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2种方法银染的AFLP片段再扩增效果比较及改进

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华中农业大学学报 2008年第2期27卷 182-185页

作者：刘耘熊家军杨利国华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070

Bassam银染法和Sanguinetti银染法是AFLP标记最常用的检测方法。本研究比较这2种方法银染的AFLP条带再扩增效果的差异,发现Bassam法银染的AFLP片段再扩增效率达到100%,而用同样的PCR条件,Sanguinetti法银染的AFLP片段不能被扩增,限制了S... 详细信息

Bassam银染法和Sanguinetti银染法是AFLP标记最常用的检测方法。本研究比较这2种方法银染的AFLP条带再扩增效果的差异,发现Bassam法银染的AFLP片段再扩增效率达到100%,而用同样的PCR条件,Sanguinetti法银染的AFLP片段不能被扩增,限制了Sanguinetti法在AFLP标记分析中的应用。为提高Sanguinetti法银染的AFLP片段再扩增效率,对Sanguinetti法银染的AFLP片段回收和再扩增条件进行了改进。通过增加Sanguinetti法显色后的胶板漂洗次数、延长漂洗时间、改变AFLP条带浸泡溶液、增加浸泡液体积和增加PCR循环次数,成功地将Sanguinetti法银染的AFLP条带的再扩增效率提高到100%,从而解决了San-guinetti银染法应用的限制因素。

关键词： AFLP 银染 Bassam法 Sanguinetti法再扩增

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良性与恶性葡萄胎基因表达差异的研究

北京大学学报（医学版） 2005年第2期37卷 151-154页

作者：张小为朱浩彬武淑英高荣莲张璐芳韩劲松郭红燕王秀云叶蓉华赵扬玉赵文秋北京大学第三医院妇产科北京100083

目的:通过基因表达的差异分析,筛选良性与恶性葡萄胎间的分子标志,以探讨侵袭性葡萄胎早期诊断的方法和可能性。方法:采用mRNA差异显示、斑点杂交和DNA重组、测序等技术对良性与恶性葡萄胎差异表达的基因片段进行筛选和序列测定,通过和... 详细信息

目的:通过基因表达的差异分析,筛选良性与恶性葡萄胎间的分子标志,以探讨侵袭性葡萄胎早期诊断的方法和可能性。方法:采用mRNA差异显示、斑点杂交和DNA重组、测序等技术对良性与恶性葡萄胎差异表达的基因片段进行筛选和序列测定,通过和基因库数据对比,明确所获基因片段是否为已知序列。结果:筛选出 28条侵袭性葡萄胎高表达的基因片段,其中 20个可再扩增,斑点杂交分析确认有 13个片段在侵袭性葡萄胎中高表达,克隆其中 3个片段,经序列测定和NCBI数据库的BLAST检索比对,发现 16号片段序列(IHM F16)未见记载,为新发现的表达基因片段,并已被NCBI数据库所收录(dbEST_Id: 10875704;GenBank_Accn:BM403211),其他两个片段为已知的序列。结论:良性与恶性葡萄胎间基因表达存在明显差异,差异基因的检测分析对侵袭性葡萄胎的早期诊断具有潜在意义。

关键词：恶性葡萄胎基因表达差异良性侵袭性葡萄胎 mRNA差异显示基因片段早期诊断序列测定 NCBI DNA重组差异分析分子标志斑点杂交差异表达已知序列杂交分析检测分析差异基因高表达筛选可能性基因库再扩增数据库

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高GC模板扩增优化及纳米金作用机制初探

高GC模板扩增优化及纳米金作用机制初探

作者：杨文超上海交通大学

学位级别：硕士

纳米PCR（nanoparticle PCR）由于能够显著改善再扩增PCR体系中的特异性而受到了广泛的关注。随后也有研究表明纳米金能够提高PCR反应的灵敏度和反应效率。而高GC模板扩增作为PCR技术中的瓶颈问题之一,目前仍然没有得到较好的解决。本... 详细信息

纳米PCR（nanoparticle PCR）由于能够显著改善再扩增PCR体系中的特异性而受到了广泛的关注。随后也有研究表明纳米金能够提高PCR反应的灵敏度和反应效率。而高GC模板扩增作为PCR技术中的瓶颈问题之一,目前仍然没有得到较好的解决。本文对如何优化人类基因组中一些高GC区域的扩增问题进行了研究。在选择了适当的高GC模板扩增程序后,基于Pfu DNA聚合酶及Taq DNA聚合酶的扩增体系被分别用于评价纳米金对高GC模板扩增的影响。结果发现纳米金均能改善这两种不同的高GC模板扩增体系的效率,与现有的一些添加剂进行组合使用还可以在体外显著改善一些较长高GC片段的扩增。但是与TAKARA的商品化试剂相比,纳米金的优化效果并没有明显的优势。此外,本文也尝试通过对再扩增体系中弥散现象的产生原因进行研究并以此推断纳米金的作用机制。结果表明再扩增PCR体系中的弥散现象主要是由两种原因造成的。一是由于产物间形成了复杂的二级结构而在电泳中造成的假象。第二是因为部分合成的目标片段发生错配而导致非特异扩增。基于以上实验结果及假设,纳米金在再扩增PCR体系中的作用机制可能主要是通过抑制DNA链之间的非特异性配对来提高反应特异性的。通过进一步实验,发现在PCR体系中DNA聚合酶与纳米金的相互作用最强。因此,纳米金可能是通过与DNA聚合酶发生相互作用来抑制非特异扩增的。

关键词：纳米PCR 高GC模板扩增再扩增

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IBM突破硬盘技术瓶颈

电脑采购 2001年第32期 20-20页

IBM宣布新的硬盘技术,突破了一种被许多业界专家视为不可能克服的障碍。过去五年来,每年硬盘的容量都已加倍,让存储设备的成本得以控制,且让科技迷和个人计算机使用者能存储更多的数据。然而,行家认为,这种成长步调可能维持不了多久,许... 详细信息

IBM宣布新的硬盘技术,突破了一种被许多业界专家视为不可能克服的障碍。过去五年来,每年硬盘的容量都已加倍,让存储设备的成本得以控制,且让科技迷和个人计算机使用者能存储更多的数据。然而,行家认为,这种成长步调可能维持不了多久,许多人甚至断言,存储设备产业即将面临容量无法再扩增的极限。但IBM表示,新的技术创新会将那种限制往后推。这种技术的术语称作“抗铁磁偶合”(Antiferromagnetically Coupled——AFC)媒体,或IBM内部俗称的“

关键词：硬盘存储设备个人计算机铁磁偶合技术创新再扩增技术瓶颈数据存储突破平方英寸