检索结果-南通市图书馆

中国人兽共患病学报 2024年第3期40卷 224-230页

作者：晋瑞婕曾东东秦赫邓秋艳任静静蒋建军王鹏雁石河子大学动物科技学院石河子832000

目的构建单核细胞增生李斯特菌LLO-Inlp缺失株,探究LLO、Inlp基因对单核细胞增生李斯特菌生物学特性的影响。方法通过温度敏感型(Ts)质粒载体基因敲除法,构建单核细胞增生李斯特菌LM681ΔInlp、LM681ΔLLO-Inlp基因缺失株,通过检测不同... 详细信息

目的构建单核细胞增生李斯特菌LLO-Inlp缺失株,探究LLO、Inlp基因对单核细胞增生李斯特菌生物学特性的影响。方法通过温度敏感型(Ts)质粒载体基因敲除法,构建单核细胞增生李斯特菌LM681ΔInlp、LM681ΔLLO-Inlp基因缺失株,通过检测不同时间的OD 600 nm值绘制生长曲线分析LM681、LM681ΔInlp、LM681ΔInlp-ΔLLO三株菌的体外生长能力;以感染复数MOI值为10感染细胞,测定LM681、LM681ΔInlp、LM681ΔInlp-ΔLLO对人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SV40)、人绒毛膜癌细胞(JEG-3)黏附侵袭能力;动物水平上测定小鼠半数致死量、感染后的脑、肝、脾载菌量。结果成功获得片段大小为1125 bp的缺失株LM681ΔInlp、LM681ΔInlp-ΔLLO(亲本株LM681为2292 bp);生长曲线结果显示,各菌OD 600值无统计学差异;3株菌体外感染HTR-8/SV40细胞、JEG-3细胞黏附侵袭试验结果显示,LM681ΔInlp、LM681ΔInlp-ΔLLO较LM681对HTR-8/SV40细胞、JEG-3细胞黏附侵袭率均极显著降低(HTR-8/SV40细胞F LM681ΔInlp-LM681=102.792、F_(LM681ΔInlp-ΔLLO-LM681)=128.459,均pp-LM681=203.755、F_(LM681ΔInlp-ΔLLO-LM681)=81.279,均pp缺失株的LD_(50)为107.45,在攻毒剂量范围LM681ΔInlp-ΔLLO不存在LD_(50),LM681ΔInlp-ΔLLO较LM681的LD_(50)提高了6.78个对数数量级,LM681ΔInlp-ΔLLO组织载菌量整体较亲本株LM681降低。结论LLO、Inlp基因缺失在动物感染水平和体外培养细胞感染水平上均极大程度的降低了LM的的毒力,且Inlp基因对LM681菌株黏附侵袭滋养层细胞具有一定意义,为研究Inlp在单核细胞增生李斯特菌致病中的作用奠定基础。

关键词：单核细胞增生李斯特菌内化素p 溶血素O 生物学特性

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