p Lenti6/V5中;当将CIRP过表达载体转染HEK293T细胞后,Western blot检测结果显示CIRP蛋白表达水平明显增加(P<0.01).本研究成功构建了CIRP过表达载体,为进一步研究CIRP的作用机制提供了基础工具.

关键词：冷诱导rna结合蛋白过表达质粒冷应激

冷诱导rna结合蛋白的生物学功能与信号通路

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中国生物化学与分子生物学报 2018年第7期34卷 697-705页

作者：刘和宇夏伟华中科技大学同济医学院计划生育研究所武汉430030 华中科技大学同济医学院生殖医学中心武汉430030

冷诱导rna结合蛋白(cold-inducible rna-binding protein,CIRBP)是哺乳动物体内发现的第一个冷诱导蛋白质。这种蛋白质在机体内各个组织与器官中均广泛表达,并在正常生理状态或应激条件下,广泛参与多个生物学过程,例如细胞增殖、发展、... 详细信息

冷诱导rna结合蛋白(cold-inducible rna-binding protein,CIRBP)是哺乳动物体内发现的第一个冷诱导蛋白质。这种蛋白质在机体内各个组织与器官中均广泛表达,并在正常生理状态或应激条件下,广泛参与多个生物学过程,例如细胞增殖、发展、凋亡、分化和生物节律调节等多个方面。随着研究的深入,发现CIRBP具有一些新的功能,例如在一些炎症的发生和肿瘤的发生过程中,起到促进作用与作为新一代的原癌基因等。CIRBP发挥作用的信号通路,主要有胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinases/mitogen-activated protein kinases,ERK/MAPK)、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/PKB)、无翅和整合基因(wingless and integration 1,Wnt)、核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)等。本文针对CIRBP的生物学功能和相关信号通路的最新研究进展加以综述,希望能为细胞生物学基础研究与利用该蛋白质进行临床有关疾病的诊治提供新的思路。

关键词：冷诱导rna结合蛋白转录后调节细胞外调节蛋白激酶促炎因子肿瘤发生

冷诱导rna结合蛋白参与小鼠H1N1甲型流感病毒感染的应答

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畜牧兽医学报 2016年第8期47卷 1652-1657页

作者：聂培婷汤承岳华西南民族大学生命科学与技术学院成都610041 新疆天康畜牧生物技术股份有限公司制药事业部乌鲁木齐830011

冷诱导rna结合蛋白(CIRP)是哺乳动物间高度保守的多功能蛋白,但其在病毒感染中的作用尚不清楚,本研究旨在探讨CIRP对甲型流感病毒感染的应答。用H1N1甲型流感病毒PR-8株滴鼻接种成年BALB/c小鼠,分别于感染后24、48、72、96、120h随机处... 详细信息

冷诱导rna结合蛋白(CIRP)是哺乳动物间高度保守的多功能蛋白,但其在病毒感染中的作用尚不清楚,本研究旨在探讨CIRP对甲型流感病毒感染的应答。用H1N1甲型流感病毒PR-8株滴鼻接种成年BALB/c小鼠,分别于感染后24、48、72、96、120h随机处死3只,用荧光定量RT-PCR和免疫组化法分别检测小鼠心、肝、脾和肺中CIRP基因和蛋白质的表达水平。基因定量检测结果显示,感染小鼠各被检器官中Cirp mrna的转录量显著升高;免疫组化试验结果显示,CIRP在感染小鼠心肌细胞、肺泡上皮细胞、肺支气管上皮细胞和脾淋巴细胞的细胞质中表达量均有不同程度的升高。综上可见,CIRP参与机体对H1N1甲型流感病毒感染的应答,由于CIRP对炎性因子产生过程具有显著的调节作用,其在流感病毒感染过程中的作用值得深入研究。

关键词：冷诱导rna结合蛋白甲型流感病毒荧光定量RT-PCR 免疫组化

冷诱导rna结合蛋白参与小鼠对LPS的应答

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畜牧兽医学报 2014年第8期45卷 1348-1354页

作者：周鸿淼汤承岳华唐佳佳西南民族大学生命科学与技术学院成都610041

旨在研究冷诱导rna结合蛋白(CIRP)是否参与机体对LPS的应答。将48只BALB/c小鼠随机分为4组,其中1~3组为LPS刺激组,分别按体重腹腔注射2.5、5、7.5 mg·kg^(-1)的LPS,第4组为健康对照组,腹腔注射等体积生理盐水。于注射后3、6、12、18 h... 详细信息

旨在研究冷诱导rna结合蛋白(CIRP)是否参与机体对LPS的应答。将48只BALB/c小鼠随机分为4组,其中1~3组为LPS刺激组,分别按体重腹腔注射2.5、5、7.5 mg·kg^(-1)的LPS,第4组为健康对照组,腹腔注射等体积生理盐水。于注射后3、6、12、18 h每组随机挑选3只小鼠,无痛处死后采取各组小鼠的心、肝、脾和肾,用本研究建立的荧光定量RT-PCR检测各组织中Cirp mrna的转录水平,用免疫组化法研究CIRP蛋白在各组织中的表达情况。荧光定量RT-PCR检测结果显示,LPS刺激后小鼠各被检器官中CirP mrna的转录水平显著升高,而心中Cirp mrna的转录水平则显著降低;免疫组化试验结果显示,LPS刺激后小鼠心、肝、脾和肾中;IRP的表达量均显著增加,且有显著的时效性。本研究证实CIRP参与小鼠对LPS的应答,为鉴定CIRP的新功能提供了证据。

关键词：冷诱导rna结合蛋白脂多糖荧光定量RT-PCR 免疫组化

冷诱导rna结合蛋白通过激活NF-κB信号通路影响H1N1甲型流感病毒的复制

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畜牧兽医学报 2016年第10期47卷 2108-2114页

作者：聂培婷汤承岳华西南民族大学生命科学与技术学院成都610041

冷诱导rna结合蛋白(CIRP)是NF-κB和ERK信号通路的上游调控因子,而这两条信号通路是甲型流感病毒复制和机体起始免疫所必需的,为探讨CIRP对H1N1甲型流感病毒复制的影响及可能的分子机制,构建了CIRP过表达BHK-21细胞系(Cirp+BHK-21),用We... 详细信息

冷诱导rna结合蛋白(CIRP)是NF-κB和ERK信号通路的上游调控因子,而这两条信号通路是甲型流感病毒复制和机体起始免疫所必需的,为探讨CIRP对H1N1甲型流感病毒复制的影响及可能的分子机制,构建了CIRP过表达BHK-21细胞系(Cirp+BHK-21),用Western blot检测NF-кB和ERK1/2的磷酸化水平,研究CIRP对NF-кB和ERK1/2的调节作用;用Real-time RT-PCR检测H1N1甲型流感病毒感染后Cirp+BHK-21和对照细胞中病毒拷贝数的动态变化,以及在特异性阻断剂PDTC阻断NF-кB通路的Cirp+BHK-21细胞中病毒拷贝数的动态变化。Western blot检测结果显示:过表达CIRP显著促进了BHK-21细胞中NF-κB的磷酸化水平(P<0.05),而对ERK1/2的磷酸化水平无显著影响;病毒定量检测结果显示:过表达CIRP能显著促进H1N1甲型流感病毒的增殖,感染后3、9、15、21h病毒在Cirp+BHK-21细胞中的拷贝数分别为对照组的111%、103%、167%和235%(P<0.05);阻断NF-κB信号通路后病毒的拷贝数显著下降,在感染后3、9、15、21h分别为未阻断组的98%、42%、19%(P<0.05)和7%(P<0.05)。从本研究结果可见,CIRP可通过活化NF-κB信号通路促进H1N1甲型流感病毒的复制。

关键词：冷诱导rna结合蛋白 H1N1甲型流感病毒病毒复制 NF-κB BHK-21细胞

冷诱导rna结合蛋白在多种应激反应中的作用

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生命科学 2022年第9期34卷 1181-1189页

作者：曹宏伟黄清宇张蕾天津大学生命科学学院天津300072 内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010021

冷诱导rna结合蛋白(cold-inducible rna-binding protein,CIRBP)为最早在哺乳动物中发现的冷休克蛋白,可伴随温和低温、缺氧、紫外线照射等条件而大量表达,是一种参与多个生物学和疾病过程的应激反应蛋白。在应激条件下,CIRBP可上调自... 详细信息

冷诱导rna结合蛋白(cold-inducible rna-binding protein,CIRBP)为最早在哺乳动物中发现的冷休克蛋白,可伴随温和低温、缺氧、紫外线照射等条件而大量表达,是一种参与多个生物学和疾病过程的应激反应蛋白。在应激条件下,CIRBP可上调自身表达,并从细胞核向细胞质转移,通过稳定特定的mrna促进其翻译,使细胞对环境信号做出快速反应,帮助细胞适应新的环境条件。该文针对应激条件下CIRBP的表达调控以及CIRBP参与促炎症、肿瘤发生、抗凋亡过程中的应激反应的新发现加以综述,阐述CIRBP在细胞应激反应中的可能机制,希望利用该蛋白的相关功能为有关疾病的诊治提供理论基础。

关键词：冷诱导rna结合蛋白应激反应促炎症抗凋亡肿瘤发生

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冷诱导rna结合蛋白生物学功能的研究进展

中国免疫学杂志 2019年第7期35卷 892-896,F0003页

作者：陈灵修王世波重庆三峡中心医院呼吸内科重庆404000

冷诱导rna结合蛋白(Cold-inducible rna-binding protein,CIRP)是在哺乳动物中第一个被发现的冷休克蛋白,广泛表达于各种组织细胞中,且伴随冷应激、缺氧应激、紫外线照射、渗透压应激等过程而过量表达。CIRP是一种多功能的生理活性物质... 详细信息

冷诱导rna结合蛋白(Cold-inducible rna-binding protein,CIRP)是在哺乳动物中第一个被发现的冷休克蛋白,广泛表达于各种组织细胞中,且伴随冷应激、缺氧应激、紫外线照射、渗透压应激等过程而过量表达。CIRP是一种多功能的生理活性物质。在应激反应过程中,CIRP可从细胞核转移至细胞浆,主要通过调节靶蛋白基因转录后水平参与诸多细胞调节过程,如细胞的增殖和分化、细胞生存与凋亡、肿瘤的发生发展及生物节律变化等。此外,CIRP还可以通过直接与细胞内信号分子相互作用而发挥生物学效应。不仅如此,CIRP还可以被分泌到细胞外。细胞外的CIRP是一个重要的促炎因子,在急慢性炎症疾病过程中扮演着重要角色。本文就其最新研究进展作一综述,以期为利用该蛋白开展更深入的基础研究和治疗临床相关疾病奠定一定的理论基础。

关键词：冷诱导rna结合蛋白应激生物学功能

冷诱导rna结合蛋白促进冷冻保存大鼠坐骨神经异体移植后神经再生的作用

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中国康复理论与实践 2018年第4期24卷 391-400页

作者：李子健黄英如曾欢欢汪一张松重庆医科大学中医药学院针灸骨伤教研室重庆市400016 中医药防治代谢性疾病重庆市重点实验室重庆市400016

目的探讨冷诱导rna结合蛋白(CIRP)对冷冻保存大鼠坐骨神经活性及同种异体移植后神经再生的影响。方法将15 mm雄性Sprague-Dawley大鼠坐骨神经片段置于DMEM溶液中,分别在4℃、15℃、32℃预处理24 h(A组、B组、C组),设置新鲜神经组(D组)。... 详细信息

目的探讨冷诱导rna结合蛋白(CIRP)对冷冻保存大鼠坐骨神经活性及同种异体移植后神经再生的影响。方法将15 mm雄性Sprague-Dawley大鼠坐骨神经片段置于DMEM溶液中,分别在4℃、15℃、32℃预处理24 h(A组、B组、C组),设置新鲜神经组(D组)。RT-PCR和Western blotting检测CIRP m rna和蛋白表达。将上述4组神经置于冷冻保存液中液氮保存4周,Calcein-AM/PI荧光染色、激光共聚焦显微镜观察保存后神经活细胞、死细胞情况,Western blotting检测Bax、Bcl-2蛋白表达。取冷冻保存4周的坐骨神经,37℃、5%CO2培养7 d,Western blotting检测神经生长因子(NGF)、神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)蛋白表达;用冷冻保存4周或新鲜雄性Sprague-Dawley大鼠坐骨神经,修复对应的雄性Wistar大鼠坐骨神经10 mm缺损(A′组、B′组、C′组、D′组、E′组),设立同系移植新鲜组(F′组)。术后4周,免疫组化染色观察移植段神经CD+4T淋巴细胞入侵,ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-6、干扰素(IFN)-γ水平;术后20周,电生理检测肌肉复合动作电位(CMAP)和运动神经传导速度(MNCV),甲苯胺蓝染色分析再生有髓神经纤维数目和髓鞘厚度,电镜观察再生神经超微结构。结果 C组神经CIRP m rna及蛋白表达均高于A组和B组(P冷冻保存4周后,与A组、B组、D组相比,C组神经活细胞数量较多,Bax表达降低(P冷冻保存神经分泌NGF、GDNF表达均高于A组和B组(P0.05)。术后20周,C′组CMAP、MNCV、再生神经轴突密度及髓鞘厚度均优于A′、B′、D′组和E′组(P冷冻保存大鼠坐骨神经具有保护作用,能维持保存后神经的生物活性,促进同种异体移植后受体神经再生。

关键词：周围神经损伤冷诱导rna结合蛋白冷冻保存同种异体移植神经再生

冷诱导rna结合蛋白在放射性肺损伤模型中的表达变化

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中国辐射卫生 2022年第1期31卷 33-38,46页

作者：牛世英丛昌盛孙美丽姜一帆杨彤王兆朋张月英山东第一医科大学(山东省医学科学院)基础医学院山东济南250062 山东第一医科大学附属济南市中心医院肿瘤科山东济南250013

目的探讨冷诱导rna结合蛋白(CIRBP)在放射性肺损伤模型中的表达变化。方法将30只雄性C57BL/6小鼠按体重随机分为2组,每组15只,对照组小鼠不做任何处理,模型组小鼠经20 Gy X射线单次胸部照射,构建放射性肺损伤模型,于照射后5周解剖。采... 详细信息

目的探讨冷诱导rna结合蛋白(CIRBP)在放射性肺损伤模型中的表达变化。方法将30只雄性C57BL/6小鼠按体重随机分为2组,每组15只,对照组小鼠不做任何处理,模型组小鼠经20 Gy X射线单次胸部照射,构建放射性肺损伤模型,于照射后5周解剖。采用苏木素-伊红(H&E)染色和Masson染色观察肺组织病理改变及胶原的沉积;采用免疫组织化学法检测肺组织炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达;采用qRT-PCR技术检测肺组织中CIRBP mrna的表达;采用免疫荧光技术和Western blotting技术检测肺组织中CIRBP蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组肺组织血管扩张充血、炎细胞浸润、部分肺泡间隔增厚,IL-6的表达[(187.22±34.77) vs (129.41±5.58),t=3.179,P rna的表达明显升高[(1.97±0.39) vs (1±0.08),t=3.45,P 蛋白表达均明显升高[(14.76±1.61) vs (9.32±1.26),t=3.751,P <0.05;(1.49±0.14) vs (1.13±0.17),t=2.819,P <0.05],差异具有统计学意义。结论 CIRBP在放射性肺损伤模型中的表达明显升高,其可能是放射性肺损伤过程中的重要促炎因子。

关键词：放射性肺损伤冷诱导rna结合蛋白表达变化小鼠