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农杆菌法转化棉花茎尖组织的初步研究

中国棉花 2007年第5期34卷 22-23页

作者：李明山东省滨州职业学院 256624

农杆菌法是当今转基因植物研究中应用最为广泛的技术,因具有转化工作不受季节限制、转化机理较为清楚、转基因植株多为单拷贝和转化效率较高等优点而备受青睐.采用农杆菌介导法和基因枪法进行棉花遗传转化时,一般都需经过离体培养再生... 详细信息

农杆菌法是当今转基因植物研究中应用最为广泛的技术,因具有转化工作不受季节限制、转化机理较为清楚、转基因植株多为单拷贝和转化效率较高等优点而备受青睐.采用农杆菌介导法和基因枪法进行棉花遗传转化时,一般都需经过离体培养再生植株的过程,实验周期长,且受到基因型限制,只有少数品种的离体培养材料能再生植株.

关键词：茎尖分生组织转化工作农杆菌法棉花遗传转化体系农杆菌介导法再生植株离体培养

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八氢番茄红素合酶基因对人参的遗传转化

中国生物工程杂志 2008年第2期28卷 90-95页

作者：于源华杜柏权张勇张丽长春理工大学长春130022 长春工业大学长春130012 武汉博士德生物工程有限公司武汉200032 吉林亚泰生物药业股份有限公司长春130033

八氢番茄红素合酶(phytoene synthase,PSY)是类胡萝卜素生物合成的限速酶,通过建立psy基因的人参转化体系,可促进相应类胡萝卜素的合成,从而提高人参的营养价值。以人参愈伤组织为受体,以psy为目的基因,应用根癌农杆菌介导法进行遗传转... 详细信息

八氢番茄红素合酶(phytoene synthase,PSY)是类胡萝卜素生物合成的限速酶,通过建立psy基因的人参转化体系,可促进相应类胡萝卜素的合成,从而提高人参的营养价值。以人参愈伤组织为受体,以psy为目的基因,应用根癌农杆菌介导法进行遗传转化。以抗性筛选人参受体转染效率为指标,从菌液浓度、侵染胞龄、侵染时间、共培养时间四方面优化了转化体系。进行了PCR,PCR-Southern和RT-PCR分析鉴定及β-胡萝卜素含量测定,初步证明外源基因psy已整合到人参的基因组中并在转录水平上进行了表达,β-胡萝卜素含量平均提高了26倍。为改善和提高人参中类胡萝卜素含量提供了一种新的途径。

关键词：农杆菌法 psy基因人参愈伤组织遗传转化

大豆铁结合蛋白基因在旱稻中的表达及铁含量分析

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中国农业科学 2006年第11期39卷 2362-2367页

作者：董阔徐杰朱作峰刘燕王象坤付永彩孙传清中国农业大学植物遗传育种系/农业生物技术国家重点实验室/教育部作物杂种优势研究与利用重点实验室/农业部农作物基因组学与遗传改良重点开放实验室/北京市作物遗传改良重点实验室中国农业大学植物遗传育种系/农业生物技术国家重点实验室/教育部作物杂种优势研究与利用重点实验室/农业部农作物基因组学与遗传改良重点开放实验室/北京市作物遗传改良重点实验室北京100094

【目的】尝试利用转基因方法提高旱稻铁含量。【方法】采用基因枪和农杆菌转化法,将水稻胚乳特异表达的谷蛋白基因启动子GluB-1驱动下的大豆铁结合蛋白基因转入2个优良旱稻品种“旱稻297”和“旱稻277”。利用PCR、Southern杂交分析方... 详细信息

【目的】尝试利用转基因方法提高旱稻铁含量。【方法】采用基因枪和农杆菌转化法,将水稻胚乳特异表达的谷蛋白基因启动子GluB-1驱动下的大豆铁结合蛋白基因转入2个优良旱稻品种“旱稻297”和“旱稻277”。利用PCR、Southern杂交分析方法验证转化结果。【结果】转基因植株T1代RT-PCR证明,外源基因在种子中特异表达。T1～T3代的PCR检测证明铁结合蛋白基因已经稳定遗传。多数转基因植株T0～T3代种子中铁含量高于未转化植株,最高达到未转化对照的2倍以上。【结论】利用基因枪和农杆菌转化法可将大豆铁结合蛋白基因导入旱稻基因组中,并使转基因稻米铁含量增高。

关键词：旱稻基因枪法农杆菌法铁结合蛋白基因铁含量

猪α乳清蛋白基因双元载体的构建和转化拟兰芥植物

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种子 2005年第5期24卷 20-22页

作者：芦春斌暨南大学生殖免疫中心广州510632

将人工合成的植物化的猪α乳清蛋白基因编码区克隆到载体中,构建了带有35S启动子———猪α乳清蛋白基因———终止子表达单元的双元载体,采用农杆菌法对拟兰芥进行植物转化。利用该双元载体上的除草剂抗性基因(Bar基因)为选择性标记进... 详细信息

将人工合成的植物化的猪α乳清蛋白基因编码区克隆到载体中,构建了带有35S启动子———猪α乳清蛋白基因———终止子表达单元的双元载体,采用农杆菌法对拟兰芥进行植物转化。利用该双元载体上的除草剂抗性基因(Bar基因)为选择性标记进行筛选,获得了一些抗除草剂的转化植株。对转化植株后代植进行猪α乳清蛋白基因的PCR检测,证实外源猪α乳清蛋白基因已整合到植物基因组DNA中。

关键词：猪α乳清蛋白基因双元载体遗传转化拟兰芥农杆菌法抗除草剂基因

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植物体细胞原生质体遗传转化研究

西北植物学报 2004年第7期24卷 1329-1341页

作者：赵宏波陈发棣南京农业大学园艺学院南京210095

重点介绍了植物体细胞原生质体遗传转化的方法和当前已经取得的成果,同时提出了目前原生质体遗传转化中存在的问题,展望了今后的工作重点。植物原生质体遗传转化的方法主要有:PEG介导转化法、电击穿孔转化法、脂质体介导转化法、农杆菌... 详细信息

重点介绍了植物体细胞原生质体遗传转化的方法和当前已经取得的成果,同时提出了目前原生质体遗传转化中存在的问题,展望了今后的工作重点。植物原生质体遗传转化的方法主要有:PEG介导转化法、电击穿孔转化法、脂质体介导转化法、农杆菌共培养转化法等。

关键词：体细胞原生质体遗传转化PEG法电击法脂质体法农杆菌法

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小麦遗传转化技术研究进展

细胞生物学杂志 2000年第4期22卷 194-199页

作者：安海龙卫志明中国科学院上海植物生理研究所上海200032

植物基因工程研究兴起于本世纪八十年代中期。自其诞生至今,如何将这项技术应用于小麦、水稻、玉米等农作物的遗传改良研究便始终是人们努力的重要目标之一。要实现这一目标,首先需要建立一套高效、可靠、重复性好的基因转化系统。而在... 详细信息

植物基因工程研究兴起于本世纪八十年代中期。自其诞生至今,如何将这项技术应用于小麦、水稻、玉米等农作物的遗传改良研究便始终是人们努力的重要目标之一。要实现这一目标,首先需要建立一套高效、可靠、重复性好的基因转化系统。而在植物基因转化系统研究方面,禾谷类相对于其他双、单子叶植物而言。

关键词：小麦遗传转化技术基因枪法农杆菌法

农杆菌介导的无选择标记转双价抗虫基因灿稻的获得

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农杆菌介导的无选择标记转双价抗虫基因灿稻的获得

作者：彭海英华中农业大学

学位级别：硕士

水稻是世界主要的粮食作物，也是虫害最严重的作物。培育具有抗虫能力新品种是控制水稻害虫的有效措施。近年来，植物转基因技术的发展为培育高效抗虫水稻品种开辟了新的途径。Bt基因和CpTⅠ是目前应用最为普遍的抗虫基因。但是任何导... 详细信息

水稻是世界主要的粮食作物，也是虫害最严重的作物。培育具有抗虫能力新品种是控制水稻害虫的有效措施。近年来，植物转基因技术的发展为培育高效抗虫水稻品种开辟了新的途径。Bt基因和CpTⅠ是目前应用最为普遍的抗虫基因。但是任何导入的抗虫基因都有一定的抗虫谱，而且实验证明害虫会对特定的抗虫基因产生耐受性，因此培育具有多种抗虫机制的水稻品种具有重要意义。目前采取的策略主要是转双价抗虫基因。目前所有的转化方法都是通过标记基因的表达将转化细胞从非转化细胞中选择出来。但是筛选得到转化克隆后，选择标记基因就不必要了，甚至带来一系列问题。因此无选择标记转基因体系的建立是植物基因工程发展的趋势。现已发展了多种去选择标记的转化策略，共转化是其中最简单的方法。研究表明，两段独立的T-DNA在一定的条件下共同转化植物时，可能整合到植物基因组的不同染色体上，转基因植株在自交后代发生分离，可得到无选择标记的转基因株系。本研究利用双T-DNA载体pCDMARUBAC-HYg进行水稻转化，这一双T-DNA载体具有独立的两个T-DNA，一个T-DNA为标记基因部分，标记基因为潮霉素抗性基因hyg;另一个T-DNA为双价抗虫基因cryIAc和修饰的胰蛋白酶抑制剂基因sck表达结构。通过研究我们获得无选择标记的转双价抗虫基因水稻。其主要研究结果如下： 1．采取农杆菌介导，用pCDMARUBAC-HYg转化籼稻恢复系明恢86的胚性愈伤组织，经潮霉素筛选获得抗性愈伤组织574个，分化得到了148个克隆的454个再生植株，转化率为9.1％，分化率为25.7％。 2．T代PCR扩增结果表明：53.6％的植株发生了cryIA、sck、hyg的共转化;在部分克隆中有多个转化事件的现象，一个克隆的不同单株有不同的基因型;在T代出现了无选择标记转双价抗虫基因植株。 3．对T代植株自交形成的T1代株系的进行检测表明，大部分的共转化株系发生了目的基因和标记基因的分离，筛选到无选择标记的转双价抗虫基因株系;部分共转化植株的后代株系中目的基因和标记基因没有发生分离，发生了共整合;T代为无标记的转双价抗虫基因株系目的基因发生分离，出现纯合单株;通过检测，我们筛选到大量无选择标记转双价抗虫基因T代单株。 4．对上述无选择标记转双价抗虫基因T代自交形成的T株系进行PCR检测，筛选到目的基因纯合的无选择标记的转双价抗虫基因的株系42个。华中农业大学硕士学位论文:农杆菌介导的无选择标记转双价抗虫基因轴稻的获得 ***、T:代转基因水稻EUSA检测表明，在转基因植株中Bt蛋白表达量占可溶性总蛋白含量的0.01%一0.22%。在检测中发现同一个株系中不同单株的目的基因的表达水平不同，甚至发生转基因沉默的现象;同株系的后代植株中目的基因表达量也存在差异，出现表达量高于前一世代的现象。 6.田间抗虫性调查发现，部分转基因株系的抗虫性较强，对二化螟有明显的抗性。在几代筛选获得21个高抗虫的无选择标记转双价抗虫基因的水稻纯合株系。

关键词：籼稻农杆菌法抗虫转基因无选择标记基因 Bt sck

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特色药源植物盾叶薯蓣遗传转化的研究

特色药源植物盾叶薯蓣遗传转化的研究

作者：刘帅浙江师范大学

学位级别：硕士

盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis ***)是我国特有的多年生药用植物,其根状茎中的薯蓣皂甙元是合成甾体激素类药物的重要材料。在薯蓣属中,野生盾叶薯蓣的皂甙元含量最高,据报道最高达到16.15%。近年来,随着人们对薯蓣皂甙元的需求量... 详细信息

盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis ***)是我国特有的多年生药用植物,其根状茎中的薯蓣皂甙元是合成甾体激素类药物的重要材料。在薯蓣属中,野生盾叶薯蓣的皂甙元含量最高,据报道最高达到16.15%。近年来,随着人们对薯蓣皂甙元的需求量增多和过度开发利用,野生盾叶薯蓣资源紧缺。为解决这一现状,人们进行了多种努力,但是人工栽培育种存在薯蓣皂甙元含量和产量降低,多倍体育种存在盾叶薯蓣根状茎的产量及薯蓣皂甙元的含量不稳定等问题,而基因工程手段为盾叶薯蓣的品种改良开辟了新的途径。本文首先对盾叶薯蓣再生体系进行了研究,以改良MS为基本培养基,添加不同浓度的激素(6-BA和NAA)组合,确定了适合无菌苗的腋芽萌发、愈伤组织诱导、分化和生根培养基的最适激素浓度组合,愈伤组织分化率可达90%以上,并且90%以上的再生苗能够长出须根,炼苗移栽后成活率较高;研究了农杆菌侵染浓度、时间,共培养时间,筛选培养的潮霉素B浓度和时间,抗生素的添加浓度,利用含有rFCA-RRM1基因片段的根癌农杆菌EHA105质粒,转化了盾叶薯蓣胚性愈伤组织;对盾叶薯蓣胚性愈伤组织进行rFCA-RRM2基因片段的基因枪法转化;将抗性愈伤组织经分化培养后,转入生根培养基诱导生根,经炼苗,移栽于室外培养。将盾叶薯蓣转基因再生植株的叶片基因组DNA进行PCR检测,初步证明外源基因已经整合到盾叶薯蓣的基因组中;测定了野生盾叶薯蓣根状茎及愈伤组织中薯蓣皂甙元含量。本研究为通过转基因方法对盾叶薯蓣进行品种改良奠定了一定的基础。

关键词：盾叶薯蓣遗传转化农杆菌法基因枪法

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八氢番茄红素合酶基因人参转化体系的优化

吉林商业高等专科学校学报 2007年第3期 73-76页

作者：果洪宇杜柏权张勇长春理工大学吉林长春130022 长春工业大学吉林长春130012 武汉博士德生物工程有限公司湖北武汉200032

八氢番茄红素合酶(Phytoene synthase,PSY)是类胡萝卜素生物合成的限速酶,通过建立 PSY 基因的人参转化体系,可促进相应类胡萝卜素的合成,从而提高人参的营养价值。本研究以人参愈伤组织为受体,以 PSY 为目的基因,应用根癌农杆菌介导法... 详细信息

八氢番茄红素合酶(Phytoene synthase,PSY)是类胡萝卜素生物合成的限速酶,通过建立 PSY 基因的人参转化体系,可促进相应类胡萝卜素的合成,从而提高人参的营养价值。本研究以人参愈伤组织为受体,以 PSY 为目的基因,应用根癌农杆菌介导法对人参愈伤组织进行遗传转化,从菌液浓度、侵染胞龄、侵染时间、共培养时间四方面优化了遗传转化体系。经 PCR 分析鉴定,初步证明外源基因 PSY 已整合到人参的基因组中。

关键词：农杆菌法 PSY基因人参愈伤组织遗传转化