检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

冰核蛋白的结构及生冰核机理的研究进展

食品科学 2007年第4期28卷 363-367页

作者：陈庆森王昌禄魏国祥阎亚丽天津科技大学生物工程学院天津市工业微生物研究所天津300221

研究冰核蛋白的结构及具有冰核活性的特性,对于该蛋白质的开发应用具有重大意义。本文主要针对国内外对冰核蛋白的结构特别是其高级结构的研究以及冰核蛋白的高级结构的推测等方面进行了较为系统的论述。最后还对其特有的生物学功能所... 详细信息

研究冰核蛋白的结构及具有冰核活性的特性,对于该蛋白质的开发应用具有重大意义。本文主要针对国内外对冰核蛋白的结构特别是其高级结构的研究以及冰核蛋白的高级结构的推测等方面进行了较为系统的论述。最后还对其特有的生物学功能所展现出的结构特征作了一下论述。

关键词：冰核蛋白结构功能生冰核机理

基于黄单胞菌冰核蛋白N端的表面展示体系建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

应用与环境生物学报 2014年第3期20卷 351-356页

作者：付玮李友国李一星华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为了建立一个自主、高效的细菌表面展示体系,利用野油菜黄单胞菌冰核蛋白N端结构域,将短小芽孢杆菌脂肪酶展示于大肠杆菌Rosetta 2(DE3)表面.采用细胞分级、脂肪酶活测定和His-tag In-gel stain分析等检测了重组蛋白的表达情况,并进一... 详细信息

为了建立一个自主、高效的细菌表面展示体系,利用野油菜黄单胞菌冰核蛋白N端结构域,将短小芽孢杆菌脂肪酶展示于大肠杆菌Rosetta 2(DE3)表面.采用细胞分级、脂肪酶活测定和His-tag In-gel stain分析等检测了重组蛋白的表达情况,并进一步检测了不同底物、温度、pH和有机溶剂对酶活稳定性的影响.结果显示融合蛋白在大肠杆菌细胞外膜成功展示,重组菌脂肪酶活为(74.6±4.5)U/g冻干细胞,展示水平为每个细胞表面19 267个脂肪酶分子;展示酶对中长链脂肪酸酯表现出较高的水解活性,最适pH为11.0,最适温度为40℃,且在40℃保温一周仍保持80%以上的酶活.本研究表明基于野油菜黄单胞菌冰核蛋白N端的展示体系是一种高效、稳定的细菌表面展示体系.

关键词：野油菜黄单胞菌冰核蛋白细菌表面展示脂肪酶大肠杆菌

基于分子对接研究小分子对冰核蛋白的微观抑制机理

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

华东理工大学学报（自然科学版） 2022年第1期48卷 1-7页

作者：胡响响丁雅丽冯玄张然石彤非卫来伊犁师范大学物理科学与技术学院新疆凝聚态相变与微结构实验室新疆伊宁835000 中科院长春应用化学研究所高分子物理与化学国家重点实验室长春130022 中国科学技术大学应用化学与工程学院合肥230026

使用分子模拟软件AutoDock研究了甘油和三聚甘油分子与北方假单胞菌的冰核蛋白(PbINP)模型之间的相互作用,以期阐释聚甘油对冰核细菌丁香假单胞菌冰核蛋白(INP)冰成核抑制行为的分子机理,以及该机理是否在INP类结构中具有普适性。模拟... 详细信息

使用分子模拟软件AutoDock研究了甘油和三聚甘油分子与北方假单胞菌的冰核蛋白(PbINP)模型之间的相互作用,以期阐释聚甘油对冰核细菌丁香假单胞菌冰核蛋白(INP)冰成核抑制行为的分子机理,以及该机理是否在INP类结构中具有普适性。模拟结果显示了配体分子与TXT(T表示苏氨酸,X表示其他残基)结冰模板和酪氨酸(TYR)阶梯结构之间的不同结合能力,并且在配体与TXT结冰模板的结合中发现有INP的其他残基参与结合。表明配体分子与INP的特异性结合可能适用于其他具有类似结构的INP。该结果为聚甘油作为冷冻保护材料的开发和进一步理解INP的结冰机理提供了有用的理论信息。

关键词：冰核蛋白分子建模 AutoDock 聚甘油北方假单胞菌

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

冰核细菌表达冰核蛋白特性的研究

微生物学通报 2000年第6期27卷 421-424页

作者：陈庆森阎亚丽王素英刘剑虹庞广昌天津商学院生物技术与蛋白资源研究室天津300400

选用１００２５Ａ和ＱＦ－９５－Ｆ１９两株分离自杨树的冰核活性细菌，探讨了两株菌不同生长阶段与它们冰核活性表达的特性。实验结果显示，冰核活性细菌在ＭＰＤＡ培养液中表达冰核蛋白的特性及活性与细菌浓度、菌龄以及培养的环境条... 详细信息

选用１００２５Ａ和ＱＦ－９５－Ｆ１９两株分离自杨树的冰核活性细菌，探讨了两株菌不同生长阶段与它们冰核活性表达的特性。实验结果显示，冰核活性细菌在ＭＰＤＡ培养液中表达冰核蛋白的特性及活性与细菌浓度、菌龄以及培养的环境条件相关，两株菌在表达冰核活性时对培养基的营养组分没有表现出特殊的要求。同时还进一步阐明了不同生长温度冰核活性细菌对冰核蛋白表达的影响。

关键词：冰核活性细胞冰核蛋白培养物特性

利用冰核蛋白N-端结构域在大肠杆菌表面展示人存活蛋白

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国细胞生物学学报 2017年第12期39卷 1536-1542页

作者：罗砚曦蒋依俐阎辉浙江省医学科学院药物所杭州师范大学医学院

存活蛋白(survivin)是高度特异的广谱肿瘤相关抗原,利用冰核蛋白(ice nucleation protein,INP)表面展示系统研究在大肠杆菌细胞表面展示人存活蛋白的可行性。将人存活蛋白基因片段和报告基因Cherry融合到冰核蛋白N-端,构建表面展示载体p... 详细信息

存活蛋白(survivin)是高度特异的广谱肿瘤相关抗原,利用冰核蛋白(ice nucleation protein,INP)表面展示系统研究在大肠杆菌细胞表面展示人存活蛋白的可行性。将人存活蛋白基因片段和报告基因Cherry融合到冰核蛋白N-端,构建表面展示载体p ET-INP-CHY-SUV并转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经IPTG诱导后可检测到红荧光,荧光强度在胰蛋白酶的作用下降低,完整细胞ELISA实验及免疫荧光实验可检测和观察到绿荧光,表明人存活蛋白在重组菌中得到表达,并且成功展示于细胞表面,为进一步研制新型的肿瘤DNA疫苗奠定基础。

关键词：冰核蛋白存活蛋白表面展示 DNA疫苗

基于黄单胞菌冰核蛋白N端表面展示体系的建立及初步应用研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基于黄单胞菌冰核蛋白N端表面展示体系的建立及初步应用研究

作者：付玮华中农业大学

学位级别：硕士

本文以野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris *** ACCC 10049)为出发菌株,克隆了具有表面展示活性的冰核蛋白基因(INP,ice nucleaiton protein)的N端(大小为541bp),并与NCBI中登录的冰核基因进行了同源比对分析,其与黄单胞菌ATCC 3991... 详细信息

本文以野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris *** ACCC 10049)为出发菌株,克隆了具有表面展示活性的冰核蛋白基因(INP,ice nucleaiton protein)的N端(大小为541bp),并与NCBI中登录的冰核基因进行了同源比对分析,其与黄单胞菌ATCC 39913菌株的冰核基因同源性高达99%。对该冰核蛋白N端(inaXN)进行了蛋白理化性质分析,二级结构和跨膜区结构预测,初步确定该冰核蛋白N端具有锚定蛋白功能。为了确定所克隆获得的冰核蛋白N端是否可以作为锚定蛋白用于表面展示,本研究选择了活性易于检测且具有一定应用前景的短小芽孢杆菌脂肪酶(Bacilluspumilus YZ02 lipase,bpL)作为乘客蛋白,与载体蛋白INP的N端相融合,构建融合基因inaXN-bpL,并克隆于超表达载体pET28a(+),得到重组质粒pETinaXN-bpL,然后转化到宿主菌大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta 2(DE3)中,获得具有全细胞催化活力的重组菌株PIL3R。进一步采用细胞分级、脂肪酶活性测定、Invision His-tagIn-gel stain分析和免疫荧光测定等手段证实了融合蛋白inaXN-bpL在重组菌细胞外膜的定位和成功展示。利用分光光度法检测重组菌的脂肪酶酶活,以对硝基苯酚棕榈酸酯为最适底物,测定酶活为74.6±4.5 U/mg冻干细胞,其展示水平推算结果为每个细胞表面展示有19267个脂肪酶分子;展示后的脂肪酶最适pH比自由酶的明显提高,由8.5上升到11.0;其在Tris-HC1缓冲液和40℃中温浴一周后,其酶活仍在80%以上。本文进一步选择具重金属吸附特性的猴金属硫蛋白α结构域四聚体(MT4α)作为乘客蛋白,构建inaXN-MT4α融合基因,并利用共生诱导表达启动子PnifH,构建出共生诱导条件下表达的目标重组质粒pIM-PnifH。从而为后续构建可用于土壤重金属污染修复的重组根瘤菌打下了良好基础。

关键词：表面展示野油菜黄单胞菌脂肪酶全细胞催化冰核蛋白金属硫蛋白重金属吸附

丁香假单胞菌MB03冰核蛋白基因低温依赖型启动子转录活性的研究

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

丁香假单胞菌MB03冰核蛋白基因低温依赖型启动子转录活性的研究

作者：孟姗华中农业大学

学位级别：硕士

丁香假单胞菌（Pseudomonas syringae）是多种植物中常见的一种病原细菌,可引发宿主植物发生超敏反应（Hypersensitive response）或发生冻害病变,其中导致植物组织和细胞内的水分形成冰晶的致病分子——冰核蛋白（Ice nucleation prote... 详细信息

丁香假单胞菌（Pseudomonas syringae）是多种植物中常见的一种病原细菌,可引发宿主植物发生超敏反应（Hypersensitive response）或发生冻害病变,其中导致植物组织和细胞内的水分形成冰晶的致病分子——冰核蛋白（Ice nucleation protein, INP）,就是该菌在受到信号分子激发后所合成的一种诱导表达型分泌蛋白。因此,研究该蛋白基因的转录活性与调控因子,对于深入理解丁香假单胞菌冰核活性的发生与致病机制,以及发掘相应的植病生防机制将具有重要意义。丁香假单胞菌MB03是一株具有高冰核活性的菌株,其冰核基因inaQ已通过原位杂交的方法克隆（GenBank登录号：EU360731）。本研究以该冰核基因的启动子作为研究对象,以绿色荧光蛋白（Green fluorescence protein, GFP）为报告蛋白,研究了在不同培养基、不同培养温度和不同外源化学诱导物作用下,该启动子分别在丁香假单胞菌、大肠杆菌（Escherichia coli）和恶臭假单胞菌（P. putida AB92019）中的转录与表达活性,从而确定了该启动子为一种低温依赖型启动子,且启动活性受3,5-二硝基水杨酸等外源诱导物显著性调控。冰核基因inaQ包含上游522 bp序列和完整的编码1200 aa的结构基因。通过生物信息学方法分析发现,inaQ启动子序列与3个已报道的冰核基因启动子有较高的相似性。对其启动子的特征区域进行预测,得到了与大肠杆菌启动子的-35区和-10区类似的保守序列,分别为TTGCTG （B box）和GGTTAAATT （Abox）。利用RT-qPCR对冰核基因inaQ转录活性进行相对定量分析,通过分别在16℃和28℃培养条件下其生长阶段的基因转录活性水平的比较,结果显示该启动子在16℃培养下冰核基因的转录水平明显高于丁香假单胞菌的正常培养温度28℃下的水平,在对数生长中后期前者是后者的将近两倍,而到稳定期中期则达到接近6倍,并且在16℃下有利于冰核基因的持续转录表达。利用SOE-PCR的方法将冰核基因上游522 bp启动子序列和绿色荧光蛋白（GFP）融合片段,插入到载体质粒pUCP18的PstⅠ/EcoR I位点,获得了重组载体PInaQ522GFP,用于在大肠杆菌和恶臭假单胞菌中分析inaQ启动子活性。通过显微镜观察和SDS-PAGE的检验,在大肠杆菌和恶臭假单胞菌中均可以表达GFP蛋白,并使细胞产生可见荧光,证明全长的启动子具有启动活性。通过删除全长启动子不同预测的活性区,得到2个长度分别为297 bp和111 bp的截短的启动子片段,并分别构建得到表达GFP的重组质粒,经过荧光活性检测,发现全长的启动子的重组菌和297bp截短启动子的重组菌的荧光强度分别为356.7和352.5,而含有111bp的截短启动子则未检测到荧光,证明启动子的2个活性区（A box和B box）直接决定了是否转录作用,而其远端序列长度则对对启动子活性影响不大。选择了1种在大肠杆菌和假单胞菌等革兰氏阴性菌中广泛存在的oprL基因的启动子为对照,比较了两者在常规培养条件下的启动活性,在大肠杆菌中含有冰核基因启动子的重组菌最大荧光强度为456.7,平均荧光强度值为330.1而含有oprL基因启动子的荧光强度分别为323.7和188.9,说明在大肠杆菌中冰核基因启动子明显优于oprL基因启动子,而在恶臭假单胞菌中,两者有相近活性分别为平均荧光强度分别为99.2和130.9,oprL启动子略优。选择不同的培养基,不同的温度和不同的外源化学诱导物对启动子进行诱导,探究该冰核基因启动子的表达条件。在培养基选择方面,采用KB培养基和NAD培养基培养时,比相同条件下LB培养荧光强度提高了32.5%和27.3%。在温度方面,16℃培养时,大肠杆菌和恶臭假单胞菌稳定期中期的荧光强度分别较28℃提高17.9%和30.1%,说明在相对较低温度下,该基因有相对较高的表达活性,起到了上调作用。在诱导物方面,不同诱导物对该启动子的活性具有上调和下调作用,其中具有上调作用的分别是硫酸钠、硝酸钠、3,5-二硝基水杨酸、对苯二酚、4-羟基-3硝基苯乙酸,其中3,5-二硝基水杨酸具有最大上调活性。研究亦证实芥菜籽的热水抽提物和4-羟基-3硝基苯乙酸具有类似的诱导活性,通过高效液相分析诱导物的化学组成,初步证实了4-羟基-3硝基苯乙酸是芥菜籽热水抽提物中的活性成分而诱导了该启动子的转录活性。

关键词：丁香假单胞菌启动子冰核蛋白诱导表达大肠杆菌恶臭假单胞菌

昆虫低温生物学:Ⅱ.冰核物质(冰核蛋白)和昆虫的耐冻性

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

昆虫知识 2000年第4期37卷 250-254页

作者：李毅平龚和中国科学院动物研究所北京100080

体系在低于熔点温度时才结冰的现象,叫过冷却(supercooling).体系开始结冰时的温度称为过冷却点(supercooling point, SCP).在适当的低温,体系内需存在一起始结冰的冰核,才能诱导冰晶产生,此物质称为冰核剂(ice nucleating agents, INA)... 详细信息

体系在低于熔点温度时才结冰的现象,叫过冷却(supercooling).体系开始结冰时的温度称为过冷却点(supercooling point, SCP).在适当的低温,体系内需存在一起始结冰的冰核,才能诱导冰晶产生,此物质称为冰核剂(ice nucleating agents, INA).昆虫体内各腔室充满组织液,各腔室(如消化系统和细胞内)因所含INA的冰核活性的不同,而使结冰的温度各异,所受低温伤害也不同.

关键词：昆虫低温生物学冰核剂冰核蛋白耐冻性

影响丁香假单胞菌冰核蛋白InaQ分泌活性效应基因的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

影响丁香假单胞菌冰核蛋白InaQ分泌活性效应基因的研究

作者：王经华中农业大学

学位级别：硕士

丁香假单胞菌是一种常见植物致病菌,可以引发多种植物产生超敏反应,而且该菌还是一种冰核细菌,可使植物在较高温度下产生冻害。诱发植物冻害的关键因素为其分泌的一种蛋白,冰核蛋白(Ice nucleation protein, INP)。本课题以一株具有高... 详细信息

丁香假单胞菌是一种常见植物致病菌,可以引发多种植物产生超敏反应,而且该菌还是一种冰核细菌,可使植物在较高温度下产生冻害。诱发植物冻害的关键因素为其分泌的一种蛋白,冰核蛋白(Ice nucleation protein, INP)。本课题以一株具有高冰核活性的丁香假单胞菌MB03为研究对象,构建了一个转座突变文库,对影响丁香假单胞菌冰核蛋白分泌的相关活性效应基因的进行了研究。丁香假单胞菌MB03是本实验室所分离保存的一株具有高冰核活性的丁香假单胞菌,其INP基因inaQ已完成克隆测序。本实验利用“自杀性”转座子pUT-mini Tn5-Km2,采用双亲本接合的方法构建了丁香假单胞菌MB03的突变文库。根据inaQ基因序列设计引物扩增得到其N端,连接pET-28a表达载体,获得INPN蛋白并制备其抗血清,然后利用免疫学方法对INP分泌进行分析。先用膜杂交的方法对突变文库中菌株进行初步筛选,从中筛选出INP分泌发生明显变化的菌株,再对这些菌株进行Cy5流式细胞仪检测验证,从而得到INP分泌明显增强和明显减弱的菌株。对突变菌株的转座子插入位点鉴定采用改进的TAIL-PCR方法,通过已知序列上3个嵌套的特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环,选择性地扩增得到目标片段,扩增产物直接测序。通过TAIL-PCR,从几株InaQ分泌活性增强或减弱突变株中扩增到疑似插入位点侧翼基因。经对其测序和将测序结果与MB03基因组序列进行对比,最终鉴定出mini-Tn5插入失活的基因柠檬酸合成酶基因(glt A)、一种糖基转移酶基因和一种2-氧代酸脱氢酶基因等。本研究选取其中的柠檬酸合成酶基因(gltA)进行了表达补偿,通过Real time-qPCR和Western blot分析比较,测定了表达补偿菌株与野生菌株的冰核蛋白InaQ表达活性与表达量,初步证实gltA基因的中断可导致InaQ表达的降低。

关键词：丁香假单胞菌冰核蛋白转座子 TAIL-PCR 柠檬酸合成酶基因