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内皮型一氧化氮合酶基因在犬内皮细胞的转染和表达

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上海交通大学学报（医学版） 2006年第3期26卷 278-281页

作者：薛冠华张纪蔚张皓张柏根上海交通大学医学院仁济医院血管外科上海200001

目的探讨转染内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因后内皮细胞(EC)的功能变化。方法采用脂质体法转染eNOS基因于实验犬EC;RT-PCR和免疫组化法检测转染效果;分别采用比色法和酶联免疫法检测细胞培养液一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)和vWF的浓... 详细信息

目的探讨转染内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因后内皮细胞(EC)的功能变化。方法采用脂质体法转染eNOS基因于实验犬EC;RT-PCR和免疫组化法检测转染效果;分别采用比色法和酶联免疫法检测细胞培养液一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)和vWF的浓度;并观察转染细胞生长增殖情况。结果RT-PCR产物电泳和测序及免疫组化法检测证实转染效果满意;转染后EC培养液NOS和NO浓度在不同时间明显升高(120h分别为33.53和32.99),与正常组对比差异显著(P基因转染于实验犬EC;转染后eNOS基因在mRNA和蛋白质水平均高效表达;内皮细胞eNOS活性显著增强;转染后细胞生物学功能稳定。

关键词：基因基因转染内皮细胞内皮型一氧化氮合酶基因

内皮型一氧化氮合酶基因a/b多态性与中国人群糖尿病肾脏疾病易感性的Meta分析

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中国糖尿病杂志 2018年第10期26卷 797-801页

作者：苏勇王秀彬刘炳麟朱长聪张红邬贻萍青岛市市立医院质量管理考核部 266071 青岛大学附属医院信息统计科

目的基于Meta分析方法探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因a/b多态性与中国人群DKD的相关性。方法全面检索数据库,收集有关eNOS基因a/b多态性与中国人群DKD易感性的文献,对符合条件的研究结果应用RevMan 5.2和STATA 12.0软件进行统计分析... 详细信息

目的基于Meta分析方法探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因a/b多态性与中国人群DKD的相关性。方法全面检索数据库,收集有关eNOS基因a/b多态性与中国人群DKD易感性的文献,对符合条件的研究结果应用RevMan 5.2和STATA 12.0软件进行统计分析。结果共纳入10篇文献,包含病例组(DKD)1079例和对照组(T2DM)796例。Meta分析结果表明,eNOS基因a/b多态性与中国人群DKD密切相关[aavs bb:OR=2.02,95%CI 1.12～3.64,P=0.02;ab vs bb:OR=1.77,95%CI1.15～2.73,P=0.01;aavs(ab+bb):OR=1.99,95%CI 1.12～3.57,P=0.02;(aa+ab)vs bb:OR=1.97,95%CI1.29～3.00,P=0.002;avs b:OR=1.88,95%CI 1.23～2.86,P=0.003]。敏感性分析提示结论稳定性好。结论 eNOS基因a/b多态性与中国人群DKD的发生发展相关;等位基因a可能是中国人群DKD的易感基因。

关键词：糖尿病肾脏疾病内皮型一氧化氮合酶基因基因多态性 Meta分析

内皮型一氧化氮合酶基因多态性与维吾尔族妇女妊娠期高血压疾病发病的关系

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中华妇产科杂志 2005年第11期40卷 776-777页

作者：蔡霞赵静焦永慧庞晨新疆医科大学第一附属医院妇产科乌鲁木齐830054 新疆维吾尔自治区人民医院妇产科乌鲁木齐市妇产医院产科

内皮型一氧化氮合酶基因多态性与2型糖尿病肾病相关

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中华内分泌代谢杂志 2004年第5期20卷 435-437页

作者：邢倩苏本利李昌臣杜建玲白然张嘉宁许朝晖大连医科大学附属第一医院内分泌科 116011 大连医科大学附属第二医院内分泌科大连医科大学生化教研室

目的　研究内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)基因多态性与 2型糖尿病肾病 (DN)的关系。方法　检测 2 66例大连地区的 2型糖尿病患者 (其中 88例大量蛋白尿患者 ,42例微量白蛋白尿患者 ,13 6例不伴有肾病作为对照者 )eNOS基因 4b/4a的多态性。... 详细信息

目的　研究内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)基因多态性与 2型糖尿病肾病 (DN)的关系。方法　检测 2 66例大连地区的 2型糖尿病患者 (其中 88例大量蛋白尿患者 ,42例微量白蛋白尿患者 ,13 6例不伴有肾病作为对照者 )eNOS基因 4b/4a的多态性。结果　 2型糖尿病肾病组 4a等位基因和 4a/4a基因型频率明显高于不伴肾病的 2型糖尿病组 (分别为 χ2 =9.3 0 ,P 基因患者与 4b等位基因者相比 ,患病的风险率OR =3 .3 8,95 %CI =1.49～ 7.67。结论　携带 4a等位基因的 2型糖尿病患者比携带 4b等位基因更易罹患肾病 ,4a等位基因可能是 2型糖尿病肾病的一个独立危险因素。

关键词： 2型糖尿病肾病患者等位基因内皮型一氧化氮合酶基因携带多态性 eNOS基因大连地区微量白蛋白尿

内皮型一氧化氮合酶基因对果糖诱导高血压大鼠的降压效应

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中华心血管病杂志 2003年第4期31卷 289-292页

作者：汪培华赵春霞林立汪道文华中科技大学同济医学院同济医院心内科武汉430030

目的　研究静脉注射人内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)基因对果糖诱导高血压大鼠的降压作用及其对胰岛素抵抗的影响。方法　通过给雄性Sprague Dawley大鼠饮用 10 %的果糖水诱导制成高血压动物模型 ,2周后经静脉注入含人eNOScDNA的pcDNA·eNO... 详细信息

目的　研究静脉注射人内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)基因对果糖诱导高血压大鼠的降压作用及其对胰岛素抵抗的影响。方法　通过给雄性Sprague Dawley大鼠饮用 10 %的果糖水诱导制成高血压动物模型 ,2周后经静脉注入含人eNOScDNA的pcDNA·eNOS重组质粒。每周测血压 2次 ,并于注入eNOS重组质粒后 2周与对照组同时取血 ,测定血糖、血脂及血胰岛素水平 ,并记录 2 4h尿量。结果　一次静脉注射含人eNOS基因的重组质粒后第 3天 ,大鼠升高的收缩压明显下降至 ( 12 2 80± 0 2 )mmHg( 1mmHg =0 133kPa) ,最大降压效应在导入基因后第 14天 ,血压下降至 ( 12 0 30± 1 6 )mmHg并持续 3周以上 ,而对照组血压 [( 12 5 80± 0 4 )mmHg]无变化 (P 基因的导入可能有助于降低血压 ,并改善高血压伴胰岛素抵抗 ,提高患者的胰岛素敏感性。

关键词：高血压内皮型一氧化氮合酶基因果糖降压作用大鼠基因疗法

内皮型一氧化氮合酶基因多态性与儿童体位性心动过速综合征的相关性

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中华实用儿科临床杂志 2013年第13期28卷 1033-1035页

作者：憨贞慧刘瑞敏张曦开封市儿童医院 475000 河南大学医学院分子与免疫学重点实验室

目的探讨内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因启动子-T786C、第7外显子G894T突变与儿童体位性心动过速综合征（POTS）的相关性。方法选择POTS患儿（POTS组）及健康儿童（健康对照组）各60例，提取静脉血基因组DNA，通过PCR扩增获得目的片... 详细信息

目的探讨内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因启动子-T786C、第7外显子G894T突变与儿童体位性心动过速综合征（POTS）的相关性。方法选择POTS患儿（POTS组）及健康儿童（健康对照组）各60例，提取静脉血基因组DNA，通过PCR扩增获得目的片段，限制性内切酶消化目的片段，计数基因型及突变基因频率。结果 eNOS基因第7外显子的 G894T位点有3种基因型：GG、GT、TT。健康对照组14例发生 G894T突变，其中纯合子3例，杂合子11例；POTS组24例发生G894T突变，其中纯合子6例，杂合子18例。POTS组突变基因型频率（纯合子＋杂合子）和T等位基因频率高于健康对照组（P 〈0.05）。eNOS基因启动子 T786C位点有3种基因型：TT、CC、TC，健康对照组12例发生T298C突变，其中纯合子3例，杂合子9例；POTS组23例发生T786C突变，其中纯合子6例，杂合子17例。POTS组基因型频率（纯合子＋杂合子）和C等位基因频率高于健康对照组（P 〈0.05）。结论 G894T和T786C突变基因型频率可能为POTS发病的一个危险因子。

关键词：体位性心动过速综合征内皮型一氧化氮合酶基因外显子突变

内皮型一氧化氮合酶基因转染人体外培养大隐静脉的实验研究

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广东医学 2005年第3期26卷 315-316页

作者：陶登顺张仁福王辉山汪曾炜朱洪玉张铁铮第四军医大学西京医院心血管外科西安710033 沈阳军区总医院心血管外科沈阳110016

目的　探讨腺病毒载体介导的人内皮型一氧化氮合酶基因转染人大隐静脉 ,进行体外培养后检测人内皮型一氧化氮合酶基因的表达 ,并对内膜增生进行研究。方法　取 6例冠状动脉旁路移植手术患者剩余大隐静脉 ,横切成 5mm血管环 ,随机分为 3... 详细信息

目的　探讨腺病毒载体介导的人内皮型一氧化氮合酶基因转染人大隐静脉 ,进行体外培养后检测人内皮型一氧化氮合酶基因的表达 ,并对内膜增生进行研究。方法　取 6例冠状动脉旁路移植手术患者剩余大隐静脉 ,横切成 5mm血管环 ,随机分为 3组 ,每组 6份 ,A :对照组 ,B :空载腺病毒液感染组 ,C :eNOS基因转染组。B ,C组分别置于空载腺病毒液和AdCMVeNOS溶液中 1h ,取出后体外培养 14d ,应用多聚寡核苷酸探针和高敏感标记技术及使用敏感加强型的原位检测方法检测外源性基因mRNA的表达 ;免疫组织化学染色方法检测eNOS蛋白的定位 ;HE及弹力纤维染色后 ,应用计算机图像分析系统检测移植静脉内膜、中膜增生情况。结果　培养的大隐静脉在 14d后有新内膜形成和显著的中膜增厚 ,人内皮型一氧化氮合酶基因在人体外培养大隐静脉中表达出相应的mRNA和蛋白质 ;培养 14d ,与对照组相比 ,空载腺病毒液感染组大隐静脉内膜和中膜厚度无明显变化 ;eNOS基因转染组移植静脉内膜和中膜厚度分别减少 33. 6 %、11. 6 % ,内膜厚度 /中膜厚度比值 (I/M)减少 5 3. 8%。结论　腺病毒载体介导的人内皮型一氧化氮合酶基因成功转染体外培养大隐静脉中并有效表达 ,eNOS基因具有防治体外培养大隐静脉内膜增生作用。

关键词：大隐静脉内皮型一氧化氮合酶基因体外培养转染内膜 eNOS基因中膜厚度 RNA 表达标记技术

内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与冠心病的相关性分析

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内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与冠心病的相关性分析

作者：黄旭梅浙江大学

学位级别：硕士

背景冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）是当今威胁人类健康的主要疾病之一,冠心病是多种遗传因素和环境因素相互作用所致的多基因疾病,年龄、高血压、吸烟、肥胖等传统危险因素已广为人知。近年来,冠心病相关基因的定位和识别成为研... 详细信息

背景冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）是当今威胁人类健康的主要疾病之一,冠心病是多种遗传因素和环境因素相互作用所致的多基因疾病,年龄、高血压、吸烟、肥胖等传统危险因素已广为人知。近年来,冠心病相关基因的定位和识别成为研究的热点,内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因已被列入冠心病研究的候选基因。一氧化氮（NO）是细胞的一种重要生物活性介质,几乎参与各种疾病的病理生理过程,也是冠心病的发生的病理生理基础。一氧化氮合酶是体内NO水平及其生成的唯一限速酶,其活性与遗传有关。生理状态下主要由内皮型（eNOS）调节NO的持续生成。NO水平与内皮型一氧化氮合酶基因的多态性密切相关。人eNOS基因编码1203个氨基酸,定位于染色体7q35—q36,全长21～22kb,包括25个内含子和26个外显子。eNOS基因存在多种多态性,其中G894T多态性与冠心病关系密切,G894T多态性可导致所编码的氨基酸Glu298Asp多态性。结构决定功能,Glu298Asp多态性可能就意味着eNOS功能多态性,导致eNOS活性降低,NO水平下降,促进动脉粥样硬化。本研究旨在探讨内皮型一氧化氮合酶基因（eNOS）G894T多态性与冠心病的关系,并初步了解传统的危险因素、遗传因素在冠心病发生、发展中的作用。一、研究对象冠心病组:196例冠心病患者选自浙江大学医学院附属第二医院心内科,符合世界卫生组织（WHO）关于缺血性心脏病的命名及诊断标准,所有患者经冠状动脉造影证实。对照组:189例非冠心病组人群选自浙江大学医学院附属第二医院心内科冠状动脉造影阴性或未达到冠心病诊断标准的患者。本研究人群个体之间无血缘关系,均为汉族人。二.研究方法冠状动脉病变的评价冠状动脉造影证实时,以左前降支、左回旋支、右冠状动脉及主要分支中任何一支血管狭窄程度≥50%为阳性。并根据累及支数定义为单支、双支和三支病变,累及左主干者记作双支病变,统计病变血管支数。基因组DNA抽提和eNOS G894T基因多态性检测1.白细胞基因组DNA抽提:酚/氯仿法提取外周血白细胞DNA。*** G894T基因多态性检测:采用PCR-RFLP技术。上游引物:5'-CATGAGGCTCAGCCCCAGAA C-3'下游引物:5'-AGTCAATCCCTTTGGTGC TCAC-3。PCR反应体系共25μl,PCR反应体系共25ul:10×PCR缓冲液2.5ul,样本DNA 2.5ul,Taq DNA聚合酶0.25ul（1U）,dNTP 0.5ul,MgCl21.5ul,引物终浓度均为0.5umol/L。扩增条件:在PCR仪上扩增,95℃预变性5分钟,95℃变性45秒,60℃退火45秒,72℃延伸1分钟,共30个循环后72℃终末延伸5分。PCR产物以2%琼脂糖凝胶（含溴化乙锭0.5ug/ml）电泳,以85V电泳30分钟,UA凝胶成像仪上观察是否有PCR产物并摄影保存。酶切反应:取PCR产物10ul,Mob I内切酶10U,10×酶切缓冲液2ul,反应总体积25ul。在37℃水浴16小时,一旦第894位点出现G→T,206bp的PCR产物就会被切割为119bp和87 bp的片断。酶切产物以2%琼脂糖凝胶（含溴化乙锭0.5ug/ml）电泳,以85V电泳30分钟,UA凝胶成像仪上观察并摄影保存。三、统计分析以直接计数法计算冠心病组患者和对照组的基因型和等位基因频率,组间比较采用x检验。资料分析应用SPSS 10.0软件包作统计学处理。遗传平衡吻合度x检验群体基因型分布是否符合Hardy-weinberg平衡定律。计量资料均采用均数±标准差（X±S）表示,组间均数间统计学差异用t检验,各组基因型和等位基因频率之间的比较用x检验,相对危险度以比值比（OR）的95%的可信区间（95%CI）来表示,p＜0.05表示有统计学意。结果1.本地区汉族人群中存在G894T基因多态性。通过吻合度检验,eNOS基因型和等位基因频率的分布符合Hardy-weinberg平衡（x2=0.12,P＞0.05）。2.冠心病组基因型分布及基因突变频数明显高于对照组,冠心病组吸烟者与对照组对比差异更明显,x检验结果分别为:x=7.97,p＜0.01和x=10.58,p＜0.01。3.吸烟者与非吸烟者基因型分布及等位基因频率比较x分别为5.82、5.77,p值均小于0.05。***+TT基因型分布在冠心病单支病变与双支+三支病变间无显著差异;在冠心病吸烟者中表现出显著差异,x=6.48,p＜0.05。5.冠心病组吸烟合并高血压病者与吸烟的无

关键词：冠心病内皮型一氧化氮合酶基因 G894T多态性吸烟危险因素

内皮型一氧化氮合酶基因对心肌梗死大鼠心室重塑的影响

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内皮型一氧化氮合酶基因对心肌梗死大鼠心室重塑的影响

作者：秦卫南京医科大学

学位级别：硕士

目的观察大鼠心肌梗死后转化生长因子-β1(TGF-β1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)以及p-p38MAPK的动态变化,探讨它们在心室重塑过程中的作用。方法结扎雄性SD大鼠冠状动脉前降支建立心肌梗死模型并设假手术组为对照,术后1、7、14和... 详细信息

目的观察大鼠心肌梗死后转化生长因子-β1(TGF-β1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)以及p-p38MAPK的动态变化,探讨它们在心室重塑过程中的作用。方法结扎雄性SD大鼠冠状动脉前降支建立心肌梗死模型并设假手术组为对照,术后1、7、14和21d检测大鼠血流动力学指标;HE染色观察梗死区域组织病理变化;westernblot检测心肌组织TGF-β1、p38MAPK以及p-p38MAPK蛋白的表达水平。结果与假手术组相比,心肌梗死组大鼠心脏功能明显下降;心肌梗死大鼠心肌纤维化程度逐渐增加;心肌组织TGF-β1蛋白表达进行性增加,p38MAPK蛋白表达基本不变,而磷酸化蛋白p-p38MAPK表达则是先上升后下降。结论大鼠心肌梗死后TGF-β1蛋白表达逐渐升高,它的升高可能激活了p38MAPK的磷酸化过程,TGF-β1是大鼠心肌梗死后心室重塑病理生理过程中的重要因子之一。目的研究内皮型一氧化氮合酶(endothelialnitricoxidesynthase,eNOS)基因对心肌梗死大鼠心室重塑的影响。方法结扎雄性SD大鼠冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,在心肌梗死周围区注射携带eNOS基因的腺病毒、或者等量的生理盐水、或者不含目的基因的腺病毒载体。3周后检测所有大鼠心功能指标,TUNEL法评价梗死区周围心肌细胞凋亡程度,RT-PCR检测基质金属蛋白酶-2和9(matrixmetalloproteinase,MMP-2、MMP-9)mRNA转录水平,westernblot检测caspase-3、eNOS以及转化生长因子(TGF)-β1的蛋白水平。结果四组大鼠凋亡指数分别为:16.81±0.43、18.25±0.32、18.19±0.21、5.64±0.18,成功转染eNOS基因的心梗大鼠,梗死区周围心肌细胞凋亡程度比前三组低,差异具有统计学意义(P基因的心梗大鼠,心肌MMP-2、MMP-9mRNA表达均较前三组降低,差异具有统计学意义(P基因的心梗大鼠心肌eNOS表达升高,差异具有统计学意义(P基因可以抑制心肌梗死大鼠细胞凋亡,抑制胶原沉积,改善心脏功能,延缓心室重构,对大鼠心肌梗死具有一定的治疗作用。

关键词：心肌梗死心室重塑转化生长因子-β1 p38丝裂原活化蛋白激酶内皮型一氧化氮合酶基因心肌梗死心室重塑细胞凋亡胶原沉积转化生长因子-β1