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心肌尔康通过调节TGF-β/Smad信号通路改善内皮间质化抑制心肌梗死诱导心力衰竭

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心肌尔康通过调节TGF-β/Smad信号通路改善内皮间质化抑制心肌梗...

作者：付蓓蓓安徽医科大学

学位级别：硕士

背景:心肌梗死(Myocardial infarction,MI)是导致心力衰竭(Heart failure,HF)高发病率和高死亡率的主要风险因素之一。心肌尔康(Xin-Ji-Er-Kang,XJEK)是一种由人参、黄芪、麦冬、玉竹等14种药材组成的中草药验方,已经被证明在心梗小鼠... 详细信息

背景:心肌梗死(Myocardial infarction,MI)是导致心力衰竭(Heart failure,HF)高发病率和高死亡率的主要风险因素之一。心肌尔康(Xin-Ji-Er-Kang,XJEK)是一种由人参、黄芪、麦冬、玉竹等14种药材组成的中草药验方,已经被证明在心梗小鼠模型中具有对心脏功能的保护作用。目的:探讨心肌尔康能否通过抑制内皮间质转化(Endothelial-to-mesenchymal transition,End MT)发挥对心肌梗死诱导心力衰竭小鼠的保护作用,在此基础上进一步探讨其可能的分子机制。方法:收集心衰患者和健康对照人群的血清和心脏组织,Masson染色观察心衰患者心肌的病理变化,免疫荧光法(Immunofluorescence,IF)观察心衰组和健康对照组心肌组织中血小板-内皮细胞粘附分子(Platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31)和波形蛋白(vimentin)的表达情况。酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定两组血清中的肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)含量。动物实验采用54只雄性昆明小鼠,通过结扎冠状动脉左前降支复制MI模型,假手术组同样位置只穿过结扎线但不结扎。3天后,将存活的42只小鼠随机分为假手术组、假手术+心肌尔康组、MI组、MI+心肌尔康组、MI+SB431542组,假手术组和MI组灌胃蒸馏水,假手术+心肌尔康组和MI+心肌尔康组灌胃心肌尔康,MI+SB431542组腹腔注射SB431542。药物干预4周后,观察各组小鼠超声心动图,心脏形态学改变以及心重指数(心脏重量/体重,HW/BW)的变化。通过苏木精-伊红(Hematoxylin and eosin,HE)、Masson染色观察小鼠心肌的病理变化。ELISA法测定各组小鼠血清中心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)、N端前脑钠肽(N-terminal pronatriuretic peptide,NT-pro BNP)和小鼠心脏中TNF-α和TGF-β1的含量变化。蛋白印迹法(Western blot,WB)检测各组小鼠心肌组织中CD31、vimentin、α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)、磷酸化Smad2(Phospho-Smad2,p-Smad2),磷酸化Smad3(Phospho-Smad3,p-Smad3)和Smad2/3表达情况。IF方法观察各组小鼠心肌组织中CD31和vimentin的分布情况。体外实验选用人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),使用TGF-β1和TNF-α联合处理72 h建立体外End MT模型,并设定以下实验组:对照组(Control组)、对照加心肌尔康组(Control+心肌尔康组)、肿瘤坏死因子-α加转化生长因子-β组(Model组)、肿瘤坏死因子-α、转化生长因子-β加心肌尔康组(Model+心肌尔康组)。处理完毕后,采用IF和WB以及实时荧光定量PCR(Real time fluorescence quantitative PCR,RT-q PCR)法检测End MT相关蛋白表达情况,并通过Smad3慢病毒过表达实验探讨心肌尔康的作用机制。结果:与健康对照组相比,心衰患者血清中End MT生物标志物TNF-α和TGF-β1表达明显升高,免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,心衰患者的心脏组织中内皮细胞生物标志物CD31荧光强度显著降低,同时间充质细胞生物标志物vimentin荧光强度明显增强,提示心衰患者的心脏组织中发生了End MT。同样,也在小鼠模型中观察到在心肌梗死诱导的心衰过程中End MT的程度逐渐加重。并且在经过心肌尔康灌胃治疗后,超声心动图结果显示射血分数(Ejection fraction,EF)、短轴缩短率(Fractional shortening,FS)显著升高,表明心肌梗死引起的心功能障碍被显著改善。免疫荧光染色还表明,与心梗组相比,心肌尔康增强了CD31荧光强度同时显著降低vimentin荧光强度,表明心肌尔康抑制了心梗后发生的End MT。SB431542是TGF-β/Smad信号通路特异性抑制剂,结果显示给予SB431542后表现出与心肌尔康组类似的效果。另外,体外实验与体内实验结果类似,心肌尔康明显抑制TNF-α和TGF-β1联合诱导的En

关键词：心肌尔康心肌梗死内皮间质化 TGF-β/Smad信号通路

硬度可控的温敏水凝胶基底对兔角膜内皮体外扩增内皮间质化的影响

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解放军医学院学报 2020年第4期41卷 375-380,385页

作者：李宗源吴耀祖刘晶劼刘羽阳王丽强解放军总医院第一医学中心眼科北京100853 解放军总医院研究生院北京100853 清华大学医学院北京100084

目的探究可调节硬度的温敏聚乙二醇二丙烯酸酯-异丙基丙烯酰胺(PEG-NIPAM)水凝胶体系对兔角膜内皮体外培养时发生内皮间质化(endothelium mesenchymal transition,EnMT)程度的影响。方法采用4~5周龄的新西兰兔6只,麻醉处死后取双侧眼球... 详细信息

目的探究可调节硬度的温敏聚乙二醇二丙烯酸酯-异丙基丙烯酰胺(PEG-NIPAM)水凝胶体系对兔角膜内皮体外培养时发生内皮间质化(endothelium mesenchymal transition,EnMT)程度的影响。方法采用4~5周龄的新西兰兔6只,麻醉处死后取双侧眼球,妥布霉素盐水浸泡后剪下角膜,取下后弹力层,采用两步消化法提取兔原代角膜内皮并进行体外扩增。将P0代兔原代内皮细胞(corneal endothelium cells,CECs)置于6孔板培养,当细胞密度90%时分别传代于10组经不同预铺板涂层PEG硬度可控的温敏性水凝胶和细胞培养板(TCP)上。具体分组为三种预铺板条件(硫酸软骨素、层粘连蛋白混合物;纤维连接蛋白、胶原蛋白和白蛋白混合物;明胶)与不同浓度(1%、10%和20%)PEG分别组合以及对照组(TCP)。材料详细硬度由AFM法测定。经过三代培养,观察EnMT指标平滑肌肌动蛋白α(α-smooth muscle actin,α-SMA)染色结果。结果AFM法测得水凝胶硬度在浓度为1%PEG时制备的PEG-NIPAM为(346.4±26.53)Pa,浓度为10%PEG时为(8782±444.4)Pa,浓度为20%PEG为(11518±791.1)Pa,两两比较差异均有统计学意义(P内皮细胞在体外培养形态变化和α-SMA表达均证明发生EnMT。P1~P3代的兔角膜内皮细胞中α-SMA阳性细胞逐渐增加,细胞骨架转变为纤维化形态;20%PEG-NIPAM相比于TCP对照组α-SMA阳性细胞比例和强度明显减少;层粘连蛋白和硫酸软骨素的混合涂层相比于FNC涂层α-SMA阳性细胞比例和强度更低。结论在与天然硬度和结构成分接近的PEG-NIPAM水凝胶仿生材料上扩增兔角膜内皮细胞可减轻EnMT程度。

关键词：角膜内皮细胞温敏水凝胶内皮间质化 α-平滑肌动蛋白新西兰兔

舒洛地特失活YAP减轻大鼠动静脉瘘新生内膜增生

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陆军军医大学学报 2024年第12期46卷 1403-1409页

作者：李雅馨李冰玉林鑫刘烜代承麟赵渝傅麒宁王韵重庆医科大学附属第一医院血管外科重庆400016 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院细胞生物学教研室重庆400038

目的研究舒洛地特(sulodexide,SDX)对慢性肾脏疾病(chronic kidney disease,CKD)大鼠动静脉瘘(arteriovenous fistula,AVF)新生内膜增生的作用及调节机制。方法选取体质量(300±50)g雄性大鼠18只,随机分为3组(n=6):AVF组,对正常大鼠进行AVF手术;慢性肾病组(CKD+AVF),大鼠经诱导慢性肾病后进行AVF手术+生理盐水灌胃2月;舒洛地特组(CKD+AVF+SDX),大鼠经诱导慢性肾病后进行AVF手术+8 mg/(kg·d)SDX灌胃2月。HE染色检测血管内膜增生程度,免疫荧光检测Hippo信号通路相关分子YAP、pYAP、YAP下游靶蛋白间充质细胞标志分子(connective tissue growth factor,CTGF)表达情况。以不同浓度SDX(0、2.5、5、10、20、40μg/mL)处理人脐静脉细胞融合细胞(EAHy926),并以2.5μg/mL SDX分别处理细胞24、48、72 h,用CCK-8法检测细胞存活率。进一步利用CKD大鼠血清处理细胞,并在此基础上用SDX及YAP阻断剂维替泊芬处理,通过Western blot实验检测YAP、pYAP、CTGF及内皮细胞标志分子CD31表达。结果HE染色及免疫荧光结果表明,与AVF组大鼠相比,慢性肾病组大鼠瘘口处内膜严重增生(P<0.05),pYAP表达微弱而CTGF表达增强,舒洛地特组经SDX灌胃处理后内膜增生减轻,pYAP表达增强,CTGF表达水平降低(P<0.05)。CCK-8结果表明,随SDX浓度及处理时间的增加,细胞存活率降低(P<0.05)。Western blot结果发现,SDX促进EAHy926细胞pYAP及CD31的表达,抑制了CTGF的表达(P<0.05),与维替泊芬处理效果一致。结论舒洛地特通过阻止CKD引起的YAP激活,减轻了AVF血管内膜增生。

关键词：动静脉瘘新生内膜增生舒洛地特 YAP 内皮间质化

髂静脉受压综合征与下肢深静脉血栓形成相关性的研究进展

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中华血管外科杂志 2021年第1期6卷 68-71页

作者：许天泽李晓强南京大学医学院附属鼓楼医院血管外科，南京210008

髂静脉受压综合征（IVCS）是临床常见的静脉系统疾病，约占下肢深静脉血栓形成（DVT）的2%~5%，被认为是DVT最重要的继发性危险因素。本文将介绍IVCS的病因，从流行病学角度分析IVCS与DVT的相关性，并从内皮间质化、miRNAs促血栓机化、... 详细信息

髂静脉受压综合征（IVCS）是临床常见的静脉系统疾病，约占下肢深静脉血栓形成（DVT）的2%~5%，被认为是DVT最重要的继发性危险因素。本文将介绍IVCS的病因，从流行病学角度分析IVCS与DVT的相关性，并从内皮间质化、miRNAs促血栓机化、氧化应激和炎症与血流动力学的角度探讨两者相关性可能的内在机制，旨在为临床干预IVCS，预防DVT提供理论依据。

关键词：髂静脉受压综合征下肢深静脉血栓形成内皮间质化