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中山大学学报（医学科学版） 2023年第3期44卷 403-415页

作者：陈斯默张哲源张家豪何珂瑶刘怡文周福有新乡医学院第三附属医院胸外科河南新乡453003 河南科技大学临床医学院/河南科技大学第一附属医院/河南省肿瘤表观遗传重点实验室/河南省微生态与食管癌防治重点实验室河南洛阳471003 安阳市肿瘤医院胸外科/河南省食管癌精准防治医学重点实验室河南安阳455000

【目的】分析食管鳞癌(ESCC)中具核梭杆菌(Fn)对内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及X盒结合蛋白1(XBP1)的诱导效应,并探讨其潜在机制及临床意义。【方法】采用Fn感染ESCC细胞KYSE150及KYSE140不同时间(12 h、24 h及48 h),通... 详细信息

【目的】分析食管鳞癌(ESCC)中具核梭杆菌(Fn)对内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及X盒结合蛋白1(XBP1)的诱导效应,并探讨其潜在机制及临床意义。【方法】采用Fn感染ESCC细胞KYSE150及KYSE140不同时间(12 h、24 h及48 h),通过氧化应激指标试剂盒及Western blot检测各组细胞中氧化应激指标(ROS、MDA与SOD)及GRP78与XBP1的表达情况。实验分为Fn组,Fn+siNC1组,Fn+siGRP78组,Fn+siNC2组及Fn+siXBP1组,比较各组细胞中氧化应激指标、紫杉醇(PTX)应答效力、增殖、侵袭及转移能力差异。采用RNA scope及免疫组化法检测234例ESCC组织及癌旁组织中Fn感染及GRP78与XBP1的表达情况。利用卡方检验分析各因素与患者临床病理特征之间的相关性。采用Kaplan-Meier生存分析比较各因素对患者生存期的影响。【结果】与Fn未感染的KYSE150及KYSE140组细胞相比,Fn感染组(12 h、24 h及48 h)细胞中ROS与MDA含量逐渐增加,SOD活性逐渐降低,且GRP78及XBP1表达量逐渐增高(均P具有显著一致性(P<0.05)。Fn感染阳性、GRP78及XBP1高表达的患者多为有吸烟、饮酒史的男性患者,且肿瘤分化程度低、浸润程度深、淋巴结转移率高、临床分期多为Ⅲ/Ⅳ期。三者阳性组的患者5年生存期均缩短(P<0.05)。【结论】Fn可通过诱导GRP78及XBP1高表达,引发内质网应激,促进ESCC恶性演进。

关键词：食管鳞癌具核梭杆菌内质网应激葡萄糖调节蛋白78 X盒结合蛋白1 预后

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具核梭杆菌影响动脉粥样硬化的分子机制

口腔医学研究 2022年第4期38卷 308-311页

作者：蒋端申道南口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心四川大学华西口腔医院牙周科四川成都610041

动脉粥样硬化是冠状动脉粥样硬化性心脏病、脑卒中等心血管疾病重要的发病和死亡原因。现已证实牙周病与动脉粥样硬化是独立相关的。具核梭杆菌是牙周炎龈下菌斑中常见致病菌,在牙周组织处于炎症状态时,具核梭杆菌可通过受损的毛细血管... 详细信息

动脉粥样硬化是冠状动脉粥样硬化性心脏病、脑卒中等心血管疾病重要的发病和死亡原因。现已证实牙周病与动脉粥样硬化是独立相关的。具核梭杆菌是牙周炎龈下菌斑中常见致病菌,在牙周组织处于炎症状态时,具核梭杆菌可通过受损的毛细血管进入血液循环,而后粘附侵入内皮细胞,破坏内皮完整性,导致内皮功能障碍。同时,具核梭杆菌及其热休克蛋白可导致脂质代谢紊乱,并激活促炎因子,增强炎症反应,最终导致动脉粥样斑块的形成。本文就具核梭杆菌对动脉粥样硬化影响的可能机制进行探讨。

关键词：动脉粥样硬化具核梭杆菌 FadA GroEL 炎症反应脂质代谢

具核梭杆菌对炎症小体NLRP3的诱导作用对食管鳞状细胞癌患者生存期的影响

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郑州大学学报（医学版） 2022年第2期57卷 170-175页

作者：张哲源刘怡文付臻杨洪张宁梁梦夏李婉莹孔金玉孙蔚杨海军张耀文周福有河南科技大学临床医学院河南科技大学第一附属医院河南省微生态与食管癌防治重点实验室河南省肿瘤表观遗传重点实验室河南洛阳471003 河南科技大学附属安阳市肿瘤医院影像科河南安阳455000 河南科技大学体育学院河南洛阳471003 河南科技大学附属安阳市肿瘤医院内镜诊疗中心河南安阳455000 河南科技大学附属安阳市肿瘤医院病理科河南安阳455000 河南省食管癌精准防治医学重点实验室河南安阳455000 河南科技大学附属安阳市肿瘤医院放疗科河南安阳455000 河南科技大学附属安阳市肿瘤医院胸外科河南安阳455000

目的:分析具核梭杆菌(Fn)诱导炎症小体NLRP3表达与食管鳞状细胞癌(ESCC)患者临床病理特征及5 a生存期的关系。方法:将ESCC细胞KYSE30及KYSE150分为Fn未感染组及Fn感染组(12、24、48、72 h),采用CCK-8法检测各组细胞的顺铂(CDDP)与紫杉醇... 详细信息

目的:分析具核梭杆菌(Fn)诱导炎症小体NLRP3表达与食管鳞状细胞癌(ESCC)患者临床病理特征及5 a生存期的关系。方法:将ESCC细胞KYSE30及KYSE150分为Fn未感染组及Fn感染组(12、24、48、72 h),采用CCK-8法检测各组细胞的顺铂(CDDP)与紫杉醇(PTX)24 h药物半数抑制浓度(IC50),采用Western blot及qRT-PCR法检测各组细胞中NLRP3蛋白及mRNA的表达情况。取213例ESCC及相应癌旁正常组织,采用RNAscope法检测Fn感染情况,采用免疫组化法检测NLRP3蛋白的表达情况。结果:与Fn未感染组相比,Fn感染组(12、24、48及72 h)KYSE30及KYSE150细胞的CDDP与PTX 24 h药物IC50增高,NLRP3蛋白及mRNA相对表达量增高(P具有一致性(Kappa=0.848,P=0.001)。Fn诱导NLRP3表达患者中男性、吸烟、饮酒者居多,肿瘤细胞大多为低分化,肿瘤浸润程度较深,淋巴结转移增加且临床分期多为Ⅲ/Ⅳ期,Fn+NLRP3阳性组患者中位生存时间缩短(P<0.05)。结论:Fn感染可诱导ESCC组织中NLRP3表达,降低肿瘤细胞对CDDP与PTX的敏感性,缩短ESCC患者生存期。

关键词：食管鳞状细胞癌具核梭杆菌核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3

具核梭杆菌对食管鳞状细胞癌组织CD8^(+)T细胞浸润及预后的影响

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郑州大学学报（医学版） 2023年第5期58卷 593-598页

作者：张家豪刘怡文何珂瑶张哲源李若楠龙情柔孙蔚孔金玉杨海军周福有新乡医学院第三附属医院胸外科河南新乡453003 河南科技大学临床医学院河南科技大学第一附属医院河南省肿瘤表观遗传重点实验室河南省微生态与食管癌防治重点实验室河南洛阳471003 安阳市肿瘤医院病理科河南安阳455000 安阳市肿瘤医院胸外科河南省食管癌精准防治医学重点实验室河南安阳455000

目的:分析具核梭杆菌(Fn)对食管鳞状细胞癌(ESCC)组织CD8^(+)T细胞浸润及预后的影响,并探讨其可能机制。方法:采用Fn分别感染ESCC细胞(KYSE140、KYSE150)24、48及72 h,应用流式细胞术检测ESCC细胞中吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的表达情况... 详细信息

目的:分析具核梭杆菌(Fn)对食管鳞状细胞癌(ESCC)组织CD8^(+)T细胞浸润及预后的影响,并探讨其可能机制。方法:采用Fn分别感染ESCC细胞(KYSE140、KYSE150)24、48及72 h,应用流式细胞术检测ESCC细胞中吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的表达情况。建立人CD8^(+)T细胞与KYSE140或KYSE150共培养体系,并分为对照组、Fn组、IDO抑制剂(1μmol/L)组及Fn^(+)IDO抑制剂组,处理24、48、72 h后检测共培养体系中CD8^(+)T细胞的增殖情况。采用RNAscope及免疫组化染色法检测243例ESCC组织中Fn感染、IDO表达及CD8^(+)T细胞浸润情况,并分析三者的关联性。采用Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归分析Fn感染对ESCC患者预后的影响。结果:Fn感染可诱导KYSE140、KYSE150细胞中IDO表达增高,且具有时间依赖性(P具有一致性(Kappa=0.713),而二者均与CD8^(+)T细胞浸润呈负关联(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,Fn感染患者预后较差(P<0.05)。Cox回归分析结果显示Fn感染的ESCC患者死亡风险增加(HR=1.880,95%CI为1.326~2.663)。结论:Fn可能通过诱导IDO高表达抑制CD8^(+)T细胞增殖,削弱机体抗肿瘤免疫反应,促进ESCC恶性进展。

关键词：食管鳞状细胞癌具核梭杆菌吲哚胺2,3-双加氧酶 CD8^(+)T细胞预后

具核梭杆菌感染对食管癌KYSE150细胞紫杉醇化疗抵抗的影响

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郑州大学学报（医学版） 2023年第5期58卷 603-610页

作者：张哲源刘怡文付臻杨海军代宁涛李军扩孙蔚郭艺博孔金玉周福有安阳市肿瘤医院河南科技大学附属安阳市肿瘤医院河南省食管癌精准防治医学重点实验室河南安阳455000 河南科技大学临床医学院河南科技大学第一附属医院河南省微生态与食管癌防治重点实验室河南省肿瘤表观遗传重点实验室河南洛阳471003 安阳市肿瘤医院影像科河南安阳455000 安阳市肿瘤医院病理科河南安阳455000 安阳市肿瘤医院胸外科河南安阳455000

目的:探讨具核梭杆菌(Fn)感染对食管癌细胞紫杉醇(PTX)化疗的影响及其机制。方法:将食管癌细胞KYSE150分为Fn未感染组及Fn感染组(12、24、48和72 h),通过CCK-8及Western blot检测各组细胞的PTX 24 h药物半数抑制浓度(IC_(50))及炎症小体... 详细信息

目的:探讨具核梭杆菌(Fn)感染对食管癌细胞紫杉醇(PTX)化疗的影响及其机制。方法:将食管癌细胞KYSE150分为Fn未感染组及Fn感染组(12、24、48和72 h),通过CCK-8及Western blot检测各组细胞的PTX 24 h药物半数抑制浓度(IC_(50))及炎症小体NLRP3蛋白表达量。构建NLRP3敲降的食管癌细胞KYSE150-N,然后分为KYSE150组、KYSE150-N组、KYSE150+Fn组和KYSE150-N+Fn组4组。通过Western blot及流式细胞术检测各组细胞系中NLRP3、乙醛脱氢酶1(ALDH1)蛋白表达量及肿瘤干细胞(CSCs)百分比;通过平板克隆、成球实验及CCK-8检测各组细胞的体外增殖能力、克隆成球能力及PTX 24 h IC_(50)。将裸鼠分为上述4组,按分组接种细胞。成瘤后每3 d尾静脉注射一次PTX(10 mg/kg),共6次。对比各组裸鼠的成瘤能力和瘤体组织中NLRP3、ALDH1蛋白表达量及CSCs百分比。结果:与Fn未感染组相比,Fn感染组(12、24、48和72 h)KYSE150细胞的PTX 24 h IC_(50)及NLRP3蛋白表达量均增高(P均<0.05)。与KYSE150组相比,KYSE150+Fn组细胞的NLRP3及ALDH1蛋白表达量、CSCs百分比、体外增殖能力、克隆成球能力、PTX 24 h IC_(50)、裸鼠瘤体对PTX的抗性、瘤体内NLRP3与ALDH1蛋白表达量及CSCs百分比均增高(P均<0.05);而KYSE150-N组细胞上述指标均降低(P均<0.05)。与KYSE150+Fn组细胞相比,KYSE150-N+Fn组细胞上述指标均降低(P均<0.05)。结论:Fn可通过激活NLRP3诱导ALDH1高表达、富集CSCs,降低食管癌细胞对PTX的敏感性,促进其恶性增殖。

关键词：具核梭杆菌食管癌炎症小体NLRP3 肿瘤干细胞紫杉醇化疗抵抗 KYSE150细胞

具核梭杆菌对结直肠癌细胞增殖、迁移及上皮间质转化作用的影响

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微生物学报 2022年第12期62卷 4841-4853页

作者：张旭强郭斌梅陈苛蒙李竺婷范若辰金黎明王豫鑫权春善大连民族大学生物技术与资源利用教育部重点实验室辽宁大连116600 大连民族大学生命科学学院辽宁大连116600 大连理工大学生物工程学院辽宁大连116024

【目的】评估具核梭杆菌对人结直肠癌细胞HCT116和人正常结肠上皮细胞HCoEpiC的增殖、黏附、凋亡、迁移、侵袭和上皮间质转化的影响。【方法】本研究用不同感染复数(MOI)Fusobacterium nucleatum ATCC 23726感染人结直肠癌细胞HCT116和... 详细信息

【目的】评估具核梭杆菌对人结直肠癌细胞HCT116和人正常结肠上皮细胞HCoEpiC的增殖、黏附、凋亡、迁移、侵袭和上皮间质转化的影响。【方法】本研究用不同感染复数(MOI)Fusobacterium nucleatum ATCC 23726感染人结直肠癌细胞HCT116和人正常结肠上皮细胞HCoEpiC,建立感染模型;用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]、平板克隆、细胞划痕及侵袭(transwell)实验检测两组细胞的增殖、迁移和侵袭的变化;用流式细胞仪检测两组细胞凋亡情况;通过Western blotting检测两组细胞上皮标记物上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、Cateninδ-1蛋白、间充质标记物N-钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达水平的变化。【结果】F.nucleatum可促进HCT116细胞增殖,诱导HCT116细胞的迁移和侵袭,但不能引起细胞凋亡;可抑制HCoEpiC细胞的增殖、迁移和侵袭,并加速其凋亡;对HCT116和HCoEpiC细胞表现出很强的粘附能力,致细胞分散和拉长,细胞间粘附减少;使HCT116和HCoEpiC细胞上皮标记物E-cadherin与Cateninδ-1的表达量减少,间充质标记物N-cadherin与vimentin的表达量上升,E-cadherin由细胞膜向细胞质转移。【结论】F.nucleatum可诱导结直肠癌细胞和人正常结肠上皮细胞发生上皮间质转化,但抑制人正常结肠细胞的增殖、迁移和侵袭,表现出与结直肠癌细胞相反的作用。

关键词：具核梭杆菌结直肠癌增殖迁移上皮间质化

具核梭杆菌在上消化道恶性肿瘤中的作用及其机制

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中国肿瘤生物治疗杂志 2023年第9期30卷 830-835页

作者：许童(综述) 左静(审阅) 河北医科大学第四医院肿瘤内科河北石家庄050011

上消化道恶性肿瘤(食管癌和胃癌)的发病率高,生存率低,严重威胁人类生命健康,具核梭杆菌(Fn)是一种常见的革兰氏阴性厌氧菌,被证明与多种疾病相关。近期的研究表明,Fn与上消化道恶性肿瘤具有潜在的相关性,Fn在癌组织中富集,可通过促进... 详细信息

上消化道恶性肿瘤(食管癌和胃癌)的发病率高,生存率低,严重威胁人类生命健康,具核梭杆菌(Fn)是一种常见的革兰氏阴性厌氧菌,被证明与多种疾病相关。近期的研究表明,Fn与上消化道恶性肿瘤具有潜在的相关性,Fn在癌组织中富集,可通过促进上皮间质转化(EMT)、抑制机体抗肿瘤免疫、干扰多胺代谢等多种作用机制增强肿瘤细胞的增殖、迁移能力及耐药性,从而调控肿瘤的发生发展,影响肿瘤的治疗效果及预后,靶向Fn治疗可以提高治疗肿瘤的疗效和改善患者预后;而应用天青蛋白、噬菌体引导的生物治疗等方法可有效治疗Fn感染;目前,针对Fn的疫苗也正在开发中。阐明Fn在上消化道恶性肿瘤发生发展和治疗中的作用及其可能的机制,以及针对Fn的治疗策略,将有助于上消化道恶性肿瘤的早期诊断,提供新的有效的预防和治疗策略。

关键词：具核梭杆菌上消化道恶性肿瘤食管癌胃癌研究进展

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具核梭杆菌的比较基因组研究

具核梭杆菌的比较基因组研究

作者：马晓梅山东大学

学位级别：硕士

目的梭杆菌属(Fusobacterium)属于革兰氏阴性厌氧菌,通常在人类口腔和咽喉中被检测到,但近年来也被发现在其他部位,如胃肠道和泌尿生殖道。Fusobacterium可能会引起局部感染和多种侵袭性疾病,例如扁桃体炎、扁桃体旁脓肿、牙败血症、败... 详细信息

目的梭杆菌属(Fusobacterium)属于革兰氏阴性厌氧菌,通常在人类口腔和咽喉中被检测到,但近年来也被发现在其他部位,如胃肠道和泌尿生殖道。Fusobacterium可能会引起局部感染和多种侵袭性疾病,例如扁桃体炎、扁桃体旁脓肿、牙败血症、败血症、脑脓肿、Lemierre综合征等,其中牙龈炎和牙周炎是最常见的感染。具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,F.nucleatum)是Fusobacterium中最常见的致病菌之一,能够促进早期和晚期细菌定植,在牙菌斑生物膜的形成和成熟过程中扮演着重要的角色。基于DNA-DNA杂交技术、谷氨酰胺脱氢酶、2-氧谷氨酸还原酶电泳图谱及遗传相似性分析,F.nucleatum被分为4个亚型:具核梭杆菌具核亚型(Fusobacterium nucleatum subspecies nucleatum,subsp.nucleatum)、具核梭杆菌多型亚型(Fusobacterium nucleatum subspecies polymorphum,subsp.polymorphum)、具核梭杆菌文森氏亚型(Fusobacerium nucleatum subspecies vincentii,subsp.vincentii)/具核梭杆菌成梭亚型(Fusobacterium nucleatum subspecies fusiforme,subsp.fusiforme)和具核梭杆菌动物株亚型(Fusobacterium nucleatum subspecies animalis,subsp.animalis)。但目前我们对不同亚型的F.nucleatum菌株的基因组特征和发病机制的认识还不充分。因此,本研究主要对F.nucleatum菌株进行了全面的比较基因组研究,预测其可能存在的功能基因、毒力基因、抗性基因和亚型特有的基因等,可以帮助我们更深入地了解不同亚型/菌株之间的基因、功能和致病机制差异。方法本研究通过 PacBio Sequel 平台和 Illumina NovaSeq PE150 对 4 株F.nucleatum菌株(FNV、FNU、FNA、FNP)的全基因组DNA进行测序,并获得全序列的基因组完成图。除了 4个新测序的菌株外,还下载了 NCBI数据库中可用的所有F.nucleatum菌株的基因组。然后,用Prokka软件对所有下载的基因组核酸序列进行注释。利用OrthoFinder将获得的单拷贝直系同源基因构建进化树进行系统发育分析,应用RAxML-NG软件构建最大似然(ML)系统发育树,使用最优氨基酸置换模型,最后使用FigTree软件用于可视化最佳ML树结果并分析不同F.nucleatum亚型和菌株之间的系统发育关系。为了进一步评估F.nucleatum不同亚型之间的界限,使用FastANI软件使用默认参数执行平均核苷酸一致性(Average nucleotide identity,ANI)分析,并将结果可视化为热图。本研究对30株具有完整基因组序列的F.nucleatum菌株进行了全面的系统发育和比较基因组分析。使用Roary软件对30株F.nucleatum菌株进行了泛基因组分析,之后使用基因本体数据库(Gene ontology,GO)和京都基因与基因组数据库(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)进行功能富集分析。使用毒力因子数据库(Virulence factors database,VFDB)、综合抗生素抗性数据库(Comprehensive antibiotic research database,CARD)、KEGG数据库进行毒力基因、抗生素抗性基因、蛋白质分泌系统的预测。同时,对30株F.nucleatum菌株的基因组岛(Genomic islands,GIs)、成簇规则间隔的短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)、次级代谢产物生物合成基因簇、前噬菌体、基因家族的分布情况进行预测。最后,对F.nucleatum不同亚型的黏附蛋白FadA进行研究。此外,本研究在亚型和菌株水平上分析F.nucleatum的基因组特征,为深入了解其致病作用提供了新的基础。结果1.我们完成了 4株F.nucleatum菌株(FNV、FNU、FNA、FNP)的全基因组测序,获得了这4株菌株的全基因组序列,并获得了细菌基因组完成圈图。系统发育分析显示相同亚型的菌株聚集在一起,而FNU没有聚集到F.nucleatum的任何亚型分支中,同时我们还完成了 40株之前未有亚型注释的F.nucleatum菌株的注释工作。2.对30株F.nucleatum菌株的基因组成分析显示,具有管家功能的“core/soft-

关键词：具核梭杆菌泛基因组学研究毒力基因抗性基因 CRISPR类型次级代谢产物生物合成基因簇

具核梭杆菌在上消化道恶性肿瘤中的作用及机制

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中国肿瘤生物治疗杂志 2023年

作者：许童左静河北医科大学第四医院肿瘤内科

上消化道恶性肿瘤（食管癌和胃癌）的发病率高，生存率低，严重威胁人类生命健康，具核梭杆菌（Fn）是一种常见的革兰氏阴性厌氧菌，被证明与多种疾病相关。近期的研究表明，Fn与上消化道恶性肿瘤具有潜在的相关性，Fn在癌组织中富集，... 详细信息

上消化道恶性肿瘤（食管癌和胃癌）的发病率高，生存率低，严重威胁人类生命健康，具核梭杆菌（Fn）是一种常见的革兰氏阴性厌氧菌，被证明与多种疾病相关。近期的研究表明，Fn与上消化道恶性肿瘤具有潜在的相关性，Fn在癌组织中富集，可通过促进上皮间质转化（EMT）、抑制机体抗肿瘤免疫、干扰多胺代谢等多种作用机制增强肿瘤细胞的增殖、迁移能力及耐药性，从而调控肿瘤的发生发展，影响肿瘤的治疗效果及预后，靶向Fn治疗可以提高治疗肿瘤的疗效和改善患者预后；而应用天青蛋白、噬菌体引导的生物治疗等方法可有效治疗Fn感染；目前，针对Fn的疫苗也正在开发中。阐明Fn在上消化道恶性肿瘤发生发展和治疗中的作用及其可能的机制，以及针对Fn的治疗策略，将有助于上消化道恶性肿瘤的早期诊断，提供新的有效的预防和治疗策略。

关键词：具核梭杆菌上消化道恶性肿瘤食管癌胃癌研究进展