检索结果-南通市图书馆

中国组织工程研究 2023年第10期27卷 1572-1577页

作者：刁小娟石超群李栋王帅肖春刘国军曲廷瑜杨卫娟贾晓鹏山东省齐鲁干细胞工程有限公司山东省济南市250100 山东省脐带血造血干细胞库山东省济南市250100 山东大学齐鲁医院低温医学研究室山东省济南市250012

背景:从深低温冻存脐血中获得大量高纯度无滋养层细胞、无动物源成分的NK细胞,以便更好地开展NK细胞杀伤肿瘤的实验研究,此次研究通过使用NK扩增培养试剂盒和血清替代物,以获得安全、高效的体外扩增培养NK细胞的方法。目的:建立一种从... 详细信息

背景:从深低温冻存脐血中获得大量高纯度无滋养层细胞、无动物源成分的NK细胞,以便更好地开展NK细胞杀伤肿瘤的实验研究,此次研究通过使用NK扩增培养试剂盒和血清替代物,以获得安全、高效的体外扩增培养NK细胞的方法。目的:建立一种从冷冻脐血中采用纯细胞因子扩增NK细胞的技术体系并证明其体外杀瘤能力。方法:解冻液氮存储的冻存脐血,优化复苏体系,采用Ficoll密度梯度离心的方法收集脐血单个核细胞,接种于预先铺板的T175培养瓶中,采用细胞因子试剂盒+血清替代物法培养21 d后收集细胞并计数,应用流式细胞术检测细胞中CD3^(-)CD56^(+)的比例,并将所得数据与K562滋养层细胞+胎牛血清的培养方法进行对比分析。同时以髓系白血病细胞K562为靶细胞,采用CCK-8试剂盒检测不同效靶比NK细胞杀伤K562细胞的作用。最后进行了12 h内的模拟储存运输实验,采用流式检测CD3-CD56^(+)的比例变化,并使用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。结果与结论:(1)采用K562滋养层细胞+胎牛血清的培养方法扩增培养14 d,细胞扩增(51.47±4.28)倍;采用细胞因子试剂盒+血清替代物法扩增培养21 d,细胞数量5×10^(9)以上,细胞扩增(328.32±116.36)倍,细胞扩增倍数明显升高,2种方法获得的CD3^(-)CD56^(+)纯度比例均在80%以上,未见明显差异;(2)纯细胞因子方法培养后的NK细胞对K562细胞的杀伤效果(效靶比=10∶1)达80%以上;(3)在12 h的模拟储运实验中,CD3^(-)CD56^(+)的比例变化不明显,直至第12小时,NK细胞凋亡率<7%;(4)结果表明:优化复苏体系和纯细胞因子扩增方法可以高效培养出高纯度的NK细胞,同时具有有效杀伤K562肿瘤细胞的能力,且经过12 h储运后仍然具有良好的细胞纯度和较低的凋亡率。

关键词：冷冻脐血 NK细胞因子扩增细胞毒性凋亡率配型临床应用

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