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复方甘草酸苷对肝脏冷缺血损伤的保护作用及HMGB1调控作用的实验研究

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复方甘草酸苷对肝脏冷缺血损伤的保护作用及HMGB1调控作用的实验...

作者：龚腾泸州医学院

学位级别：硕士

目的：探讨复方甘草酸苷（Compound Glycyrrhizin,CG）对大鼠离体肝脏冷缺血损伤的保护作用及其对高迁移率蛋白B1（High MobilityGroup Box,HMGB1）调控作用，并探讨其可能机制，为肝细胞保护提供新的措施。方法：100只健康成年SD大鼠... 详细信息

目的：探讨复方甘草酸苷（Compound Glycyrrhizin,CG）对大鼠离体肝脏冷缺血损伤的保护作用及其对高迁移率蛋白B1（High MobilityGroup Box,HMGB1）调控作用，并探讨其可能机制，为肝细胞保护提供新的措施。方法：100只健康成年SD大鼠随机均分为五组。CG干预组分为低（CGL）、中（CGM）、高（CGH）三个组，其根据HTK液中加入不同体积的CG,分别为HTK+CGI(1/100)、HTK+CGI(1/75)、HTK+CGI(1/50)三个组，对照组(CON组）HTK保存液中不加入CG,假手术组灌注后仅做游离。运用肝脏离体非循环再灌注模型（Acyclic Isolated Reperfused Rat liver Model，AIPRL）模型的改进型模拟大鼠肝脏冷缺血模型。肝脏冷缺血12h后0.4%台盼蓝溶液给予门静脉灌注测定肝脏微循环;观察冷缺血12h后的病理形态改变;测定肝脏冷保存12h后大鼠肝脏灌注流出液的酶学;使用酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)分析大鼠肝脏冷保存12h后炎症因子表达水平;末端转移酶标记法（TUNEL法）测定大鼠肝组织细胞凋亡水平;免疫组织化学技术测高迁移率蛋白B1（High Mobility GroupBox,HMGB1）,Toll样受体4（Toll Like Receptor4，TLR4）, κ基因结合的核因子(Nuclear Factor Of Kappa b,NF-κb)。运用SPSS Statistics19统计软件行统计学分析，实验的统计数据以（x±s）表达,当P＜0.01表示结果有统计学差异。结果： 1．微循环检测：使用0.4%台盼蓝溶液在冷保存12h后给予门静脉灌注，各组肝脏左外叶达到均匀蓝染所需的时间CGL组、CGM组、CGH组分别为（83.9±2.3）S、（77.6±0.6）S、(73.5±1.1)S，明显低于CON组（104.0±12.7）S（P冷保存12h后CGL组、CGM组、CGH组肝脏灌注流出液中ALT含量分别为：（155.10±17.36）U/L、（117.92±11.51）U/L、(47.96±20.99) U/L，明显低于CON组（244.76±71.59）U/L（P＜0.01），高于SHAM组（3.94±1.43）U/L（P＜0.01）;干预组组内比较，CGH组低于CGM组、CGL组（P冷缺血保存12h后，CGL组、CGM组、CGH组肝组织内TNF-α含量分别为（133.09±45.86）pg/ml、（123.81.50±46.56）pg/ml、（115.63±44.28）pg/ml明显低于CON组（243.89±25.16）pg/ml（P<0.01）,但高于SHAM组（53.56±4.74）pg/ml（P<0.01）;干预组组内比较，CGH组低于CGL组（P<0.01）。CGL组、CGM组、CGH组肝组织内IL-6含量分别为：(110.51±13.78)pg/ml、(100.36±15.12)pg/ml、

关键词：复方甘草酸酐大鼠离体肝脏冷缺血肝脏保护高迁移率蛋白B1 Toll样受体4 κ基因结合核因子肿瘤坏死因子白介素-6

缺血预处理迟发反应对SD大鼠肾脏移植供体冷缺血的影响

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缺血预处理迟发反应对SD大鼠肾脏移植供体冷缺血的影响

作者：李飞南京医科大学

学位级别：硕士

目的:本课题通过研究缺血预处理的SD大鼠肾脏移植供体保存液pH值和乳酸脱氢酶活性的改变和肾脏皮质氧化应激水平的改变,探讨缺血预处理迟发反应对冷保存大鼠肾脏的保护作用以及其可能的分子机制。方法:(1)检测保存液pH值和乳酸脱氢酶活... 详细信息

目的:本课题通过研究缺血预处理的SD大鼠肾脏移植供体保存液pH值和乳酸脱氢酶活性的改变和肾脏皮质氧化应激水平的改变,探讨缺血预处理迟发反应对冷保存大鼠肾脏的保护作用以及其可能的分子机制。方法:(1)检测保存液pH值和乳酸脱氢酶活性,反映缺血预处理迟发反应对冷缺血肾脏损伤的影响;(2)检测肾脏皮质还原型谷胱甘肽和丙二醛含量变化,反映缺血预处理迟发反应对冷缺血肾脏氧化应激水平的影响;(3)应用免疫印迹法检测肾脏皮质血红素加氧酶-1的表达,反映缺血预处理迟发反应对肾脏血红素加氧酶-1表达的影响。结果:(1)迟发缺血预处理组保存24h、48h、72h保存液pH值均高于单纯保存组,血红素加氧酶-1抑制剂给药组与对照组没有统计学差异;(2)迟发缺血预处理组保存48h、72h保存液乳酸脱氢酶活性低于单纯保存组,抑制剂给药组各时点与对照组相比均无统计学差异;(3)迟发缺血预处理组保存24h、48h肾脏皮质还原型谷胱甘肽高于单纯保存组,丙二醛含量低于单纯保存组;抑制剂给药组各时点于对照组均无统计学差异。(4)缺血预处理诱导了肾脏皮质表达血红素加氧酶-1,并可持续到处理后96h,单纯低温保存没有影响血红素加氧酶-1的表达。结论:缺血预处理延迟保护作用减轻了冷缺血肾脏细胞损伤,减弱了氧化应激水平;这一作用的发挥与诱导血红素加氧酶-1表达有关。

关键词：肾脏移植冷缺血缺血预处理氧化应激血红素加氧酶-1

铁离子螯合剂（DFO）对肝细胞冷缺血损伤调节作用的实验研究

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铁离子螯合剂（DFO）对肝细胞冷缺血损伤调节作用的实验研究

作者：向证文泸州医学院

学位级别：硕士

目的：本研究通过模拟肝移植中肝脏的冷缺血及再灌注过程,在体外实验中探讨铁离子螯合剂-去铁敏(Desferrioxamine mesylate, DFO)对冷缺血状态下肝细胞的调节作用及可能机制,为进一步改善移植肝脏保存条件,改良移植器官保存方法提供理... 详细信息

目的：本研究通过模拟肝移植中肝脏的冷缺血及再灌注过程,在体外实验中探讨铁离子螯合剂-去铁敏(Desferrioxamine mesylate, DFO)对冷缺血状态下肝细胞的调节作用及可能机制,为进一步改善移植肝脏保存条件,改良移植器官保存方法提供理论支持。方法：正常人肝细胞(HL-7702)体外培养至对数生长期,随机给予DFO干预并设对照组,DFO干预各组根据我们小组国外前期实验经验,按照100μmol/L,50μmol/L分为高、中、低浓度组,模拟肝移植过程中肝脏的冷缺血及再灌注过程。倒置显微镜观察冷缺血8h和再灌注8h的细胞形态改变;分别测定冷缺血8h和再灌注8h的丙二醛(Malondiadehyde, MDA)及乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase, LDH)含量;流式细胞技术检测肝细胞冷缺血8h后的凋亡水平;原子吸收光谱法检测冷缺血8h后肝细胞内的Fe3+浓度。实验的统计数据均以均数±标准差(x±s)表达,运用SPSS16.0for windows统计软件作统计学分析,P冷缺血8h时,MDA含量,高、中、低浓度组分别为(1.83±0.63)nmol/ml,(2.60±0.26)nmol/ml,(2.74±0.32)nmol/ml,对照组(3.57±0.45)nmol/ml(P冷缺血8h及再灌注8h,高浓度组肝细胞内MDA含量低于中、低浓度组(P0.05)。(2) DFO干预高、中、低浓度组肝细胞培养上清在冷缺血8h时,LDH含量分别为(187.50±15.97)U/L,(230.99±14.04) U/L,(247.01±25.49) U/L,均低于对照组(287.16±28.82)U/L(P冷缺血8h及再灌注8h,高浓度组肝细胞培养上清内LDH含量低于中、低浓度组(P0.05)。(3)冷缺血8h后,DFO干预高、中、低浓度组的肝细胞凋亡率分别为(6.37±1.28)%、(14.07±1.61)%、(16.07±1.71)%,均显著低于对照组(20.53±1.58)%(P0.05)。DFO干预高浓度组正常肝细胞比例均高于中、低浓度组(P0.05)。(4)冷缺血8h后,DFO干预高、中、低浓度组肝细胞内铁离子浓度分别为(1.36±0.14)mmol/L、(1.92±0.24)]mmol/L、(2.09±0.28)mmol/L,低于对照组(2.58±0.27)mmol/L (P0.05)。结论：(1)在肝细胞的冷缺血过程中可产生大量的可螯合状态铁离子。(2)DFO干预可以降低MDA及LDH含量,表明其可减轻肝细胞冷缺血及再灌注过程中的氧化应激损伤。(3)DFO干预可以抑制冷缺血损伤诱导的肝细胞凋亡,其机制与DFO降低冷缺血阶段可螯合状态铁离子含量有关。(4)在本实验中,DFO干预高浓度组对肝细胞的保护效果更为明显。(5)在体外试验研究中,DFO干预可以减轻肝细胞冷缺血损伤,但在体内实验中的效果尚待进一步研究。

关键词：肝脏移植肝细胞系器官保存液冷缺血铁离子螯合剂去铁敏

基于LSCM技术实时评估冷缺血损伤肝脏质量

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基于LSCM技术实时评估冷缺血损伤肝脏质量

作者：方旭上海交通大学

学位级别：硕士

目的肝移植是治疗终末期肝病及急性肝功能衰竭最有效的手段。近年来,随着扩展供体标准的推广,术后早期移植物功能障碍的发生率升至23.7%。早期移植物功能障碍主要与供肝的长时间冷缺血有关,如何在供体肝脏被移植之前进行有效、准确的供... 详细信息

目的肝移植是治疗终末期肝病及急性肝功能衰竭最有效的手段。近年来,随着扩展供体标准的推广,术后早期移植物功能障碍的发生率升至23.7%。早期移植物功能障碍主要与供肝的长时间冷缺血有关,如何在供体肝脏被移植之前进行有效、准确的供肝质量评估尤为重要。本实验拟将激光扫描共聚焦显微镜技术及肝脏生化指标应用于实时供肝质量评估。方法我们采用SD大鼠构建供肝冷缺血模型,依据冷缺血的时间长短分成4组,每组5只,分别为:冷缺血1h组、冷缺血6h组、冷缺血12h组及冷缺血24h组。用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）对灌注了荧光剂的肝脏组织进行观察及图像采集,同时采集部分肝脏组织进行HE病理切片检查,最后将LSCM与HE病理组织切片两者观察结果进行比较。另外,我们采集了供肝相应冷缺血时长的保存液及再灌注液进行ALT、AST和LDH等指标检测,结果随着冷缺血时间的延长,肝脏质量逐渐下降。CIT1h组LSCM与HE均可见到细致紧密的肝脏组织微观结构;CIT6h组LSCM与HE观察结果显示组织结构紊乱,但尚可识别;CIT12h组LSCM观察的组织微观结构无法清楚观察,只能观察一些较粗血管结构,细胞核染色不佳;HE组织病理切片检查结果显示肝脏组织肝小叶等显微结构消失,细胞核同样染色不佳。在肝脏的保存液及再灌注液中的临床指标检测的结果显示,随着冷缺血时间的延长,ALT、AST及LDH的浓度均呈上升趋势。但只有LDH的差异具有统计学意义（***,P＜0.001）。结论激光扫描共聚焦显微镜能够在离体肝脏中观察到与HE病理组织切片类似的结果,操作简单及时效性是激光扫描共聚焦显微镜的一个显著的优点。LDH指标比ALT及AST具有更好的预测性作用。而且,LSCM形态学上的观察结合LDH指标的检测能更全面的评估供肝质量。

关键词：质量评估冷缺血激光扫描共聚焦显微镜肝功能乳酸脱氢酶

大鼠移植胰腺冷缺血再灌注后细胞凋亡及其调控基因的研究

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中华普通外科杂志 2004年第11期19卷 681-683页

作者：李玺张召辉江苏省徐州市解放军第九十七医院普通外科 221004

目的探讨胰腺移植再灌注后胰腺细胞凋亡发生的过程,以及Bax、Bcl2及Fas等调控基因的表达。方法65只SD大鼠随机分成7组假手术组,冷缺血2h组,冷缺血2h再灌注1、3、6、9、12h组。电镜观察胰腺组织的病理变化;采用缺口末端标记法(TUNEL)检... 详细信息

目的探讨胰腺移植再灌注后胰腺细胞凋亡发生的过程,以及Bax、Bcl2及Fas等调控基因的表达。方法65只SD大鼠随机分成7组假手术组,冷缺血2h组,冷缺血2h再灌注1、3、6、9、12h组。电镜观察胰腺组织的病理变化;采用缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞;采用免疫组织化学方法检测胰腺组织中Bax、Bcl2及Fas蛋白的表达。结果胰腺移植后早期即可观察到细胞凋亡,凋亡的高峰期为再灌注后3h,凋亡指数(AI)为(95±29)%,P冷缺血2h组均未见Bax、Fax蛋白表达。冷缺血再灌注1h组Bax(++)、Fas(+),未见Bcl2蛋白表达;至冷缺血再灌注3h组Bax及Fas表达均增强,分别为Bax(+++)、Fas(++),以后各组表达有所下降。Bcl2蛋白在假手术组、冷缺血2h组及冷缺血再灌注1h组均未见表达,冷缺血再灌注3h及以后各组表达为(+)。结论细胞凋亡是胰腺移植后的早期事件,Bax、Fas基因可能促进了胰腺细胞的凋亡,而Bcl2基因可能抑制细胞凋亡。

关键词：再灌注冷缺血细胞凋亡表达胰腺移植手术调控基因胰腺组织 Bcl-2 胰腺细胞

不同冷缺血时间供肝胆道耐受二次热缺血损伤的研究

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不同冷缺血时间供肝胆道耐受二次热缺血损伤的研究

作者：纪旭中国人民解放军军医进修学院

学位级别：硕士

目的探讨供肝胆道在不同冷缺血时间情况下，经历二次热缺血损伤后胆管上皮细胞结构改变及移植术后肝功能的变化，为供肝冷保存及术中选择门静脉和肝动脉血流开放顺序提供理论依据。材料和方法30例肝移植病人根据供肝胆道冷保存时间的... 详细信息

目的探讨供肝胆道在不同冷缺血时间情况下，经历二次热缺血损伤后胆管上皮细胞结构改变及移植术后肝功能的变化，为供肝冷保存及术中选择门静脉和肝动脉血流开放顺序提供理论依据。材料和方法30例肝移植病人根据供肝胆道冷保存时间的不同分为A、B两组。A组18人，冷缺血时间＜12h;B组12人，冷缺血时间＞12h。分别于门静脉、下腔静脉开放前和肝动脉开放前两个固定时间点取供肝肝外胆道作为研究标本，行光学显微镜和电子显微镜观察胆道上皮细胞结构变化。术后第1、2、3、7、15、30、60天取外周血测定谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)及γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)数值。随访病人1年内胆道并发症发生情况。结果门静脉、下腔静脉开放前所取胆道标本上皮细胞结构变化两组无明显差异。肝动脉开放前所取胆道标本中，B组胆道上皮细胞损伤程度较A组严重，差异显著。研究观察到胆道上皮细胞肿胀、细胞核皱缩、胞浆空泡变性、微绒毛断裂、基底层分离等受损变化，并且Hert1积分A、B两组间差异显著(p＜0.05)。两纽ALT及r-GT数值没有显著差异，但B组术后TBIL明显高于A组(p＜0.05)，且恢复至正常的时间明显长于A组(p＜0.05);同时，A组有两例发生术后胆道并发症，B组有一例发生术后胆道并发症。结论胆道冷缺血时间的延长经二次热缺血后能够导致胆道上皮细胞损伤加重;术后TBIL数值升高明显，且恢复至正常所需时间延长，表明冷缺血时间延长会使胆道耐受二次热缺血能力降低，从而使胆道所受损伤加重。因此，尽量减少供肝冷保存时间，对于供肝冷保存时间不可避免延长的受体，术中选择门静脉和肝动脉同时开放术式可以减轻胆道损伤程度。虽然随访结果显示并未增加病人术后胆道并发症发生机率，但因病例数所限，还需深入研究。

关键词：胆道上皮细胞冷缺血二次热缺血原位肝移植

冬虫夏草与肾缺血－再灌注损伤的研究─—大鼠肾脏冷缺血24小时的保护作用

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肾脏病与透析肾移植杂志 1994年第1期3卷 37-40页

作者：杨俊伟黎磊石南京金陵医院解放军肾脏病研究所

本文利用离体灌注肾技术（ＩＰＫ），观察了冬虫夏草（虫草）对大鼠肾脏冷缺血２４ｈ的保护作用。结果表明，虫草保护液组２４ｈ冷缺血后ＩＰＫ的灌注流量、菊糖清除率均高于对照组，灌注阻力低于对照组。同时，大剂量精氨破增加菊糖清... 详细信息

本文利用离体灌注肾技术（ＩＰＫ），观察了冬虫夏草（虫草）对大鼠肾脏冷缺血２４ｈ的保护作用。结果表明，虫草保护液组２４ｈ冷缺血后ＩＰＫ的灌注流量、菊糖清除率均高于对照组，灌注阻力低于对照组。同时，大剂量精氨破增加菊糖清除率，灌注流量的程度，也是虫草组优于对照组。此外，虫草组的钠、钾冉吸收能力也优于对照组。这说明，虫草确对冷缺血有保护作用，并提示该作用与其保护了内皮细胞功能有关。

关键词：离体灌注肾冬虫夏草冷缺血肾缺血再灌注损伤

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冷缺血对大鼠小体积肝移植肝再生的影响

岭南现代临床外科 2006年第3期6卷 170-172页

作者：何清陈燕涛王捷谷艳丽 Uta Dahmen Olaf Dirsch 中山大学附属第二医院SICU 广州510120 中山大学附属第二医院骨外科广州510120 中山大学附属第二医院普外科广州510120 德国Essen大学医院普通与移植外科德国essen45122 德国KWln大学医院病理科德国kln50924

目的探讨冷缺血对大鼠小体积肝移植术后肝再生的影响。方法本组在2002年9月～2004年8月利用大鼠肝总量30%原位肝移植模型,实验分为肝总量70%肝切除组(C组)和冷缺血1、3、5h组(E1、E2、E3组),观察1w生存率及肝重量/受体原肝重量比值(EGW/... 详细信息

目的探讨冷缺血对大鼠小体积肝移植术后肝再生的影响。方法本组在2002年9月～2004年8月利用大鼠肝总量30%原位肝移植模型,实验分为肝总量70%肝切除组(C组)和冷缺血1、3、5h组(E1、E2、E3组),观察1w生存率及肝重量/受体原肝重量比值(EGW/RLW),并检测术后1、2、3、7d肝细胞增殖活性及肝组织学变化。结果E1组1w生存率及EGW/RLW分别达100%和95%,均明显高于E2、E3组(P均0.05);组织学检查见E1组肝细胞核分裂明显活跃。结论冷缺血1h的小体积供肝和70%肝切除后肝脏具有同样的增殖活性,仅增殖高峰稍晚;冷缺血超过3h严重影响小体积供肝的再生能力和受者的存活率。

关键词：冷缺血小体积肝移植肝再生

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冷缺血时间对大鼠部分肝移植存活率的影响

肝胆外科杂志 2004年第1期12卷 55-57页

作者：王爱坤成峰王学浩李相成江苏盐城东南大学附属盐都县人民医院盐城224001 南京医科大学第一附属医院肝脏外科 224001

目的　建立新的稳定 5 0 %大鼠部分肝移植的模型上 ,研究不同冷缺血时间对移植术后存活率和肝再生的影响。方法　 A组为对照组 :5 0 %肝切除 ;实验组 :5 0 %部分肝移植组 (B、C、D组冷缺血时间分别为 4 5 min、4 h和 1 0 h)。观察各实... 详细信息

目的　建立新的稳定 5 0 %大鼠部分肝移植的模型上 ,研究不同冷缺血时间对移植术后存活率和肝再生的影响。方法　 A组为对照组 :5 0 %肝切除 ;实验组 :5 0 %部分肝移植组 (B、C、D组冷缺血时间分别为 4 5 min、4 h和 1 0 h)。观察各实验组生存率 ,并分别于移植术后 2 4 h、4 8h、96 h免疫组化检测各实验组增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达 ,采用统计学的方法分析不同冷缺血时间对大鼠部分肝移植术后 2 4小时存活率和肝再生的影响。结果　 B、C、D组存活率分别为 80 %、4 5 %、2 5 % ;PC-NA表达在术后 4 8小时达到峰值分别为 5 4± 5 .2 ;4 4± 3.0 ;2 0± 1 .9。D组 PCNA表达明显降低 (P<0 .0 5 )。结论　部分肝移植术后肝再生峰值较肝切除后延迟。

关键词：肝移植肝再生增殖细胞核抗原冷缺血