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眼科新进展 1996年第4期16卷 201-202页

作者：邵建强张德添北京放射医学研究所军事医学科学院仪器测试中心电镜室

能量色散Ｘ线老年性白内障晶体冷冻制样方法与分析北京放射医学研究所邵建强军事医学科学院仪器测试中心电镜室张德添能量色故Ｘ线分析（ＥｎｅｒｇｙＤｉｓＰＰｆｓｉＶＣＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＸ－ｒａｙ简称ＥＤＡＸ）即利用检测特征... 详细信息

能量色散Ｘ线老年性白内障晶体冷冻制样方法与分析北京放射医学研究所邵建强军事医学科学院仪器测试中心电镜室张德添能量色故Ｘ线分析（ＥｎｅｒｇｙＤｉｓＰＰｆｓｉＶＣＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＸ－ｒａｙ简称ＥＤＡＸ）即利用检测特征Ｘ线能量来确定样品中的元素成分的一...

关键词： X线白内障老年性冷冻制样晶体制样

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红霉素合成酶DEBS 3分离纯化及冷冻制样的优化

红霉素合成酶DEBS 3分离纯化及冷冻制样的优化

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作者：易孝菡浙江大学

学位级别：硕士

聚酮化合物是一类具有抗感染、抗真菌、抗肿瘤和免疫抑制等多种生物学活性的天然产物,被广泛应用于临床实践。I型聚酮化合物合成酶（Type I PKSs）是一类能合成多种聚酮天然产物的多酶复合物,这些产物几乎占治疗药物的1/3。6-脱氧赤酮... 详细信息

聚酮化合物是一类具有抗感染、抗真菌、抗肿瘤和免疫抑制等多种生物学活性的天然产物,被广泛应用于临床实践。I型聚酮化合物合成酶（Type I PKSs）是一类能合成多种聚酮天然产物的多酶复合物,这些产物几乎占治疗药物的1/3。6-脱氧赤酮酸内酯B合酶3（6-Deoxyerythronolide B Synthase 3,DEBS 3）属于一种Type I PKS,其中一组小的酶蛋白组成了称作“模块（module）”的结构域（DEBS 3为二聚体,含有2个模块,整体大小约660 k Da）,用于催化每个聚酮化合物的延伸反应;催化作用的实现则是通过它的构象转变。由于DEBS 3的组成和构象的复杂性以及多样性,目前无法对全酶甚至是多酶复合物中的一个模块进行高分辨率的结构测定。为了拿到状态稳定的DEBS 3复合体用于结构解析,本课题首先优化了其基因序列,然后通过热稳定实验、孵育底物类似物、交联等方法,在表达、纯化及冷冻制样三方面筛选了多种条件,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳、分子排阻层析（Size Exclusion Chromatography,SEC）、负染及冷冻电镜结果检测蛋白状态,最终成功地得到了产量高且均一性好的目的蛋白,同时极大地增强了其稳定性。本研究筛选出的表达和纯化策略能够适用于其他的Type 1 PKSs,为药物的生产提供了实践基础。同时,经过优化所得的DEBS 3可以用于进一步的冷冻电镜研究,这是解析出其高分辨率冷冻电镜结构的重要前提。

关键词： DEBS3 热稳定实验交联底物类似物表达纯化冷冻制样

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竹纤维柱辅助断裂法在制备水凝胶冷冻扫描电子显微镜样品中的应用

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分析测试技术与仪器 2024年第5期30卷 279-285页

作者：万鹏宋海圆王松柏蔡蕊周雨萌大连理工大学分析测试中心辽宁大连116024 大连理工大学生物工程学院辽宁大连116024 大连理工大学化工学院辽宁大连116024

冷冻扫描电子显微镜(cryogenic scanning electron microscopy,cryo-SEM)是观察样品含水状态下真实微观形貌不可替代的分析手段,其中样品的冷冻断裂步骤是获得理想测试结果的关键步骤之一.水凝胶样品由于含水量丰富,质地柔软难以成形,... 详细信息

冷冻扫描电子显微镜(cryogenic scanning electron microscopy,cryo-SEM)是观察样品含水状态下真实微观形貌不可替代的分析手段,其中样品的冷冻断裂步骤是获得理想测试结果的关键步骤之一.水凝胶样品由于含水量丰富,质地柔软难以成形,在利用常规冷刀断裂方法进行冷冻断裂时,存在难以获得理想断裂面、断裂效率低等问题.因此创新性地提出了一种竹纤维柱辅助断裂方法,在样品冷冻固定前,将细小的竹纤维柱插入水凝胶样品顶端.冷冻断裂时,冷刀不直接作用在样品上,而是通过撬动与样品相连的竹纤维柱,实现样品与纤维柱接触部位的冷冻断裂.可轻松获得大范围可观测断裂面,且样品应力损伤小,无表面样品碎屑干扰,还可实现多个样品一次性同时断裂,是一种高质、高效的水凝胶冷冻断裂方法.

关键词：冷冻扫描电子显微镜冷冻制样冷冻断裂水凝胶竹纤维柱

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电镜-能谱仪在柳树叶重金属污染研究中的应用

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分析测试技术与仪器 2014年第2期20卷 79-82页

作者：杨静周则刚张敏徐柏森南京林业大学现代分析测试中心江苏南京210037 南京审计学院江苏南京211815 江苏省林业科学研究院江苏南京211153

采用自然干燥、化学处理、冷冻处理3种方法制备待测样本,运用扫描电镜和透射电镜结合X射线能谱仪研究柳树叶肉组织对重金属的累积状况,并定位到栅栏组织的细胞壁,为定性定量以及定位分析组织细胞固定、转移重金属污染探索合适的制样方法... 详细信息

采用自然干燥、化学处理、冷冻处理3种方法制备待测样本,运用扫描电镜和透射电镜结合X射线能谱仪研究柳树叶肉组织对重金属的累积状况,并定位到栅栏组织的细胞壁,为定性定量以及定位分析组织细胞固定、转移重金属污染探索合适的制样方法.结果表明:(1)重金属Pb、Cu、Cd、Zn在柳树叶肉组织被检测到,并已进入到细胞壁内,同时定量结果显示污染越严重,重金属累积量越多,证明了柳树叶对重金属污染的吸收能力;(2)通过综合比较,认为冷冻处理的样本比较适合进行植物组织微区的元素定性定量以及定位分析,因此推测冷冻制样加冷冻电镜的方法将会最为理想.

关键词：电镜 X射线能谱仪柳树叶重金属冷冻制样

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