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中国实用口腔科杂志 2021年第3期14卷 312-316页

作者：杨宽包立辉张彩娣翟启明邸天凯王爽西安交通大学口腔医学院正畸科陕西西安710004 第四军医大学口腔医学院组织工程中心陕西西安710032 军事口腔医学国家重点实验室口腔疾病国家临床医学研究中心陕西省口腔疾病临床医学研究中心第四军医大学口腔医院儿童口腔科陕西西安710032

目的探究牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)在受到牵张力作用下的成骨分化能力及其内质网线粒体偶联的变化。方法从牙周膜分离原代PDLSCs并进行传代培养,使用第3代细胞以施加或不施加牵张力处理分别作为实验组和对... 详细信息

目的探究牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)在受到牵张力作用下的成骨分化能力及其内质网线粒体偶联的变化。方法从牙周膜分离原代PDLSCs并进行传代培养,使用第3代细胞以施加或不施加牵张力处理分别作为实验组和对照组,并在加力后收取细胞进行成骨诱导培养,采用茜素红染色和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PDLSCs成骨分化水平和成骨相关基因[Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP)]的表达水平。用透射电镜观察线粒体内质网的空间接触变化,采用qRT-PCR检测线粒体融合蛋白-1(mitofusion 1,Mfn1)和线粒体融合蛋白-2(mitofusion 2,Mfn2)的基因表达水平,采用线粒体膜电位检测试剂盒检测PDLSCs线粒体膜电位变化。结果茜素红染色和qRT-PCR检测结果显示,施加牵张力后PDLSCs的成骨分化能力显著增强(P内质网线粒体偶联长度与线粒体周长之比显著降低(P0.05)。实验组细胞线粒体膜电位与对照组相比则显著升高(P内质网线粒体的偶联、升高线粒体膜电位趋势有关。

关键词：牙周膜干细胞牵张力内质网线粒体偶联线粒体膜电位成骨分化

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炎症微环境下线粒体融合蛋白2及其介导的内质网-线粒体偶联对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

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中华口腔医学杂志 2018年第7期53卷 453-458页

作者：翟启明李蓓王智伟刘露金岩金钫第四军医大学口腔医学院口腔正畸科军事口腔医学国家重点实验室口腔疾病国家临床医学研究中心陕西省口腔疾病临床医学研究中心西安710032 第四军医大学口腔医学院口腔组织病理学教研室西安710032

目的探讨内质网与线粒体偶联及线粒体融合蛋白（mitofusion 2，Mfn2）对牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells，PDLSC）成骨分化能力的影响，为促进牙周炎患者牙周组织再生提供理论基础和治疗靶点。方法刮取正常及牙周炎牙齿... 详细信息

目的探讨内质网与线粒体偶联及线粒体融合蛋白（mitofusion 2，Mfn2）对牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells，PDLSC）成骨分化能力的影响，为促进牙周炎患者牙周组织再生提供理论基础和治疗靶点。方法刮取正常及牙周炎牙齿（由第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科门诊收集）的牙周膜组织，用原代和有限稀释法单克隆化培养健康来源的（health，H）PDLSC（H-PDLSC）及炎症来源的（periodontitis，P）PDLSC（P-PDLSC），透射电镜及细胞器特异性荧光染色检测内质网-线粒体偶联水平；实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）检测两种来源PDLSC中Mfn2的表达差异；用肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）模拟炎症微环境，分别应用正常培养基及含5、10 mg/L TNF-α的培养基培养H-PDLSC，设为H-PDLSC组、H-PDLSC＋TNF-α（5 mg/L）组和H-PDLSC＋TNF-α（10 mg/L）组，培养7 d后qPCR检测Mfn2表达水平；通过小干扰RNA Mfn2（siMfn2）下调P-PDLSC中Mfn2的表达，成骨诱导液培养7 d后qPCR检测成骨因子的表达差异，培养28 d后茜素红染色及氯化十六烷基吡啶定量检测各组矿化结节形成差异。结果透射电镜下观察内质网与线粒体偶联结构，与H-PDLSC组（偶联长度/线粒体周长为0.23±0.07、偶联长度/内质网周长为0.18±0.05）相比，P-PDLSC组中内质网线粒体偶联水平显著增加（偶联长度/线粒体周长为0.55±0.10、偶联长度/内质网周长为0.44±0.08）（P〈0.01）；特异性荧光染色检测内质网与线粒体共定位显示，P-PDLSC组内质网与线粒体共定位系数（0.71±0.09）显著高于H-PDLSC组（0.40±0.10）（P〈0.01）。P-PDLSC组Mfn2表达量（1.46±0.10）显著高于H-PDLSC组（0.99±0.08）（P〈0.01）；H-PDLSC＋TNF-α（5 mg/L）组及H-PDLSC＋TNF-α（10 mg/L）组Mfn2表达量均显著高于H-PDLSC组（P〈0.01）。成骨诱导7 d qPCR结果显示，P-PDLSC＋siMfn2组碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2及骨钙蛋白mRNA表达量均显著高于对照组（P〈0.01），28 d茜素红染色及氯化十六烷基吡啶定量结果与qPCR结果一致。结论炎症微环境下PDLSC的内质网-线粒体偶联增加，线粒体融合蛋白Mfn2表达量升高导致PDLSC成骨分化能力下降，其具体机制还需进一步研究。

关键词：牙周膜干细胞炎症微环境内质网线粒体偶联成骨分化

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