检索结果-南通市图书馆

作者：周婕南京中医药大学

学位级别：硕士

目的:以HUVEC细胞为研究对象,研究六君子汤含药血清对H2O2诱导的HUVEC细胞内皮间质化的作用及机制探讨。方法:1.体外培养HUVEC细胞株;***-8法检测不同浓度的六君子汤含药血清和H2O2对HUVEC细胞活力的影响,以细胞存活率为依据筛选H2O2最... 详细信息

目的:以HUVEC细胞为研究对象,研究六君子汤含药血清对H2O2诱导的HUVEC细胞内皮间质化的作用及机制探讨。方法:1.体外培养HUVEC细胞株;***-8法检测不同浓度的六君子汤含药血清和H2O2对HUVEC细胞活力的影响,以细胞存活率为依据筛选H2O2最佳浓度进行后续实验;3.细胞迁移实验、成管实验分别检测正常组、模型组及不同浓度六君子汤含药血清组细胞迁移数、细胞成管长度;*** blot检测正常组、模型组及不同浓度六君子汤含药血清组 EndMT 相关蛋白 SNA11、α-SMA、CD31、VE-cadherin 以及 PI3K/AKT 通路相关蛋白PI3K、AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β的表达水平。结果:1.细胞存活率与H2O2浓度呈负相关。与正常组相比,H2O2浓度为50μmol/L时无统计学意义（P＞0.05）,浓度为大于100 μmol/L时细胞存活率降低,具有统计学意义（P＜0.05）,浓度大于200μmol/L,细胞存活率明显下降（P＜0.0001）。H2O2浓度为400、800 μmol/L时,细胞存活率小于50%,为进一步实验研究,选取浓度为200μmol/L的H2O2溶液进行后续实验;2.不同浓度六君子汤含药血清对HUVEC细胞存活率无影响,与空白血清组相比无统计学意义（P＞0.05）,表明3种浓度对HUVEC细胞均无毒性,将其分为低剂量组、中剂量组、高剂量组,进行后续实验;3.与正常组相比,模型组细胞迁移数、细胞成管长度显著增加,差异均有统计学意义（P＜0.01）;与模型组相比,3个浓度的六君子汤含药血清组细胞迁移数及细胞成管长度均减少（低剂量组P＜0.05,中、高剂量组P＜0.01）;4.与正常组相比,模型组SNAI1、α-SMA蛋白表达上调,VE-cadherin、CD31蛋白表达下调,PI3K、p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达上调,差异均有统计学意义（P＜0.01）;与模型组相比,3个浓度的六君子汤含药血清组SNAI1、α-SMA蛋白表达下调,VE-cadherin、CD31蛋白表达上调,PI3K、p-AKT、p-GSK-3β蛋白表达下调,差异均有统计学意义（低剂量组P＜0.05,中、高剂量组P＜0.01）。结论:1.H2O2有效诱导HUVEC细胞EndMT的发生;2.六君子汤含药血清能够通过抑制HUVEC细胞的迁移、成管,抑制新生血管的生成;3.六君子汤含药血清可能通过调控PI3K/AKT通路抑制HUVEC细胞EndMT的发生。

关键词：六君子汤含药血清内皮细胞间质化湿性年龄相关性黄斑变性 PI3K/AKT信号通路

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TGF-β1诱导内皮细胞间质化促进血管新生的机制研究

TGF-β1诱导内皮细胞间质化促进血管新生的机制研究

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作者：曹生军苏州大学

学位级别：硕士

内皮细胞间质化（Endothelial to mesenchymal transition,EndMT）是指在器官发育以及多种病理状态下,内皮细胞（endothelial cell,EC）丢失部分自身特征,获得某些间质细胞的表型,同时发生一些功能改变。EndMT是纤维化的诱导因素,心肌... 详细信息

内皮细胞间质化（Endothelial to mesenchymal transition,EndMT）是指在器官发育以及多种病理状态下,内皮细胞（endothelial cell,EC）丢失部分自身特征,获得某些间质细胞的表型,同时发生一些功能改变。EndMT是纤维化的诱导因素,心肌纤维化,肾纤维化病变处的成纤维细胞很大一部分是由内皮细胞经EndMT转变而来。多种因素均可以诱导EndMT,而EndMT参与器官的纤维化、肿瘤的浸润转移等等。血管新生是组织脏器发育过程中的一个重要环节。血管新生的第一个迹象出现在胚胎发育的早期,即中胚层来源的内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）分化为成熟的内皮细胞,经过不断的分裂、增殖形成一个初始的血管网络。血管内皮生长因子（vascular endothelial cell growth factor,VEGF）在这一过程中发挥着关键的作用,诱导内皮细胞增殖和迁移。这种原始的血管结构,也被称为初级毛细血管丛,为了建立一个成熟的循环网络,初级毛细血管丛需要进一步被重塑,改造。在成人中,血管新生主要存在于生理性子宫内膜修复、损伤组织和器官生长、炎症反应、恶性肿瘤等。大多数情况下内皮细胞是稳定的几乎处于静止状态,而当损伤,炎症反应等病理刺激后,各种细胞因子分泌增多,促血管生成和抗血管生成之间的平衡被打破,内皮细胞分裂、增殖、迁移最终形成新生血管。血管新生包括生理性（包括组织损伤修复,子宫内膜修复等）和病理性血管新生（炎症反应,恶性肿瘤）。血管新生与多种疾病的发生发展有关,深入的研究血管新生的机制,有利于临床相关疾病的诊治。本研究分为以下三部分:第一部分:TGF-β1诱导EndMT的实验条件探讨及表型鉴定目的:通过TGF-β1在体外诱导脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cell,HUVEC）发生间质化改变,并对表型进行验证,为后续实验提供合格的工具细胞。方法:TGF-β1是引起内皮细胞间质化的最重要的因子,我们在体外用TGF-β1（连续刺激5天）诱导HUVECs发生间质化改变。分别通过实时定量聚合酶链锁反应（Quantitative real time polymerase chain reaction,q-PCR）以及免疫印迹试验（Western-blot）检测细胞表面标记蛋白的改变。结果:细胞形态改变通过倒置显微镜观察,正常HUVECs排列规则,呈铺路石样,连接紧密。TGF-β1刺激后细胞分布紊乱,形态变为细长,触角增多,细胞间连接松散,可见类似平滑肌细胞样的细胞。Smad3蛋白磷酸化（phosphorylation of Smad3,p-Smad3）是TGF/Smad信号通路活性的一个检测指标。我们通过Western-blot检测不同浓度的TGF-β1引起Smad3蛋白磷酸化的改变。结果显示TGF-β1浓度为1 Ong/mL时p-Smad3升高最明显。通过q-PCR及Western-blot我们在RNA及蛋白水平均检测到内皮特异性标记物:CD31,VWF表达降低,间质细胞特异性标记物:α-SMA表达增高,提示HUVECs发生间质化改变。结论:TGF-β1（10ng/mL）连续刺激5天可以成功诱导HUVECs发生间质化改变。第二部分:TGF-β1对内皮细胞成血管功能的影响目的:探讨TGF-β1对内皮细胞成血管,增殖以及迁移功能的影响。方法:通过体外成血管实验,划痕实验,Transwell实验以及CCK8实验对TGF-β1刺激后内皮细胞成血管,迁移以及增殖功能进行检测。结果:HUVECs在基质胶中可以通过分裂增殖形成条索状的结构,在镜下横断面显示为环状的结构。我们在基质胶中种入相同细胞数的HUVECs以及TGF-β1刺激后的HUVECs。结果显示:TGF-β1刺激后,HUVECs在基质胶中形成较多的环状物,提示TGF-β1促进HUVECs生成较多的毛细血管。通过划痕实验,分别在在0h,12h,24h观察细胞迁移的距离。结果显示:TGF-β1刺激后HUVECs迁移能力增加。同时通过Transwell实验也证实了在TGF-β1刺激后HUVECs向下室迁移的细胞数目增多。CCK8细胞增殖检测结果显示:TGF-β1刺激后HUVECs在490nm处吸光度更强。结论:添加TGF-β1刺激后内皮细胞成血管功能增强,同时细胞迁移以及增殖能力提高。第三部分TGF-β1诱导EndMT促进血管新生的机制研究目的:探讨TGF-β1诱导EndMT促进血管新生的分子机制,方法:血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial cell growth factor VEGF）是促进血管新生最重要的细胞因子。我们通过q-PCR检

关键词： TGF-β1 脐静脉内皮细胞内皮细胞间质化成血管功能迁移能力 CCK8 VEGF AKT

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黄芪葛根汤与远志汤合方抑制糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉内皮细胞间质化的作用机制

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安徽中医药大学学报 2023年第4期42卷 61-66页

作者：李茂宸范颖李洪洲毕东雨林庶茹刘倩辽宁中医药大学中医学院辽宁沈阳110847 通用技术辽油宝石花医院中医科辽宁盘锦124010

目的基于转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad信号通路探究黄芪葛根汤与远志汤合方抑制糖尿病动脉粥样硬化大鼠血管内皮细胞间质化的作用机制。方法将70只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照... 详细信息

目的基于转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad信号通路探究黄芪葛根汤与远志汤合方抑制糖尿病动脉粥样硬化大鼠血管内皮细胞间质化的作用机制。方法将70只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(糖脉康颗粒)、黄芪葛根汤与远志汤合方1组(简称“合方1组”)、黄芪葛根汤与远志汤合方2组(简称“合方2组”)。空白对照组喂食普通饲料,第29天给予大鼠一次性腹腔注射柠檬酸缓冲液;其他组喂食高脂饲料,第29天给予大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素诱导2型糖尿病动脉粥样硬化模型,连续灌胃49 d。苏木精—伊红染色法观察主动脉的组织形态。检测各组大鼠血糖和血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin A1c,HbA1c)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)水平;采用酶联免疫吸附试验检测血清波形蛋白(Vimentin)、Twist1、TGF-β、锌指转录因子1(Snail1)水平;采用Western blot法检测肝脏固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-binding protein-1c,SREBP-1c)和主动脉Smad-2、Smad-3蛋白表达水平;采用qRT-PCR法检测葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter-4,Glut-4)、Vimentin、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)、SREBP-1c mRNA表达水平。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血糖、HbA1c、TG、LDL-C、Vimentin、Twist1、TGF-β、Snail1、SREBP-1c、Smad-2、Smad-3表达水平显著升高(P内皮细胞间质化的作用与其参与主动脉TGF-β/Smad信号通路有关。

关键词：糖尿病动脉粥样硬化内皮细胞间质化黄芪葛根汤远志汤转化生长因子-β Smad 信号通路

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松弛素对TGF-β诱导的内皮细胞间质化的抑制作用

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温州医学院学报 2014年第3期44卷 161-165页

作者：陈潇周浩周希蔡洁洁陈灵芝郑高暑黄伟剑张怀勤温州医科大学附属第一医院心内科浙江温州325015 温州市中心医院检验科浙江温州325000

目的 :探讨松弛素(RLX)对TGF-β诱导的内皮细胞间质化现象的影响。方法:采用体外分离的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为体外细胞模型,通过TGF-β10 ng/mL诱导内皮细胞间质化,100 ng/mL和200 ng/mL RLX分别预处理,再与TGF-β联合培养48 h... 详细信息

目的 :探讨松弛素(RLX)对TGF-β诱导的内皮细胞间质化现象的影响。方法:采用体外分离的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为体外细胞模型,通过TGF-β10 ng/mL诱导内皮细胞间质化,100 ng/mL和200 ng/mL RLX分别预处理,再与TGF-β联合培养48 h。光镜下观察细胞形态学改变,CCK-8实验和transwell实验检测细胞增殖和迁移能力,免疫荧光单双染技术观察vimentin和CD31的表达变化,蛋白免疫印迹技术观察各实验组vimentin、CD31、ve-cadherin和α-SMA的蛋白表达。结果:阴性对照组内皮细胞呈铺路石样生长,TGF-β诱导组细胞形态向梭形转化,呈扩散迁移趋势。与阴性对照组相比,TGF-β诱导组细胞增殖、迁移能力明显增强;而RLX可抑制TGF-β诱导的增殖和迁移。免疫荧光单染结果显示,与阴性对照组相比,TGF-β诱导组内皮细胞特异性蛋白CD31表达下调而间质细胞标志性蛋白vimentin明显上升;与TGF-β组相比,RLX联合TGF-β处理组CD31表达上调而vimentin表达下调。免疫荧光双染结果显示,阴性对照组以内皮性质的细胞为主,仅存在少量的CD31和vimentin双阳性细胞;TGF-β诱导组双阳性细胞明显增多;与TGF-β组相比,RLX联合TGF-β处理组间质效应的双阳性细胞下调,而内皮效应的双阳性细胞增多。蛋白免疫印迹结果显示,与阴性对照组相比,TGF-β诱导组内皮细胞特异性蛋白CD31(0.36±0.076 vs 0.88±0.086)和ve-cadherin(0.54±0.046 vs 1.09±0.13)表达下调而间质细胞标志性蛋白vimentin(0.72±0.102 vs 0.21±0.081)和α-SMA(0.88±0.084 vs 0.24±0.046)明显上升(P内皮细胞向间质化细胞转化。

关键词：松弛素内皮细胞间质化 TGF—p 心肌纤维化

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替米沙坦对高浓度葡萄糖引起的内皮细胞间质化的影响

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实用药物与临床 2017年第7期20卷 785-788页

作者：孙蓉尚粉青西安高新医院急诊科西安710075 西安市第一医院心内科西安710002

目的探讨替米沙坦对高浓度葡萄糖引起的内皮细胞间质化的影响。方法采用体外分离培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为细胞模型,通过高浓度葡萄糖(30 mmol/L)诱导内皮细胞间质化,TGF-β抑制剂SB-431542或替米沙坦预处理内皮细胞6 h,然后... 详细信息

目的探讨替米沙坦对高浓度葡萄糖引起的内皮细胞间质化的影响。方法采用体外分离培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为细胞模型,通过高浓度葡萄糖(30 mmol/L)诱导内皮细胞间质化,TGF-β抑制剂SB-431542或替米沙坦预处理内皮细胞6 h,然后用高浓度葡萄糖(30 mmol/L)孵育脐静脉内皮细胞48 h。RT-PCR和Western blot观察CD31、VE-cadherin、α-SMA和Vimentin表达变化。应用糖尿病小鼠模型验证上述指标的变化。结果高浓度葡萄糖可以促进内皮细胞TGF-β的表达,而替米沙坦可抑制高浓度葡萄糖引起的TGF-β表达增加;高浓度葡萄糖可以降低内皮细胞CD31、VE-cadherin的表达,增加α-SMA及Vimentin的表达。TGF-β抑制剂SB-431542及替米沙坦可以显著逆转高浓度葡萄糖对内皮细胞间质化的影响。结论替米沙坦可以降低TGF-β的表达,抑制高浓度葡萄糖诱导的内皮细胞间质化。

关键词：替米沙坦高浓度葡萄糖 TGF-β 内皮细胞间质化

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王不留行黄酮苷抑制动脉粥样硬化的形成及其机制研究

王不留行黄酮苷抑制动脉粥样硬化的形成及其机制研究

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作者：龚蕾蕾江南大学

学位级别：硕士

动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病,具有高发病率和高致死率,是引发高血压、脑卒中、脑梗死的主要原因。动脉粥样硬化的发病机理复杂,其中血管内皮损伤是主要原因之一。在各种有害刺激综合作用下,血管内皮细胞完整性丢失、血管内炎症加... 详细信息

动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病,具有高发病率和高致死率,是引发高血压、脑卒中、脑梗死的主要原因。动脉粥样硬化的发病机理复杂,其中血管内皮损伤是主要原因之一。在各种有害刺激综合作用下,血管内皮细胞完整性丢失、血管内炎症加重,引起白细胞黏附和迁移,造成内皮损伤,导致动脉粥样硬化。血管内皮的炎症和凋亡一直伴随着动脉粥样硬化的形成和发展。王不留行黄酮苷是从石科植物麦蓝菜种子中分离提取出来的具有较强活性的中药单体,可以抑制血管内皮功能紊乱、凋亡,具有很好的心血管的保护作用。为了研究王不留行黄酮苷对动脉粥样硬化的作用,本课题用20只ApoE敲除小鼠喂养高脂饲料建立动脉粥样硬化模型;第16周将小鼠随机平均分为2组,一组按1mg/kg/d的剂量腹腔注射王不留行黄酮苷,另一组注射等量的生理盐水,共4周;用20只C57BL/6J小鼠喂养普通饲料,第16周空白对照组(10只)腹腔注射等量的生理盐水,给药组(10只)按1 mg/kg/d的剂量腹腔注射王不留行黄酮苷,共计4周。实验结果表明,王不留行黄酮苷可以降低ApoE敲除小鼠的血压、血糖和体重,抑制主动脉及主动脉根部斑块,新生内膜和斑块纤维化的形成;降低了小鼠血清中的TG、TC、LDL-C的水平,升高了HDL-C的水平,qRT-PCR、ELISA、WB结果显示王不留行黄酮苷改善了ApoE敲除小鼠体内的炎症水平;Caspase 3活性检测和WB结果表明王不留行黄酮苷缓和了ApoE敲除小鼠血管内皮的凋亡;DCFH-DA和WB结果表明王不留行黄酮苷缓和了ApoE敲除小鼠体内ROS水平,抑制了主动脉p38 MAPK的磷酸化。这些研究结果表明王不留行黄酮苷可以抑制动脉粥样硬化斑块的形成和动脉粥样过程中的纤维化、炎症和凋亡,阻滞了ROS/p38 MAPK信号通路。揭示了王不留行黄酮苷可以作为一种新的抑制动脉粥样硬化的中药单体。氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮间充质转化(EndMT),内皮细胞的炎症和凋亡在包括动脉粥样硬化在内的心血管疾病的进展中起着关键作用。为了进一步研究王不留行黄酮苷对动脉粥样硬化过程中纤维化、炎症和凋亡的作用,我们使用100mg/ml ox-LDL模仿离体的动脉粥样硬化环境诱导HUVECs损伤。实验结果表明,王不留行黄酮苷可以抑制ox-LDL诱导的HUVECs间质化、炎症和凋亡;从机制上讲,暴露于ox-LDL环境中的HUVECs表现出ROS生成增加和p38 MAPK的磷酸化,而这一过程被王不留行黄酮苷抵消。重要的是,预孵ROS激活剂NAC或p38 MAPK磷酸化的激活剂anisomycin可以抑制王不留行黄酮苷对ox-LDL导致的内皮损伤的保护作用。我们的研究表明王不留行黄酮苷是通过ROS/p38 MAPK信号通路抑制ox-LDL诱导的HUVECs的EndMT、炎症和凋亡。王不留行黄酮苷可能对内皮损伤相关疾病包括动脉粥样硬化有治疗作用。

关键词：动脉粥样硬化王不留行黄酮苷 HUVEC细胞氧化低密度脂蛋白内皮细胞间质化炎症凋亡

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