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内源性绵羊肺腺瘤病毒NM株gag基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测

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中国预防兽医学报 2007年第4期29卷 272-276页

作者：王宇刘淑英韩敏李建云内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

提取内源性绵羊肺腺瘤病毒内蒙古分离株(NM)总DNA,参照GenBank中内源性绵羊肺腺瘤病毒enJS56A1株gag基因序列设计1对引物。应用PCR技术特异性地扩增出病毒的gag基因片段,将其克隆到pMD19-T载体中进行测序得到完整的gag基因序列,并用DNAS... 详细信息

提取内源性绵羊肺腺瘤病毒内蒙古分离株(NM)总DNA,参照GenBank中内源性绵羊肺腺瘤病毒enJS56A1株gag基因序列设计1对引物。应用PCR技术特异性地扩增出病毒的gag基因片段,将其克隆到pMD19-T载体中进行测序得到完整的gag基因序列,并用DNAStar软件进行序列分析,分析结果表明,与内源性南非代表毒株enJS56A1(AF153615)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为98.9%。推导出的氨基酸同源性为98.4%。与外源性美国代表株JSRV21(AF105220)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为89.6%,氨基酸同源性为94.8%。利用生物信息学软件对其蛋白结构进行预测,结果表明gag-enJSRV-NM为一结构松散的蛋白分子,这也是我国首次报道的内源性绵羊肺腺瘤病毒的gag基因的全序列,为我国科研工作者进行更深入的研究奠定了基础。

关键词：内源性绵羊肺腺瘤病毒 gag基因克隆序列分析结构预测

内源性绵羊肺腺瘤病毒全基因组序列测定与序列分析

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中国兽医学报 2012年第7期32卷 962-966页

作者：周艳喜苏佳李靖刘霄卉马学恩内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018

参照内源性绵羊肺腺瘤病毒株enJSRV-20全基因组序列设计合成3对引物,应用PCR技术扩增内源性绵羊肺腺瘤病毒基因片段分别连接pMD-18T载体并测序,完成了内源性绵羊反转录病毒基因组序列测定。分析结果显示,测定序列全长7 519bp,与内源性... 详细信息

参照内源性绵羊肺腺瘤病毒株enJSRV-20全基因组序列设计合成3对引物,应用PCR技术扩增内源性绵羊肺腺瘤病毒基因片段分别连接pMD-18T载体并测序,完成了内源性绵羊反转录病毒基因组序列测定。分析结果显示,测定序列全长7 519bp,与内源性绵羊肺腺瘤病毒代表株enJSRV-20核苷酸同源性为99.4%,与外源性绵羊肺腺瘤病毒代表株AF357971.1的核苷酸同源性为90.4%。基于全基因组序列核苷酸的系统进化发生树分析结果显示,扩增序列与enJSRV-20的亲缘关系最近。

关键词：内源性绵羊肺腺瘤病毒 PCR扩增全基因序列

内源性绵羊肺腺瘤病毒NM株pol基因的克隆与序列分析

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中国兽医杂志 2007年第12期43卷 8-10页

作者：王宇刘淑英韩敏李建云内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

参照GenBank中内源性绵羊肺腺瘤病毒enJS56A1株pol基因序列设计了2对引物。应用PCR技术特异性地扩增出病毒的pol基因片段,将其克隆到PMD19-T载体后测序。应用计算机软件将测定序列与内源性南非代表毒株enJS56A1(AF153615)的pol基因序列... 详细信息

参照GenBank中内源性绵羊肺腺瘤病毒enJS56A1株pol基因序列设计了2对引物。应用PCR技术特异性地扩增出病毒的pol基因片段,将其克隆到PMD19-T载体后测序。应用计算机软件将测定序列与内源性南非代表毒株enJS56A1(AF153615)的pol基因序列比较,核苷酸同源性为99.3%,推导出的氨基酸同源性为95.0%。与外源性南非代表株JSRV-SA(M80216)的pol基因序列比较,核苷酸同源性为99.0%,氨基酸同源性为99.3%。这也是我国首次报道的内源性绵羊肺腺瘤病毒pol基因序列,为我国科研工作者进行更深入的研究奠定基础。

关键词：内源性绵羊肺腺瘤病毒 pol基因克隆序列分析

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内源性绵羊肺腺瘤病毒与宿主共进化研究进展

动物医学进展 2011年第7期32卷 72-76页

作者：张月梅刘淑英内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018

近年来的研究表明,内源性逆转录病毒作为哺乳动物基因组的重要组成部分,在与宿主共进化过程中发挥重要作用。对内源性绵羊肺腺瘤病毒的研究,为揭示哺乳动物内源性逆转录病毒与宿主共进化关系提供了一个独特的模型系统。内源性绵羊肺腺... 详细信息

近年来的研究表明,内源性逆转录病毒作为哺乳动物基因组的重要组成部分,在与宿主共进化过程中发挥重要作用。对内源性绵羊肺腺瘤病毒的研究,为揭示哺乳动物内源性逆转录病毒与宿主共进化关系提供了一个独特的模型系统。内源性绵羊肺腺瘤病毒在与宿主共进化过程中不断的增强自身的宿主适应性,通过取代宿主原有的促进孕体发育及胎盘形成的机制而发挥作用。通过分析近年来国内外学者对于内源性逆转录病毒一些相关研究,从内源性逆转录病毒在进化中可能的作用、内源性绵羊肺腺瘤病毒的分类、基因结构特点、在与宿主共进化过程中可能的作用、对孕期激素的影响及与外源性绵羊肺腺瘤病毒相互作用关系等方面进行了综述。

关键词：内源性绵羊肺腺瘤病毒共进化孕体发育

内源性绵羊肺腺瘤病毒NM株全基因序列的克隆、序列分析

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内源性绵羊肺腺瘤病毒NM株全基因序列的克隆、序列分析

作者：王宇内蒙古农业大学

学位级别：硕士

为了扩增内源性绵羊肺腺瘤病毒NM株全基因序列,参照GenBank中已发表的内源性绵羊肺腺瘤病毒的基因组全序列,设计合成七对引物,从经临床病理学检查健康无病绵羊的子宫组织中提取总DNA,分别使用内源性绵羊肺腺瘤病毒特异性探针和外源性绵... 详细信息

为了扩增内源性绵羊肺腺瘤病毒NM株全基因序列,参照GenBank中已发表的内源性绵羊肺腺瘤病毒的基因组全序列,设计合成七对引物,从经临床病理学检查健康无病绵羊的子宫组织中提取总DNA,分别使用内源性绵羊肺腺瘤病毒特异性探针和外源性绵羊肺腺瘤病毒特异性探针,进行斑点杂交鉴定。然后用鉴定后的子宫总DNA为模板,对enJSRV-NM株基因组分7段进行PCR扩增,产物分别为7个(618bp, 2006bp, 1106bp, 1613bp, 1145bp, 1861bp, 613bp)特异性基因片段,将其分别克隆入pMD19-T载体中进行双向测序并用DNAstar软件进行序列拼接与序列分析,获得完整的enJSRV-NM株基因组全序列。结果表明,enJSRV-NM株基因组全长7942bp,有相互重叠的4个较长的开放阅读框(ORF),分别代表gag、pro、pol和env基因,此外在pol基因的3’末端重叠一个额外的开放阅读框(orf-x)。与内源性南非代表毒株enJS56A1的基因序列比较,核苷酸同源性为99.2%;与外源性美国代表株JSRV21的基因序列比较,核苷酸同源性为92.3%。分析enJSRV-NM株基因组结构,在gag基因上没有发现外源性exJSRV特有的ScaⅠ酶切位点,且在gag基因编码的NC区发现有2个较典型的“胱氨酸—组氨酸序列”,可形成锌指结构。在env基因编码的TM区没有发现外源性exJSRV特异性的“YXXM”基序。enJSRV-NM株推导出的氨基酸与国外报道的exJSRV推导的氨基酸进行同源性比较,在大多数区域同源性高达90%～98%,而有3个可变区(VR1、VR2和VR3),分别位于gag基因和env基因,gag基因内有2个可变区(VR1、VR2),另一可变区VR3位于env基因编码的TM区。应用生物信息学分析技术并对enJSRV-NM株gag基因、env基因所编码的蛋白分别进行蛋白结构预测,结果显示gag基因、env基因所编码的蛋白均为结构松散的蛋白分子。这也是我国首次报道的内源性绵羊肺腺瘤病毒基因的全序列,为我国科研工作者进行更深入的研究奠定基础。

关键词：绵羊肺腺瘤病绵羊肺腺瘤病毒内源性绵羊肺腺瘤病毒斑点杂交克隆序列分析结构预测

内源性绵羊肺腺瘤病毒env基因的克隆及序列分析

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畜牧与饲料科学 2011年第1期32卷 3-6页

作者：苏佳周艳喜马学恩幺宏强赵晓慧内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018

参照GenBank上已发表的内源性绵羊肺腺瘤病毒env基因与5′长末端重复序列保守区序列设计引物,应用PCR技术成功扩增出内源性绵羊肺腺瘤env基因与5′长末端重复序列,将纯化的扩增片段连接pMD18-T克隆载体进行测序获得目的基因序列。应用ME... 详细信息

参照GenBank上已发表的内源性绵羊肺腺瘤病毒env基因与5′长末端重复序列保守区序列设计引物,应用PCR技术成功扩增出内源性绵羊肺腺瘤env基因与5′长末端重复序列,将纯化的扩增片段连接pMD18-T克隆载体进行测序获得目的基因序列。应用MEGA4.1、DNASTAR进行序列分析,分析结果表明,内源性env基因具有完整的开放阅读框,内源性env基因序列与内源性绵羊肺腺瘤(AF153615.1)基因同源性高达99.7%,与外源性绵羊肺腺瘤(M80216.1)基因的同源性仅为90.6%;由内源性env基因推导的氨基酸在NCBI进行BLAST比较:与AF153615.1的氨基酸同源性高达100%。内源性env基因编码表达的蛋白具有亲水性。这些结果为研究5′长末端序列对内源性env基因调控等问题提供了重要参考。

关键词：内源性绵羊肺腺瘤病毒内源性env基因序列分析

蒙古绵羊内源性绵羊肺腺瘤病毒全基因组序列测定与囊膜蛋白的表达分析

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中国兽医科学 2018年第7期48卷 879-888页

作者：吴丹丹徐斯日古楞李慧萍鲁凤霞刘淑英内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古乌兰察布市四子王旗乌兰花镇人民政府内蒙古乌兰察布011800

为了克隆内源性绵羊肺腺瘤病毒（en JSRV）全基因组序列,针对env基因分析其结构并构建原核表达质粒,并诱导囊膜蛋白表达。根据Gen Bank中提供的en JSRV DNA序列（AF152615）设计引物,采用PCR方法进行序列扩增并克隆,并对克隆结果进行测... 详细信息

为了克隆内源性绵羊肺腺瘤病毒（en JSRV）全基因组序列,针对env基因分析其结构并构建原核表达质粒,并诱导囊膜蛋白表达。根据Gen Bank中提供的en JSRV DNA序列（AF152615）设计引物,采用PCR方法进行序列扩增并克隆,并对克隆结果进行测序和生物信息学分析。然后将添加了Bam HⅠ和HindⅢ酶切位点的env基因片段克隆至p ET-32a载体构建表达质粒,并将质粒转化至大肠杆菌（***）BL21（DE3）中诱导囊膜蛋白表达,最后利用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测、鉴定囊膜蛋白。结果显示,en JSRV序列长7 382 bp,其中env基因片段长1 836 bp,en JSRV与en JSRV-23的同源性为97.3%。PSORTⅡ及DNAStar等软件预测分析en JSRV囊膜蛋白主要定位于细胞质、线粒体内膜等位置,且存在多个抗原表位。在37℃条件下,0.5 mmol/L IPTG诱导转入p ET32-Env的*** BL21（DE3）,8 h后可获得分子质量约为89 ku的以包涵体形式存在的囊膜蛋白。本试验测定了en JSRV全基因序列,并成功构建了表达囊膜蛋白的p ET32a-Env载体,为今后制备en JSRV-Env抗体奠定了试验基础,同时为囊膜蛋白生物学功能的深入探讨提供了理论参考。

关键词：内源性绵羊肺腺瘤病毒全基因序列原核表达生物信息学分析

内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)及其受体Hyal-2在妊娠蒙古绵羊子宫和孕体的表达

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内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)及其受体Hyal-2在妊娠蒙古绵羊子宫...

内源性绵羊肺腺瘤病毒NM株全基因序列的克隆、序列分析

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：徐萌杰刘淑英吴晓莉齐景伟内蒙古农业大学动物科学与医学学院

为了明确内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)是否在蒙古绵羊的发育过程中发挥作用以及在绵羊肺腺瘤病致瘤过程中可能发挥的作用,本试验利用RT-PCR和组织原位杂交技术对enJSRV及其受体Hya1-2在妊娠绵羊的子宫和孕体的表达规律和分布定位进行... 详细信息

为了明确内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)是否在蒙古绵羊的发育过程中发挥作用以及在绵羊肺腺瘤病致瘤过程中可能发挥的作用,本试验利用RT-PCR和组织原位杂交技术对enJSRV及其受体Hya1-2在妊娠绵羊的子宫和孕体的表达规律和分布定位进行了研究。结果表明:enJSRV及其受体Hya1-2在蒙古绵羊不同妊娠期(27d、56d、91d和107d)的子宫内膜、绒毛膜、胎盘和孕体中均有表达,且二者特异

关键词：内源性绵羊肺腺瘤病毒受体原位杂交表达蒙古绵羊

来源： cnki会议评论

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内源性绵羊肺腺瘤病毒NM株全基因序列的克隆、序列分析