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贮藏方法对紫花苜蓿种子内生根瘤菌传代能力的影响

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草原与草坪 2022年第2期42卷 18-27页

作者：刘畅师尚礼康文娟苗阳阳吴芳甘肃农业大学草业学院草业生态系统教育部重点实验室甘肃省草业工程实验室中-美草地畜牧业可持续发展研究中心甘肃兰州730070 黑龙江八一农垦大学动物科技学院草业科学系黑龙江大庆163319

为探索贮藏方法对紫花苜蓿种子内生根瘤菌传代能力的影响,将青色荧光蛋白标记根瘤菌gn5f(内源)和12531f(外源)接种于结荚期甘农5号紫花苜蓿。收获的种子,在25℃+自然湿度(S1)、25℃+硅胶干燥(S2)、4℃+冰箱冷藏湿度(S3)和-4℃+冰箱冷冻... 详细信息

为探索贮藏方法对紫花苜蓿种子内生根瘤菌传代能力的影响,将青色荧光蛋白标记根瘤菌gn5f(内源)和12531f(外源)接种于结荚期甘农5号紫花苜蓿。收获的种子,在25℃+自然湿度(S1)、25℃+硅胶干燥(S2)、4℃+冰箱冷藏湿度(S3)和-4℃+冰箱冷冻湿度(S4)条件下贮藏3年,然后播种于大田,次代植株苗期进行内生根瘤菌传代能力和传代有效性检测,以无菌水浇灌苜蓿植株后收获的种子为对照。结果表明:标记根瘤菌gn5f和12531f均可通过种子传代到次代植株。S1贮藏条件下,gn5f在次代植株根、茎、叶的定殖数量显著高于其他处理(P根瘤重、根瘤等级、固氮酶活性、单株叶片数、株高、根长、地上部分鲜重、地上部分干重、根鲜重、根干重较CK分别增加了37.00%、1183.54%、47.52%、23909.07%、38.72%、40.63%、33.82%、68.11%、137.73%、223.70%、600.00%。S2贮藏条件下,12531f在次代植株根部定殖数量最高,为560.63 cfu/g,次代植株苗期单株结瘤数、根瘤直径、根瘤等级、固氮酶活性、单株叶片数、株高、根长、地上部分鲜重、地上部分干重、根鲜重、根干重较CK分别增加了37.90%、21.33%、27.01%、288.21%、41.22%、39.40%、36.04%、72.37%、144.58%、284.05%、872.04%。适宜的贮藏方法有利于提高种子内生根瘤菌的传代能力和传代有效性,但因根瘤菌株种类和来源而异。gn5f内生种子在S1条件下贮藏、12531f内生种子在S2条件下贮藏分别有助于gn5f和12531f传代到次代植株并高效结瘤固氮,促进次代植株生长;且S2条件贮藏的12531f内生种子形成的次代植株结瘤指标和生长指标显著优于S1条件贮藏的gn5f内生种子形成的次代植株。

关键词：紫花苜蓿种子贮藏方法内生根瘤菌传代能力

内生根瘤菌在苜蓿芽苗与种子内的数量及优势度

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中国草地学报 2009年第5期31卷 90-95页

作者：张淑卿李剑峰师尚礼霍平慧甘肃农业大学草业学院/草业生态系统教育部重点实验室/中-美草地畜牧业可持续发展研究中心甘肃兰州730070

比较了内生根瘤菌在11个苜蓿品种种子和芽苗中的存在部位与数量,并对游客苜蓿胚珠、幼嫩种子及芽苗内的根瘤菌含量和在可检出菌中所占的比例进行研究。结果表明:不同品种种子间根瘤菌含量有显著差异(P<0.05),但其分布部位和比例基本一致... 详细信息

比较了内生根瘤菌在11个苜蓿品种种子和芽苗中的存在部位与数量,并对游客苜蓿胚珠、幼嫩种子及芽苗内的根瘤菌含量和在可检出菌中所占的比例进行研究。结果表明:不同品种种子间根瘤菌含量有显著差异(P内,而在子叶及胚中分布极少;游客苜蓿胚珠受精后开始有根瘤菌存在,含量随种子的发育而增大。种子储存1年后较刚收获时根瘤菌含量增加6.85倍,杂菌数量仅增大1.57倍;苜蓿芽苗中根瘤菌主要存在于子叶,仅37.24%的根瘤菌存在于茎,分别占其部位总可检出菌(同培养条件下)数的93.18%和76.78%,幼根内无可检出菌。说明在种子发育、储藏和发芽的过程中,根瘤菌在种子/芽苗中同一生态位下的内生菌菌落中占据优势。

关键词：内生根瘤菌苜蓿芽苗种子

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苜蓿内生根瘤菌分布部位与数量变化动态

中国生态农业学报 2009年第6期17卷 1200-1205页

作者：李剑峰张淑卿师尚礼霍平慧甘肃农业大学草业学院草业生态系统教育部重点实验室中-美草地畜牧业可持续发展研究中心兰州730070

为探明根瘤菌在苜蓿植株及其种子内的分布规律,对苜蓿植株及种子各部位在不同生育期内生根瘤菌的分布和数量变化进行了研究。结果表明:苜蓿植株内根瘤菌的分布和数量在空间和时间上都具有很大异质性。空间分布上,不同部位组织的内生根... 详细信息

为探明根瘤菌在苜蓿植株及其种子内的分布规律,对苜蓿植株及种子各部位在不同生育期内生根瘤菌的分布和数量变化进行了研究。结果表明:苜蓿植株内根瘤菌的分布和数量在空间和时间上都具有很大异质性。空间分布上,不同部位组织的内生根瘤菌数量随植株光合产物源-库的运输方向呈逐渐增大的趋势,绝大部分内生根瘤菌分布于植株的根系,并主要分布于毛根,在主根内主要存在于表皮和皮层,中柱分布较少;在植株地上部分,内生根瘤菌主要在营养期末分布于花芽[8.6～9.6×103cfu·g-1(FW)],在蕾期和花期分布于雌蕊子房的子房壁,在结荚期分布于荚果果皮(1.07×103cfu·pod-1),在种子成熟期则主要存在于新生的种子中;茎内的根瘤菌数量在营养期和结荚期不足2×102cfu·g-1(FW),而在蕾期和花期完全绝迹;叶片内则始终不存在根瘤菌。在时间上,结荚期根、荚果皮内的根瘤菌数量明显高于其他时期;花内各器官(不包括花梗)在授粉后根瘤菌数量迅速增加;由子房向荚果发育的过程中,子房壁和胚珠内的根瘤菌数量随时间呈对数增长;胚珠在受精后即存在有内生根瘤菌,并且幼嫩种子内生根瘤菌数量远高于受精胚珠,证明内生根瘤菌能被转运并定殖在发育早期的种子中。两个苜蓿品种成熟种子在收获120d后,根瘤菌数量比刚收获时分别增加131.46倍("陇东")和11.76倍("游客"),说明根瘤菌进入种子后,仍然有一个继续繁殖增长的过程。

关键词：苜蓿内生根瘤菌生育期器官

苜蓿繁殖器官发育过程与内生根瘤菌侵染数量的关系

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江苏农业学报 2009年第5期25卷 997-1001页

作者：张淑卿李剑峰师尚礼甘肃农业大学草业学院甘肃兰州730070 甘肃农业大学草业学院草业生态系统教育部重点实验室/中-美草地畜牧业可持续发展研究中心甘肃兰州730070

为探明苜蓿种子内生根瘤菌的携带机理,试验对4个品种的紫花苜蓿在一个生育期中内生根瘤菌在花芽、花与种子中的分布部位与数量变化进行了研究。结果表明:内生根瘤菌在营养期内主要存在于花芽中(1 g花芽中有9 250个);而在现蕾期仅存在于... 详细信息

为探明苜蓿种子内生根瘤菌的携带机理,试验对4个品种的紫花苜蓿在一个生育期中内生根瘤菌在花芽、花与种子中的分布部位与数量变化进行了研究。结果表明:内生根瘤菌在营养期内主要存在于花芽中(1 g花芽中有9 250个);而在现蕾期仅存在于子房壁组织(1个花蕾中有4.00个);花期存在于花粉(1朵花中有7.40个)、受精胚珠(1粒胚珠中有0.80个)、花托(1朵花中有4.20个)和子房壁(1朵花中有15.20个);结荚期主要存在于荚果皮(1个荚果中有890个)及幼嫩种子(1粒种子中有23.36个)中;成熟种子的种皮内有大量分布(1粒种子中有32.86个),种胚(1粒种子中有0.46个)及子叶(1粒种子中有0.52个)内仅有少量分布。由此表明种子内生根瘤菌可能的来源途径:在花期,存在于花粉表面和子房壁组织的根瘤菌通过子房壁和珠被的花粉管进入胚珠珠被;或在结荚期,根瘤菌通过子房壁与珠被联结的通道进入种皮。

关键词：苜蓿生育期器官内生根瘤菌数量动态

加热处理对紫穗槐种子萌发、内生根瘤菌及植株生长的影响

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江苏农业科学 2011年第6期39卷 572-574页

作者：陈利云汪之波张宗舟天水师范学院生命科学与化学学院甘肃天水741000

对采用不同温度和时间水浴加热处理的紫穗槐种子,进行种子萌发、内生根瘤菌数量以及植株生长检测。结果显示,不同温度、时间加热处理对种子萌发率、内生根瘤菌数目及植株生长影响不同。适宜的加热温度与时间增加种子萌发率,降低休眠率,... 详细信息

对采用不同温度和时间水浴加热处理的紫穗槐种子,进行种子萌发、内生根瘤菌数量以及植株生长检测。结果显示,不同温度、时间加热处理对种子萌发率、内生根瘤菌数目及植株生长影响不同。适宜的加热温度与时间增加种子萌发率,降低休眠率,但随加热温度升高和时间延长,种子死亡率增高。在相同温度下,种子内生根瘤菌数目随着加热时间延长而减少;在相同时间内,种子内生根瘤菌数目随温度升高也下降。植株结瘤率、株高、地上生物量都与种子加热温度的高低及加热时间的长短相关,而结瘤植株的固氮酶活性与处理温度及时间无明显相关性。

关键词：紫穗槐种子水浴加热内生根瘤菌

贮藏方法对紫花苜蓿种子内生根瘤菌定殖的影响

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草原与草坪 2018年第2期38卷 13-18页

作者：苗阳阳周彤师尚礼张运婷康文娟甘肃农业大学草业学院/草业生态系统教育部重点实验室/甘肃省草业工程实验室/中-美草地畜牧业可持续发展研究中心甘肃兰州730070

为探索贮藏方法对紫花苜蓿种子内生根瘤菌定殖的影响,将甘农5号紫花苜蓿在结荚期用3种根部接种方法(主根微破损浇灌、根部浇灌、添加苦参碱浇灌)接种两种荧光标记根瘤菌Ensifer meliloti LZgn5f(gn5f)和Ensifer meliloti 12531f(12531f)... 详细信息

为探索贮藏方法对紫花苜蓿种子内生根瘤菌定殖的影响,将甘农5号紫花苜蓿在结荚期用3种根部接种方法(主根微破损浇灌、根部浇灌、添加苦参碱浇灌)接种两种荧光标记根瘤菌Ensifer meliloti LZgn5f(gn5f)和Ensifer meliloti 12531f(12531f),同时根部浇灌无菌蒸馏水获得的种子,采用信封、信封+布袋、铝箔3种包装材料,分别在25℃、25℃硅胶干燥、-4℃和4℃条件下贮藏6个月后,检测种子内根瘤菌的定殖数量。结果表明:主根微破损接种gn5f获得的种子在-4℃以信封包装贮藏时内生根瘤菌的定殖数量(25.54cfu/粒)显著高于信封+布袋和铝箔的两种包装材料(P内生根瘤菌的定殖数量最高(14.98cfu/粒),但与另外两种包装材料无显著差异(P>0.05)。根部浇灌接种gn5f和12531f获得的种子,在25℃干燥贮藏,分别以信封(22.08cfu/粒)和信封+布袋(40.84cfu/粒)包装时内生根瘤菌的定殖数量显著高于其贮藏条件(P内生根瘤菌的定殖数量最多,显著高于其他贮藏条件(P根瘤菌获得的种子以25℃硅胶干燥和-4℃贮藏时内根瘤菌数量高于25℃和4℃。

关键词：贮藏方法紫花苜蓿种子内生根瘤菌定殖数量

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3株紫花苜蓿内生根瘤菌功能差异性分析

草业科学 2018年第7期35卷 1614-1623页

作者：康文娟师尚礼王泽一陈建纲苗阳阳甘肃农业大学草业学院甘肃兰州730070 草业生态系统教育部重点实验室甘肃兰州730070 甘肃省草业工程实验室甘肃兰州730070 中-美草地畜牧业可持续研究中心甘肃兰州730070

以3株紫花苜蓿(Medicago sativa)内生根瘤菌株(LP3、WLP2和WLG1)为材料,进行抗逆和促生能力研究,并采用试管砂培法对WL168HQ苜蓿(M.sativacv.WL168HQ)进行接种试验,以不含根瘤菌的培养液为对照,分析菌株的共生固氮能力。结果表明,菌株W... 详细信息

以3株紫花苜蓿(Medicago sativa)内生根瘤菌株(LP3、WLP2和WLG1)为材料,进行抗逆和促生能力研究,并采用试管砂培法对WL168HQ苜蓿(M.sativacv.WL168HQ)进行接种试验,以不含根瘤菌的培养液为对照,分析菌株的共生固氮能力。结果表明,菌株WLP2能耐受除红霉素和庆大霉素外的所有抗生素≥300μg·mL^(-1);能在6%NaCl、pH 5~11和温度8~40℃的环境下生长,对盐、pH和温度的适应范围广;能溶解有机磷和无机磷,分泌IAA能力强。菌株WLG1接种,单株结瘤数、地上干重和地下干重显著高于对照处理(P根瘤重、根长和单株叶片数明显高于对照处理,分别比对照高了6.68%、9.57%和53.59%。综上所述,菌株WLP2对抗生素、盐、pH和温度的抗性以及促生能力较强,菌株WLG1对WL168HQ苜蓿接种效果最佳,共生固氮能力强。

关键词：紫花苜蓿内生根瘤菌抗逆性促生共生

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苜蓿种子内生根瘤菌抗逆能力评价与筛选

草地学报 2007年第2期15卷 137-141页

作者：祁娟师尚礼甘肃农业大学草业学院兰州730070

研究苜蓿（MedicagosativaL．）种子内分离的22株根瘤菌的分泌酸、抗盐性、pH值及高低温的耐受性。结果表明：22株均具有典型的根瘤菌生理生化特性，且都能分泌酸；耐盐性（10％）较强的菌株有9株，占供试菌株的40％；供试菌株耐pH值范... 详细信息

研究苜蓿（MedicagosativaL．）种子内分离的22株根瘤菌的分泌酸、抗盐性、pH值及高低温的耐受性。结果表明：22株均具有典型的根瘤菌生理生化特性，且都能分泌酸；耐盐性（10％）较强的菌株有9株，占供试菌株的40％；供试菌株耐pH值范围较广，大都在pH=5～11之间，其中耐酸性（pH=4）的菌株有6株，耐碱性（pH=12）的菌株有14株；耐高低温（40℃和4℃）的菌株有7株；综合耐盐、酸、碱、高温和低温等抗性较强的菌株有6株，分别为SM06、SA07、SA08、SX10、SD19和SL20。

关键词：苜蓿种子内生根瘤菌分泌酸抗逆性筛选

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苜蓿种子内生根瘤菌筛选及其促生能力研究

苜蓿种子内生根瘤菌筛选及其促生能力研究

作者：祁娟甘肃农业大学

学位级别：硕士

利用气相色谱仪(GC)、紫外分光光度计等先进仪器,采用最可能数(MPN)、平板培养、液体培养、试管苗回接和盆栽苗接种等方法对不同苜蓿品种种子内生根瘤菌数量、菌落特征、生理生化特性、生长适应性、与宿主的共生结瘤能力、固氮效果、苗... 详细信息

利用气相色谱仪(GC)、紫外分光光度计等先进仪器,采用最可能数(MPN)、平板培养、液体培养、试管苗回接和盆栽苗接种等方法对不同苜蓿品种种子内生根瘤菌数量、菌落特征、生理生化特性、生长适应性、与宿主的共生结瘤能力、固氮效果、苗木生长效应等进行了较为全面、系统的研究。结果表明:1.从不同苜蓿品种、不同产地、不同贮藏年限种子中分离纯化获得22株苜蓿种子内生根瘤菌。它们在平板培养基上具有典型的根瘤菌菌落特征,且苜蓿种子内生根瘤菌数量因品种、产地和贮藏年限的不同而差异明显。同一品种种子,贮藏年限5年之内,种子内生根瘤菌的数量随着贮藏年限的增长而增加;5年以后,随着贮藏年限的延长,种子内生根瘤菌的数量逐渐减少。对不同产地来源的种子来说,国外苜蓿品种种子内生根瘤菌数量一般多于国内苜蓿品种。在试管培养和盆栽条件下进行根瘤菌回接,均能有效结瘤,且接种后的根瘤都具有固氮酶活性。2.分离获得22株根瘤菌菌株回接均能显著提高苜蓿苗的结瘤率、结瘤量、根瘤重量和生物量,但它们的侵染能力有很大差异。试管苗回接中,平均结瘤率66.67%;平均每株结瘤数为4.969个,对照为0.454个,接种比对照提高994.5%,单株平均结瘤数较多的菌株为SL01(12个)、SJ05(6.33个)、SX10(5个)、SL12(6.33个)、SR14(13.3个)、SL17(5个)和ST21(5.67个);平均单株根瘤重为6.989mg,对照为1.281 mg,接种比对照提高445.6%,单株根瘤重较高的菌株为SL04(10.2mg)、SJ05(11.8 mg)、SZ11(11.9 mg)、SL12(10.5 mg)、SR14(10.1 mg);试管苗植物量平均每株为243.71 mg,对照为106.09 mg,接种比对照提高129.7%。试管苗接种综合促生效果较好的菌株有SJ05、SL12、SR14和SL17。3.种子内分离的22株根瘤菌进行分泌酸、抗盐性、pH值及高低温的耐受性试验表明,22株苜蓿种子内生根瘤菌均具有典型的根瘤菌生理生化特性,且都能分泌酸;耐盐性(10%)较强的菌株有9株,占供试菌株的40%;所有供试菌株耐pH值范围较广,大都在pH=5～11之间,其中耐酸性(pH=4)的菌株有6株,耐碱性(pH=12)的菌株有14株;耐高低温(40℃和4℃)的菌株有7株。综合耐盐、酸、碱、高温和低温等抗性较强的菌株有6株,分别为SM06、SA07、SA08、SX10、SD19和SL20。

关键词：苜蓿种子内生根瘤菌分泌生长素抗逆性固氮酶活性溶磷能力固氮能力