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冰冻保存机采血小板超微结构的改变与体外回收率的观察

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中国输血杂志 2000年第4期13卷 244-245页

作者：余梅贵李维王娟娟欧阳熊妍重庆市血液中心

对各种原因所致的血小板减少和临床出血,输注血小板是特异的治疗方法之一,近年来临床输用血小板需要量急骤增加,但新鲜血小板室温保存时间短,而且存在细菌污染的危险性,尤其使战备储血及特殊血型和自身输血的应用受限,因此,血小板输注... 详细信息

对各种原因所致的血小板减少和临床出血,输注血小板是特异的治疗方法之一,近年来临床输用血小板需要量急骤增加,但新鲜血小板室温保存时间短,而且存在细菌污染的危险性,尤其使战备储血及特殊血型和自身输血的应用受限,因此,血小板输注应用的进展要求体外长期储血.

关键词：血小板超微结构回收率冰冻保存二甲亚砜

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用包埋脱水法冰冻保存海洋饵料金藻

海洋与湖沼 2005年第2期36卷 172-178页

作者：王起华李贺张恩栋高艳萍李大鹏辽宁师范大学生命科学学院大连116029 大连民族学院生物工程系大连116600 中国科学院海洋研究所青岛266071

用包埋脱水法冰冻保存绿色巴夫藻 (Pavlovaviridis)、湛江等鞭金藻 (Isochrysiszhanjian gensis)和球等鞭金藻 (Isochrysisgalbana 30 1 1 )等三种海洋饵料金藻 ,探讨了脱水速率、胶球含水量以及化冻后恢复方法对冰冻保存存活率的影响... 详细信息

用包埋脱水法冰冻保存绿色巴夫藻 (Pavlovaviridis)、湛江等鞭金藻 (Isochrysiszhanjian gensis)和球等鞭金藻 (Isochrysisgalbana 30 1 1 )等三种海洋饵料金藻 ,探讨了脱水速率、胶球含水量以及化冻后恢复方法对冰冻保存存活率的影响。结果表明 ,三种藻都在 - 0 9%含水量 /h的平均脱水速率下获得最高存活率。各种藻在冰冻前的胶球最佳含水量不同 ,绿色巴夫藻为35 % ,湛江等鞭金藻和球等鞭金藻都为 30 %。化冻后 ,含绿色巴夫藻的胶球在培养基中 2 2℃暗放置 48h存活率最高 ;另两种藻在相对湿度为 75 %的气相中 2 2℃暗放置 1 2h存活率最高。在本实验条件下 ,绿色巴夫藻、湛江等鞭金藻和球等鞭金藻的冰冻保存的存活率可分别达到74%、1 5 %和 1 7%。

关键词：绿色巴夫藻球等鞭金藻饵料脱水速率存活率脱水法培养基冰冻保存放置包埋

冰冻保存对单供体血小板P-选择素和磷脂酰丝氨酸表达的影响

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冰冻保存对单供体血小板P-选择素和磷脂酰丝氨酸表达的影响

作者：王乐生大连医科大学

学位级别：硕士

目的:对于血小板减少性的出血,输注血小板已成为治疗出血的重要手段,因此血小板的临床需求迅速增加。由于新鲜血小板来源不足、室温保存时间短和易受污染的等因素,限制了新鲜血小板在临床上的应用。血小板的冰冻保存技术使得根据临床需... 详细信息

目的:对于血小板减少性的出血,输注血小板已成为治疗出血的重要手段,因此血小板的临床需求迅速增加。由于新鲜血小板来源不足、室温保存时间短和易受污染的等因素,限制了新鲜血小板在临床上的应用。血小板的冰冻保存技术使得根据临床需要长期大量库存血小板成为可能。正因如此,冰冻血小板的保存损伤引起了国内外学者的广泛关注。冰冻血小板的保存损伤机制与血小板的活化、代谢改变有关,因此许多学者进行了冰冻血小板保存损伤与血小板活化的研究,并常以冰冻血小板膜表面活化标志物P-选择素(CD62p)的表达作为观察指标;也有学者开展了冰冻血小板保存损伤与血小板代谢改变的研究,并以冰冻血小板膜表面的磷脂变化为观察指标,但缺乏有关冰冻血小板保存期内保存损伤指标动态变化的研究报告。为此,我们以保存期为4周的冰冻血小板为研究对象,以CD62p和磷脂酰丝氨酸(PS)为冰冻血小板的保存损伤指标,分别以血小板冻存后0h、24h、72h、1w、2w、3w、4w为观察时点,采用流式细胞术动态测定血小板膜表面CD62p和AnnexinⅤ表达,结合血小板体外回收率(RRP)、平均血小板体积(MPV)等参数,以期阐明冰冻保存对血小板CD62p和PS表达的影响,从而为冰冻血小板在临床的科学应用提供实验依据。方法:采用CS-3000 PLUS血细胞分离机采集单供体血小板12人份,每1人份血小板依据不同的观察时点分为7组,即冻存后0h、24h、72h、1w、2w、3w、4w,并以6%的二甲亚砜(DMOS)为冻存液,置于-80℃速冻冰箱保存。选择CD62p-FITC和Annexin V-FITC为标记物,以流式细胞仪分别检测血小板膜表面CD62p与Annexin V阳性表达率(PER)和平均荧光强度(MFI);应用血细胞计数仪分别检

关键词：血小板冰冻保存 P-选择素(CD62p) 磷脂酰丝氨酸

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冰冻保存血小板新亚群及其新特性体外研究

中国输血杂志 2003年第6期16卷 385-388页

作者：刘景汉欧阳锡林高大勇解放军总医院解放军临床输血中心北京100853 中国科技大学热科学与能源工程系低温生物医学研究所

目的　探讨血小板冰冻保存后血小板新亚群的产生和其获得新特性的分子基础。方法　采用流式细胞术在不同条件下比较分析新鲜血小板和冰冻保存血小板膜表面功能分子表达变化差异。结果　根据表达和再表达CD6 2p能力不同可将冰冻血小板分... 详细信息

目的　探讨血小板冰冻保存后血小板新亚群的产生和其获得新特性的分子基础。方法　采用流式细胞术在不同条件下比较分析新鲜血小板和冰冻保存血小板膜表面功能分子表达变化差异。结果　根据表达和再表达CD6 2p能力不同可将冰冻血小板分为三个亚群 ,CD6 2 p再表达率为 5 1 .7%± 7.8% ;新鲜血小板只有一个明显的亚群 ,CD6 2 p再表达率为 98.3%± 0 .6 %。结合磷脂酰丝氨酸 (PS)、CD6 2 p和CD4 2b分子变化可将冰冻血小板分出新的亚群 ,其显著特征包括PS阳性和CD4 2b分子密度显著降低 ;而CD6 2p阴性亚群对钙离子的激活更为敏感。结论　血小板通过冰冻保存后 ,产生了新亚群。

关键词：血小板冰冻保存亚群流式细胞术

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冰冻保存小新月菱形藻的包埋-玻璃化法

植物生理学通讯 2007年第1期43卷 137-140页

作者：张丽佳王起华张恩栋刘丽娜辽宁师范大学生命科学学院辽宁大连116029

采用包埋-玻璃化法对小新月菱形藻进行冰冻保存,探讨玻璃化溶液(PVS)配方、装载液浓度和装载时间、脱水时间以及洗涤方法对冰冻保存存活率的影响。结果表明:小新月菱形藻在0℃预冷后50%PVS2装载60min,100%PVS2脱水60min,1mol·L-1蔗糖... 详细信息

采用包埋-玻璃化法对小新月菱形藻进行冰冻保存,探讨玻璃化溶液(PVS)配方、装载液浓度和装载时间、脱水时间以及洗涤方法对冰冻保存存活率的影响。结果表明:小新月菱形藻在0℃预冷后50%PVS2装载60min,100%PVS2脱水60min,1mol·L-1蔗糖梯度洗涤30min的条件下存活率最高,为74.1%。包埋-玻璃化法不需要特殊的冷冻设备,冰冻程序操作简单,在藻类种质的超低温保存中有较大的应用潜力。

关键词：小新月菱形藻包埋-玻璃化法存活率冰冻保存

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用包埋脱水法冰冻保存牟氏角刺藻

海洋科学 2003年第7期27卷 48-51页

作者：李莹王起华李贺李婷婷辽宁师范大学生命科学学院大连116029 辽宁师范大学教授大连116029

采用包埋脱水法研究了牟氏角利藻(Chaetoceros muelleri)的超低温保存,探讨了影响存活率的内、外因素:藻细胞年龄、蔗糖浓度、脱水速率、胶球含水量等。结果表明,将处于静止初期的藻细胞包埋在含有0.5mol/L蔗糖的3％褐藻酸钙胶球中,以... 详细信息

采用包埋脱水法研究了牟氏角利藻(Chaetoceros muelleri)的超低温保存,探讨了影响存活率的内、外因素:藻细胞年龄、蔗糖浓度、脱水速率、胶球含水量等。结果表明,将处于静止初期的藻细胞包埋在含有0.5mol/L蔗糖的3％褐藻酸钙胶球中,以平均速率0.9％含水量/h脱水至胶球含水量为40％的条件下冰冻存活率较高,可达到30％左右。与常规的两步法冰冻保存相比,包理脱水法可大大简化操作程序,是保存牟氏角刺藻的一种有潜力的方法。

关键词：包埋脱水法冰冻保存牟氏角刺藻操作程序

机采血小板P-选择素在常规和冰冻保存条件下的表达研究

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第三军医大学学报 2003年第6期25卷 525-527页

作者：赵树铭成晓玲李书武刁荣华刘璐张红陈寒梅陈敏第三军医大学附属西南医院输血科重庆400038

目的　探讨常规和冰冻保存条件下对血小板功能的影响。方法　 10单位机采血小板分别用常规保存袋和低温保存袋贮存 ,前者贮存 5d ,每天留取标本 ,后者于 -85℃贮存后 5d复苏留样。分别检测血小板聚集率、血小板计数、pH值和血小板膜糖蛋... 详细信息

目的　探讨常规和冰冻保存条件下对血小板功能的影响。方法　 10单位机采血小板分别用常规保存袋和低温保存袋贮存 ,前者贮存 5d ,每天留取标本 ,后者于 -85℃贮存后 5d复苏留样。分别检测血小板聚集率、血小板计数、pH值和血小板膜糖蛋白P 选择素的变化。结果　常规保存条件下 ,5d内血小板聚集率、pH、血小板计数均无显著性变化 ,血小板P 选择素在 1d后即明显升高 (从 3 .77± 1.86到 10 .87± 4.75 ,达 3倍 ,P 冰冻保存时 ,血小板聚集率、pH、血小板计数无显著性变化 ,P 选择素的表达在冰冻后呈显著升高 (从 4.3 7± 1.82到 16.88± 7.2 3 ,达 4倍 ,P 冰冻保存条件下的表达变化提示血小板离体后被活化。

关键词： P-选择素机采血小板常规保存冰冻保存

-20℃冰冻保存血清Rh抗体效价变化的观察

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第三军医大学学报 2002年第9期24卷 1095-1096页

作者：段慧玲滕本秀郑月明第三军医大学附属新桥医院输血科重庆400037

目的　探讨血清抗体在体外 -2 0℃冰冻保存抗体活性变化的情况及检测弱抗体的最佳方法。方法　将 2份已知阳性血清在保存前分成小等分 ,按设计的时间 (1～ 10年 )每年对抗体效价进行测定 ,应用CAT法、Polybrene法、TCT法三种技术对 40份... 详细信息

目的　探讨血清抗体在体外 -2 0℃冰冻保存抗体活性变化的情况及检测弱抗体的最佳方法。方法　将 2份已知阳性血清在保存前分成小等分 ,按设计的时间 (1～ 10年 )每年对抗体效价进行测定 ,应用CAT法、Polybrene法、TCT法三种技术对 40份 -2 0℃冰冻保存 1～ 18年的已知阳性血清进行了间接抗人球试验 ,对其中 5份阳性血清进行了灵敏度测试。结果　抗体血清体外在 -2 0℃保存 2年左右时效价无明显改变 ,以后每年效价约降低 1个滴度 ,8年以上效价显著减弱 ,甚至已检测不出。 3种方法对不规则抗体检测的灵敏度为 :CAT法 >Polybrene法 >TCT法。阳性检出率为 :CAT法 85 0 %、Polybrene法 67 5 %、TCT法 5 2 5 % ,CAT法显著大于TCT法。结论　 -2 0℃的温度适合保存近年内使用效价较高的血清抗体 ,对效价较低的和一些稀有血清抗体的长期保存 ,应采用更低温度更适合。CAT法对不规则抗体的检测更灵敏、更可靠。

关键词：冰冻保存血清 Rh抗体效价变化

采用冰冻保存角膜行治疗性穿透性角膜移植术后再度光学性穿透性角膜移植疗效观察

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采用冰冻保存角膜行治疗性穿透性角膜移植术后再度光学性穿透性角...

作者：徐志伟浙江大学

学位级别：硕士

目的：回顾性总结采用冰冻保存角膜行治疗性穿透性角膜移植（Therapeautic penetrating keratoplasty, T-PKP）后再度行光学性穿透性角膜移植（Optical Penetrating keratoplasty, O-PKP）的临床疗效。资料与方法：回顾1998年10月... 详细信息

目的：回顾性总结采用冰冻保存角膜行治疗性穿透性角膜移植（Therapeautic penetrating keratoplasty, T-PKP）后再度行光学性穿透性角膜移植（Optical Penetrating keratoplasty, O-PKP）的临床疗效。资料与方法：回顾1998年10月至2008年10月在我院就诊,采用冰冻保存角膜行T-PKP,术后再次接受O-PKP治疗,且术后规律随访超过6个月的所有患者的病历资料,分析其术后植片存活状态,并发症,内皮细胞密度变化和术后视力转归等情况。结果：符合纳入标准的病例共44例（44眼）,在O-PKP术后中位数随访时间为19个月（6-76个月）的过程中,14眼发生植片失代偿,植片生存率68.2%,透明植片估计生存均值49.8±5.0月。植片失代偿的危险因素中,O-PKP术后排斥反应的相对危险度为20.10（P=0.01）,术后继发性青光眼的相对危险度为6.72（P=0.04＜0.05）,在统计学上均有相关性,但年龄、T-PKP术前是否发生角膜穿孔、T-PKP植片大小、O-PKP是否联合白内障手术、O-PKP术后是否再行眼内手术等因素在统计学上无相关性。T-PKP后继发性青光眼予药物及手术治疗后眼压仍高者15眼（34.1%）,而O-PKP术后仅5眼（11.4%）发生继发性青光眼,两者比较有显著性差异（P＜0.05）,上述15眼术前平均眼压38.3±9.0mmHg,经O-PKP粘连房角分离及眼前段重建,术后1月、6月、12月平均眼压降至17.7±8.9 mmHg、18.0±7.5 mmHg、17.1±6.5mmHg,较术前明显降低,两者比较在统计学上有高度显著性差异（P＜0.01）。O-PKP术后23眼（52.3%）发生一过性排斥反应,经药物治疗后均控制,但13眼最终发生植片失代偿。O-PKP术后17眼晶体尚透明,予保留,其中12眼（70.6%）术后出现并发性白内障,透明晶体估计生存均值为24.1±3.7月。O-PKP术后12月总体内皮细胞密度较术后1月下降25.2±35.6%（P＜0.01）。O-PKP术后1年中位数最佳矫正视力（best corrected visual acurity,BCVA）为0.4,末次随访中位数BCVA为0.15,其中19眼末次随访BCVA＞0.4。结论：采用冰冻保存的角膜行T-PKP,在治愈原发疾病并保全眼球后,再行O-PKP可获得理想的植片生存率,并发症少,视力恢复良好。再度O-PKP植片生存的危险因素为术后排斥反应和继发性青光眼。再度O-PKP对T-PKP术后的继发性青光眼有一定程度上的治疗作用。

关键词：治疗性角膜移植光学性角膜移植冰冻保存角膜