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糖尿病肾病中微小RNA在肾脏内皮-间充质转化中的调控机制

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中国老年学杂志 2023年第5期43卷 1246-1251页

作者：袁芸李宇宸杨璐瑶胡琼英成都中医药大学附属医院检验科四川成都611137 成都中医药大学医学技术学院四川成都611137

内皮细胞是一种呈多边形厚度极薄的扁平状细胞,由其嵌合排列组成毛细血管、小动脉、动脉、静脉和淋巴管等血管结构的内表面,参与调节和维持血管通透性及物质交换的过程^([1])。特殊情况下,完全分化的内皮细胞具有转化为其他类型细胞的... 详细信息

内皮细胞是一种呈多边形厚度极薄的扁平状细胞,由其嵌合排列组成毛细血管、小动脉、动脉、静脉和淋巴管等血管结构的内表面,参与调节和维持血管通透性及物质交换的过程^([1])。特殊情况下,完全分化的内皮细胞具有转化为其他类型细胞的可塑性,内皮细胞被生长因子刺激后发生形态功能变化,获得间充质样标志物,这一过程称为内皮-间充质转化(EndMT)^([2])。机体在纤维化过程中,由成纤维细胞组成的纤维化组织不受控制地过度积累,同时分泌大量细胞外基质(ECM).

关键词：糖尿病肾病内皮-间充质转化微小RNA

苦瓜蛋白对低剪切应力下apoE^(−/−)小鼠内皮-间充质转化的影响

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中国病理生理杂志 2021年第3期37卷 443-449页

作者：张凯刘峰涛刘亚密陶军夏林珍梁伶俐王佐南华大学附属第二医院重症监护室湖南衡阳421001 南华大学心血管疾病研究所湖南衡阳421001

目的:探讨苦瓜蛋白对低剪切应力内皮-间充质转化的影响,探讨其抗动脉粥样硬化作用新机制。方法:构建apoE^(−/−)小鼠颈动脉低剪切应力模型,将20只apoE^(−/−)小鼠随机分为苦瓜蛋白组和模型组,均予以高脂饮食喂养,苦瓜蛋白组腹腔注射苦瓜蛋... 详细信息

目的:探讨苦瓜蛋白对低剪切应力内皮-间充质转化的影响,探讨其抗动脉粥样硬化作用新机制。方法:构建apoE^(−/−)小鼠颈动脉低剪切应力模型,将20只apoE^(−/−)小鼠随机分为苦瓜蛋白组和模型组,均予以高脂饮食喂养,苦瓜蛋白组腹腔注射苦瓜蛋白(5 mg·kg^(−1)·d^(−1)),模型组注射等体积的生理盐水。ELISA检测apoE^(−/−)小鼠血浆中炎症因子水平;Western blot和免疫荧光检测颈总动脉中内皮及间充质标志物表达和共定位情况,以及细胞间黏附分子1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子1(VCAM-1)表达水平。结果:模型组低剪切应力下内皮完整性受损,且出现了动脉粥样硬化病变和内皮-间充质转化,但均可被苦瓜蛋白可所抑制。与模型组比较,苦瓜蛋白组内皮标志物血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)表达显著上调(P间充质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达显著下调(P内皮-间充质转化,与其抑制炎症因子和黏附分子的表达有关。

关键词：苦瓜蛋白动脉粥样硬化低剪切应力内皮-间充质转化炎症

1-磷酸鞘氨醇抑制TGF-β诱导的人脐静脉内皮细胞间充质转化

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中国病理生理杂志 2020年第5期36卷 822-826页

作者：汤石林彭良善赵正亮谭一清颜波王桥生南华大学附属第一医院重症医学科湖南衡阳421001

目的:探讨1-磷酸鞘氨醇(S1P)对转化生长因子β(TGF-β)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内皮-间充质转化(End-MT)的作用及机制。方法:根据实验分组采用TGF-β、S1P和S1P受体1(S1PR1)抑制剂VPC23019处理HUVECs。Western blot检测内皮细胞... 详细信息

目的:探讨1-磷酸鞘氨醇(S1P)对转化生长因子β(TGF-β)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内皮-间充质转化(End-MT)的作用及机制。方法:根据实验分组采用TGF-β、S1P和S1P受体1(S1PR1)抑制剂VPC23019处理HUVECs。Western blot检测内皮细胞标志物(CD31和VE-cadherin)、间充质细胞标志物(α-平滑肌肌动蛋白和成纤维细胞特异性蛋白1)、S1PR1和p-Smad3的表达;免疫荧光染色检测Smad3的核转位。结果:与TGF-β组相比,TGF-β+S1P组End-MT进程显著被抑制,Smad3磷酸化及核转位显著减少(P<0.05);而加入S1PR1抑制剂后,上述S1P的作用被逆转(P<0.05)。结论:在HUVECs中,S1P通过S1PR1抑制TGF-β诱导的End-MT,该效应可能与Smad3磷酸化及核转位水平的降低有关。

关键词： 1-磷酸鞘氨醇转化生长因子β Smad3蛋白内皮-间充质转化人脐静脉内皮细胞

c-SKI对冠脉内皮细胞增殖及内皮-间充质转化的影响

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中国病理生理杂志 2019年第10期35卷 1762-1768页

作者：王娟幸世峰吕忠英李鹏李红建罗梅新疆医科大学第五附属医院心血管内科

目的:探讨核蛋白c-SKI对冠状动脉内皮细胞增殖能力及内皮-间充质转化的影响。方法:使用不同浓度的转化生长因子β1(TGF-β1)作用人冠脉内皮细胞不同时点,Western blot法检测各组细胞中c-SKI、间充质细胞标志物波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋... 详细信息

目的:探讨核蛋白c-SKI对冠状动脉内皮细胞增殖能力及内皮-间充质转化的影响。方法:使用不同浓度的转化生长因子β1(TGF-β1)作用人冠脉内皮细胞不同时点,Western blot法检测各组细胞中c-SKI、间充质细胞标志物波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及内皮细胞标志物E-钙黏蛋白的表达。使用携带c-ski基因的慢病毒转染冠脉内皮细胞后采用RT-qPCR验证转染效率。将细胞分为4组:对照组、TGF-β1(5μg/L)组、c-ski基因感染+TGF-β1组及对照病毒感染+TGF-β1组。过表达c-SKI后,MTT实验和集落形成实验检测冠脉内皮细胞的增殖能力,Western blot检测波形蛋白、α-SMA、E-钙黏蛋白、Smad2、Smad3、p-Smad2和p-Smad3蛋白的水平。结果:TGF-β1处理冠脉内皮细胞后,c-SKI在冠脉内皮细胞中的表达呈剂量和时间依赖性下降(P内皮细胞增殖(P内皮细胞中α-SMA和波形蛋白的表达量(P内皮-间充质转化。结论:内皮-间充质转化过程中c-SKI表达下调,而过表达c-SKI能够抑制冠脉内皮细胞增殖及内皮-间充质转化,其机制可能与调控TGF-β1/Smad信号通路活性有关。

关键词： c-SKI 细胞增殖内皮-间充质转化 TGF-β1/Smad信号通路冠状动脉内皮细胞

积雪草苷对低氧肺动脉高压中内皮-间充质转化的作用（英文）

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中国药理学与毒理学杂志 2017年第5期31卷 385-392页

作者：叶文静潘阿肖金蒙蒙朱小春王良兴王晓冰瑞安人民医院风湿免疫科温州医科大学附属第一医院风湿免疫科温州医科大学附属第一医院呼吸内科

目的研究内皮-间充质转化在低氧肺动脉高压的作用及积雪草苷（AS）对内皮-间充质转化的影响。方法（1）体内实验:雄性SD大鼠分为常氧对照组、低氧模型组、AS 25和50 mg·kg;给药组。间歇低氧法（每天低氧8 h,每周6 d,持续4周）制备HPH... 详细信息

目的研究内皮-间充质转化在低氧肺动脉高压的作用及积雪草苷（AS）对内皮-间充质转化的影响。方法（1）体内实验:雄性SD大鼠分为常氧对照组、低氧模型组、AS 25和50 mg·kg;给药组。间歇低氧法（每天低氧8 h,每周6 d,持续4周）制备HPH大鼠模型,AS组用AS 25或50 mg·kg;·d;治疗4周。（2）体外实验:将人肺动脉内皮细胞（HPAEC）分为常氧组和低氧模型组,低氧模型组在低氧条件下（5%O;,5%CO;）培养,用AS 0,25,50,100或200 mg·L;作用72 h,CCK-8法检测HPAEC存活情况;再将HPAEC分为常氧对照组、常氧AS 100 mg·kg;组、低氧模型组和低氧AS 100 mg·kg;组,细胞培养5 d后用Transwell法检测HPAEC迁移能力,免疫荧光及Western蛋白印迹检测CD31和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白的表达水平。结果在体内和体外实验中,免疫荧光和Western蛋白印迹结果均显示,与常氧对照组相比,低氧模型组的CD31表达下降（P内皮-间充质转化有关,AS对此有一定的抑制作用。

关键词：内皮-间充质转化积雪草苷肺动脉高压缺氧

内皮-间充质转化在肺动脉高压发病机制中的研究进展

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中国病理生理杂志 2018年第9期34卷 1724-1728页

作者：张静静王岗李满祥西安交通大学第二附属医院急诊科陕西西安710004 西安交通大学第一附属医院呼吸与危重症医学科陕西西安710061

Endothelial-mesenchymal transition(EndMT)is a biological process through which endothelial cells change their endothelial phenotype into a mesenchymal or myofibroblastic phenotype with the expression of mesenchymal markers such asα-smooth muscle actin(α-SMA)and vimentin.When the pulmonary vascular endothelial cells are exposed to hypoxia and inflammatory stimulation,vascular smooth muscle cells in the outer and middle membrane accumulate through EndMT process,leading to pulmonary vascular remodeling and pulmonary arterial hypertension(PAH).Transforming growth factorβ(TGF-β)/bone morphogentic protein(BMP)signaling pathways promote EndMT process by bone morphogentic protein receptor 2(BMPR2)gene mutation which up-regulates high mobility group protein A1(HMGA1)gene and contributes to protein expression such as Slug and Snail,thus resulting in PAH.In brief,TGF-β/BMP signaling pathways and related regulators play an important role in pulmonary vascular reconstruction and the formation of PAH.

关键词：肺动脉高压内皮-间充质转化 α-平滑肌肌动蛋白 TGF-β/BMP信号通路

Notch信号通路与内皮-间充质转化及肺纤维化关系的研究进展

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中外医学研究 2023年第21期21卷 177-181页

作者：张伟津蔡丽云厦门医学院福建厦门361000

肺纤维化是一种慢性进行性的呼吸系统疾病,在老年群体中表现出很高的患病率。目前仍是一种难以治愈的间质性肺部疾病。近来研究表明,肺内皮细胞可通过内皮-间充质转化(EndMT)参与肺间质纤维化的形成和发展从而导致纤维化。Notch信号通... 详细信息

肺纤维化是一种慢性进行性的呼吸系统疾病,在老年群体中表现出很高的患病率。目前仍是一种难以治愈的间质性肺部疾病。近来研究表明,肺内皮细胞可通过内皮-间充质转化(EndMT)参与肺间质纤维化的形成和发展从而导致纤维化。Notch信号通路不仅广泛参与EndMT的过程而且广泛参与肺等器官的纤维化疾病,影响肺纤维化患者的预后。因此,本文主要对Notch信号通路与EndMT及肺纤维化的关系做一综述。

关键词：肺纤维化 Notch信号通路内皮-间充质转化

细胞分裂周期蛋白42通过内皮-间充质转化参与动脉型肺动脉高压小鼠右心室纤维化

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中国病理生理杂志 2023年第10期39卷 1756-1764页

作者：王晓彤秦立龙王寒黎汪丽静程玉生皖南医学院第一附属医院心功能科安徽芜湖241000 皖南医学院第一附属医院呼吸与危重症医学科安徽芜湖241000

目的:探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)是否通过内皮-间充质转化(EndMT)参与动脉型肺动脉高压(PAH)小鼠右心纤维化。方法:健康雄性C57BL/6小鼠(5~8周龄)18只,随机分成常氧对照(NC)组、PAH模型[SU5416(血管内皮生长因子受体2抑制剂)+低氧,S... 详细信息

目的:探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)是否通过内皮-间充质转化(EndMT)参与动脉型肺动脉高压(PAH)小鼠右心纤维化。方法:健康雄性C57BL/6小鼠(5~8周龄)18只,随机分成常氧对照(NC)组、PAH模型[SU5416(血管内皮生长因子受体2抑制剂)+低氧,SuHx]组和SuHx+ML141(Cdc42抑制剂)组,每组6只。所有存活小鼠在4周后用异氟烷麻醉,行心脏超声检查及右心室收缩压(RVSP)监测,之后处死小鼠。用HE和Masson染色观察小鼠右室心肌细胞改变及纤维化程度。使用磁珠分选小鼠心脏内皮细胞并用不同条件处理。通过Western blot检测小鼠心脏组织Cdc42表达水平及内皮细胞Cdc42和EndMT相关蛋白[波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血小板内皮细胞黏附分子1(PECAM-1/CD31)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)和锌指蛋白Snail]表达水平,同时用倒置显微镜观察各组内皮细胞形态。结果:体内实验结果显示,与NC组相比,SuHx组小鼠心脏组织Cdc42表达水平显著升高(P内皮细胞Cdc42表达水平显著升高,EndMT增强,EndMT相关蛋白vimentin和α-SMA的表达显著增加,CD31和VE-cadherin的表达显著降低(P<0.05);预防给予ML141(10μmol/L)后可缓解低氧72 h诱导的EndMT。结论:Cdc42可能通过上调EndMT参与PAH小鼠右心纤维化。

关键词：动脉型肺动脉高压细胞分裂周期蛋白42 内皮-间充质转化低氧

HGF调控Notch信号通路抑制人血管内皮细胞内皮-间充质转化机制的实验研究

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HGF调控Notch信号通路抑制人血管内皮细胞内皮-间充质转化机制的...

作者：杨蕊萍西南医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在通过TGF-β1诱导人血管内皮细胞内皮-间充质转化模型的建立,探讨HGF抑制人血管内皮细胞内皮-间充质转化的作用,以及Notch信号通路在此过程中可能的作用机制,以期寻找内皮-间充质转化可能的抑制方法,为内皮-间充质转化引... 详细信息

目的:本研究旨在通过TGF-β1诱导人血管内皮细胞内皮-间充质转化模型的建立,探讨HGF抑制人血管内皮细胞内皮-间充质转化的作用,以及Notch信号通路在此过程中可能的作用机制,以期寻找内皮-间充质转化可能的抑制方法,为内皮-间充质转化引起的血管疾病寻求可能的治疗靶点。方法:(1)TGF-β1诱导人脐静脉内皮细胞发生内皮-间充质转化模型的建立:用不同浓度的人TGF-β1蛋白作用于人脐静脉内皮细胞72小时,倒置显微镜观察细胞的形态学变化,提取细胞总RNA,RT-PCR检测内皮细胞标志物(CD31)及间充质细胞标志物(α-SMA、FSP1)的mRNA表达水平,根据结果选用浓度为10ng/ml的人TGF-β1蛋白进行后续实验。(2)c-Met siRNA转染人脐静脉内皮细胞沉默c-Met基因的模型建立:先用不同浓度的荧光标记siRNA转染人脐静脉内皮细胞,作用6小时后于荧光显微镜下观察每个浓度siRNA的转染效率,根据结果选用50nM的siRNA进行后续实验。再用不同片段的siRNA(001、002、003)转染人脐静脉内皮细胞,转染后作用72小时,RT-PCR检测c-Met mRNA表达水平,根据结果选用001号片段的siRNA进行后续实验。(3)实验分组及加样:实验分为4组:空白对照组(Ctr组)、TGF-β1组(T组)、TGF-β1+HGF组(T+H组)和TGF-β1+HGF+c-Met siRNA组(T+H+C/S组)。接种HUVECs于6孔板,完全培养基培养至细胞密度达30-40%,c-Met siRNA转染TGF-β1+HGF+c-Met siRNA组细胞6小时,各组细胞密度达60-70%时,更换为不含生长因子的培养基,并按分组加入相应人TGF-β1蛋白和HGF蛋白,使其终浓度均为10ng/ml,37℃、5%CO2的培养箱中培养72小时,于24、48、72小时倒置显微镜下观察各组细胞形态学变化。(4)Real-time PCR:按照实验各分组的要求完成细胞的相关处理,提取细胞总RNA,测定RNA浓度及纯度,逆转录RNA为cDNA,荧光定量PCR检测各组CD31、α-SMA、FSP1、RBP-J?的mRNA表达水平,结果进行统计分析;(5)Western Blotting实验:按照实验各组要求完成相关模型建立及药物干预,提取细胞总蛋白,BCA法测定蛋白浓度,依次完成制胶、加样、SDS-PAGE电泳、转模、脱脂牛奶封闭、4℃冰箱一抗孵育过夜、二抗孵育、ECL化学法曝光,Image J分析条带灰度值,结果进行统计分析。结果:(1)TGF-β1诱导人脐静脉内皮细胞发生内皮-间充质转化模型的建立:随着TGF-β1浓度的增加,CD31 mRNA的表达水平逐步下降,α-SMA和FSP1的mRNA表达水平逐步上升,其中在TGF-β1浓度为0-10ng/ml时,上述改变较为明显(P0.05);浓度为10ng/ml的人TGF-β1蛋白作用于HUVECs后24小时,镜下未观察到明显的形态学变化,作用后48小时,细胞出现长梭形样的改变,作用72小时,细胞外形呈长梭形或纺锤形,发生形态学改变的细胞达70%以上。(2)c-Met siRNA转染HUVECs可有效抑制c-Met基因的表达,起到基因沉默的效果。(3)RT-PCR检测各组CD31、α-SMA、FSP1、RBP-J?的mRNA表达水平:T组CD31 mRNA的表达低于Ctr组(P内皮细胞发生内皮-间充质转化(EndMT);(2)HGF能抑制

关键词：内皮-间充质转化转化生长因子肝细胞生长因子 Notch信号通路