检索结果-南通市图书馆

Synaptotagmin 1 siRNA表达载体构建及其沉默效应研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Synaptotagmin 1 siRNA表达载体构建及其沉默效应研究

作者：谢振丽齐齐哈尔大学

学位级别：硕士

Synaptotagmin (Syt)是一类含有进化上保守的C2结构域的I型膜蛋白，主要定位于神经元细胞、内分泌细胞及其它细胞的分泌囊泡上，它们可触发和调节囊泡与细胞质膜的融合过程，参与对神经递质和激素释放的调控，也可能参与膜蛋白与膜组分... 详细信息

Synaptotagmin (Syt)是一类含有进化上保守的C2结构域的I型膜蛋白，主要定位于神经元细胞、内分泌细胞及其它细胞的分泌囊泡上，它们可触发和调节囊泡与细胞质膜的融合过程，参与对神经递质和激素释放的调控，也可能参与膜蛋白与膜组分的转运和更新。应用RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术将Syt基因的表达进行沉默，可望帮助我们理解Syt对囊泡融合、胞吞及循环等过程的生理功能及其调节机制。本研究首先将pRNAT-H1.1-Shuttle-GFP中的绿色荧光蛋白（GFP）替换为红色荧光蛋白（RFP）以利于后继的共转研究，酶切验证及测序结果表明pRNAT-H1.1-Shuttle-RFP构建正确。转染该质粒的人胚肾（human embryonic kidney293a, HEK293a）293a细胞可在549nm激发光下产生红色荧光，表明构建后的质粒能够正常表达红色荧光蛋白。同时，我们设计并合成了Syt1及在人和大小鼠上均无沉默靶点的随机序列的shRNA片段，并将其插入到pRNAT-H1.1-Shuttle-RFP的BamHⅠ和HindⅢ的酶切位点之间，构建了相应的siRNA表达载体。EcolRⅠ酶切验证及测序分析的结果表明该质粒构建正确。为提高HEK293a的转染效率及共转效率以便更精确的对siRNA的沉默效果进行评价，我们借助pIRES2-EGFP研究了人胚肾HEK293a细胞的最佳转染条件。结果表明VigoFect转染HEK293a细胞的转染效率与DNA用量、细胞密度及转染时间均存在着明显的剂量依赖性。此外，我们还借助pIRES2-EGFP及随机序列siRNA的表达载体进行了共转及先后转染HEK293a细胞的研究，结果表明在转染过程中质粒并不是等量地进入受体细胞的，进入细胞的质粒量不仅决定于转染条件，还与宿主细胞自身接纳质粒的能力有关。共转的两个质粒在同一细胞中的比例呈正比关系，表明它们在转染试剂中的分布是均匀的，这进一步表明细胞自身的接纳能力是影响质粒在不同细胞中拷贝数的重要因素。然而先后转染中两质粒的共转效率非常低，且同一细胞内的两荧光蛋白的荧光强度呈负相关，表明在前次转染中接纳质粒的细胞再一次接纳质粒的能力显著降低。为了验证Syt1siRNA表达载体对Syt1的沉默效率，我们将Syt1及其siRNA表达载体共转或先后转染HEK293a细胞，real time PCR及Western杂交的结果表明两个siRNA均能有效抑制Syt1mRNA及其蛋白的表达水平。在先后转染中，两siRNA对Syt1沉默效率的降低主要是由于两质粒较低的共转效率所导致的。

关键词： RNA干扰 Synaptotagmin 共转染先后转染共转效率沉默效率

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

小菜蛾颗粒体病毒增效因子的研究

武汉大学学报(理学版) 1996年第4期42卷 132-135页

作者：孟小林叶林柏武汉大学病毒研究所

小菜蛾颗粒体病毒（ＰｌｕｔｅｌａｘｙｌｏｓｔｅｌａＧｒａｎｕｌｏｓｉｓＶｉｒｕｓ简称ＰｘＧＶ）ＤＮＡ与苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒（ＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒ... 详细信息

小菜蛾颗粒体病毒（ＰｌｕｔｅｌａｘｙｌｏｓｔｅｌａＧｒａｎｕｌｏｓｉｓＶｉｒｕｓ简称ＰｘＧＶ）ＤＮＡ与苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒（ＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ简称ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ共转染Ｓ．ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ细胞，经空斑测定，ＰｘＧＶ－ＤＮＡ提高ＡｃＮＰＶ游离病毒粒子的产量达２～１３倍．这表明ＰｘＧＶ－ＤＮＡ对提高ＡｃＮＰＶ病毒粒子产量具有促进作用，并为ＰｘＧＶ增效因子的研究提供了重要的依据

关键词：小菜蛾颗粒体病毒增效因子共转染

OCA2基因rs74653330位点突变的黑色素细胞模型构建以及先天性眼球震颤相关SNP位点的研究

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

OCA2基因rs74653330位点突变的黑色素细胞模型构建以及先天性眼球...

作者：景圆远昆明理工大学

学位级别：硕士

第一部分OCA2基因rs74653330位点突变的黑色素细胞模型构建人类在进化过程中,皮肤颜色的变化是最典型的适应性表型特征,生活在不同环境和气候条件下的人群之间的肤色多样性非常高。通过比较基因组学研究,发现欧洲人群和亚洲人群祖先的... 详细信息

第一部分OCA2基因rs74653330位点突变的黑色素细胞模型构建人类在进化过程中,皮肤颜色的变化是最典型的适应性表型特征,生活在不同环境和气候条件下的人群之间的肤色多样性非常高。通过比较基因组学研究,发现欧洲人群和亚洲人群祖先的肤色变浅是独立发生的进化事件,且两个人群中受到正向选择的肤色相关基因有显著差异。目前,绝大多数色素相关表型的遗传研究都在欧洲人群中进行,但在不同人群中,色素相关表型差异的原因和机制都可能不同。本实验室前期已利用在泰州汉族队列群体(3000例)中产生的全基因组芯片数据,对肤色、发色、眼色等表型进行了全基因组关联分析,发现OCA2基因上的rs74653330位点的A突变与肤色变浅显著相关。为了进一步验证这一突变位点对色素相关表型的影响,本实验采用CRISPR-Cas9的方法构建黑色素细胞模型,以用于后期功能验证实验。本实验成功构建了带有g RNA序列的重组p X459质粒,初步确定了g RNA产生的基因编辑效率。并在A375黑色素细胞系上确定了转染条件,由于A375细胞存在我们需要编辑位点的三体情况,后改用A2058黑色素细胞系进行实验。我们在实验过程中从不同细胞库购买的A2058细胞都存在支原体污染,本实验没能成功拿到阳性细胞单克隆,但该实验构建了OCA2基因上的rs74653330 SNP位点的定向突变黑色素细胞模型的实验体系,对以无污染细胞进行共转染、分选单克隆、筛选阳性细胞具有较大的指导意义。第二部分先天性眼球震颤相关SNP位点的研究眼球震颤是一种以眼球重复、有节律、不自主运动为特征的眼部疾病。由于持续的眼球运动,视觉功能显着降低,但视力损害的程度各不相同。该疾病可继发于其他视觉或神经疾病,或可作为先天性眼球震颤(CN)的独立遗传性状出现。先天性眼球震颤通常在出生时或在生命的头几个月内出现,估计年发病率为1/20,000。到目前为止,FERM结构域7基因(FRMD7)和G蛋白偶联受体143基因(GPR143)被鉴定为CN的致病基因。我们对一个6代CN家系中的4个个体(3个男性患者和1个女性携带者)进行全外显子扫描,发现了X染色体上5个新的可能与患病表型相关的SNP位点,它们分别是rs146443503、rs141478957、rs3810704、rs2233695以及rs2205912,这是之前的研究从未报道过的。为了验证这5个SNP位点的功能相关性,在这个CN家系中进行相关SNP位点的重测序。并对测序结果进行家谱性分析,以确定在该家系中CN的遗传方式以及解释SNP位点基因型与CN表型的关系。最后发现该CN家系中只有男性患病,女性只有携带者,且反映出明显的X连锁隐性遗传规律。通过测序结果分析遗传信息在家系中的传递,大致上可以说明患病表型与SNP位点突变的相关性。以前的致病基因研究通常限于FRMD7和GPR143,该研究发现无疑丰富了CN患病分子机制的解释,为可能的遗传咨询、产前诊断以及基因替代疗法提供了一定的参考。

关键词： CRISPR-Cas9 黑色素细胞模型共转染筛选分选先天性眼球震颤 SNP位点测序遗传系谱分析

复制缺陷型BmNPV载体的构建及初步应用研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

复制缺陷型BmNPV载体的构建及初步应用研究

作者：费伟强浙江理工大学

学位级别：硕士

目前，昆虫杆状病毒载体表达系统是应用最为广泛的真核表达系统之一。其中，家蚕BmNPV病毒载体系统因其宿主家蚕可以大规模人工饲养，因而较AcNPV载体表达系统更适用于产业化应用。然而，对于BmNPV病毒载体系统来说，传统的同源重组构... 详细信息

目前，昆虫杆状病毒载体表达系统是应用最为广泛的真核表达系统之一。其中，家蚕BmNPV病毒载体系统因其宿主家蚕可以大规模人工饲养，因而较AcNPV载体表达系统更适用于产业化应用。然而，对于BmNPV病毒载体系统来说，传统的同源重组构建重组病毒的方法因需要空斑法筛选纯化病毒而显得效率低，技术复杂且耗时费力。即使通过Bac-to-Bac系统构建重组病毒也需要2周左右。本研究拟通过构建复制缺陷型的BmBacmid穿梭载体以提高重组病毒构建和表达外源基因的效率。本研究所构建的BmBacmid穿梭载体通过以下三步完成。首先，利用氯霉素表达盒通过Red同源重组的方法敲除杆状病毒复制必需基因orf1629部分序列，从而构建复制缺陷型的BmNPV载体RD-BmBacmid。然后，同样的方法利用gfp-ble表达盒敲除病毒p26、p10和p74基因，构建RD-BmBacmid载体。最后，利用lacZ-Gen表达盒敲除BmNPV基因组中chitinase和cathepsin基因，构建RD-BmBacmid载体。为了分析这些复制缺陷型BmBacmid载体构建重组病毒和表达外源基因的效率，本研究先利用红色荧光蛋白(DsRed)的转移载体pBacPAK8-DsRed与RD-BmBacmid共转染BmN细胞构建重组病毒，确证该载体的复制缺陷性并可用来正筛选获得重组病毒。继而，利用三种复制缺陷型载体分别构建重组病毒表达荧光素酶，通过测定荧光素酶的活性分析不同病毒载体表达荧光素酶的效率，发现相对RD-BmBacmid而言RD-BmBacmid和RD-BmBacmid的表达效率有明显提高。因而，本研究成功构建复制缺陷型BmBacmid载体，可一步构建重组病毒，操作简便，省时省力，并能高效表达外源蛋白，为利用家蚕杆状病毒载体系统高效表达目的蛋白提供了新的途径。

关键词：复制缺陷型 BmBacmid Red重组共转染高效表达

FOXM1在肺癌组织中表达及其分子致癌机制

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

FOXM1在肺癌组织中表达及其分子致癌机制

作者：梁鸿镖郑州大学

学位级别：硕士

目的：研究肺癌组织中FOXM1表达与其预后的关系,构建FOXM1报告基因并通过多种方法研究肺癌细胞株中FOXM1表达情况及其作用机制。方法： 1.采用PCR法获得目的基因并与空载体连接构建报告基因;2.采用免疫组织化学法检测80例肺... 详细信息

目的：研究肺癌组织中FOXM1表达与其预后的关系,构建FOXM1报告基因并通过多种方法研究肺癌细胞株中FOXM1表达情况及其作用机制。方法： 1.采用PCR法获得目的基因并与空载体连接构建报告基因;2.采用免疫组织化学法检测80例肺癌组织中FOXM1、KI-67的表达水平,并收集病例临床资料,分析FOXM1、KI-67表达水平与生存时间的关系;3.采用免疫荧光法研究吉非替尼对FOXM1的影响;4.采用western blotting、real-time PCR和转染研究细胞中FOXM1表达水平;***1报告基因转染细胞,通过检测报告基因荧光强度,研究尼古丁对FOXM1的影响;6.癌基因c-myc、P-catenin、AKT、抑癌基因RasN17、EP300同FOXM1报告基因共转染,研究其对FOXM1表达的影响。结果： 1.80例癌组织中,KI-67强阳性率61.25%,弱阳性率26.25%,阴性率12.50%。FOXM1强阳性率66.25%,弱阳性率25.00%,阴性率8.75%。两者呈正相关,相关系数=0.437。非吸烟组中FOXM1低表达者生存时间比高表达者长,x2=4.439, P=0.035。吸烟组中FOXM1低表达者生存时间比高表达者短,x2=4.613,P=0.032;2.转染实验尼古丁组比对照组荧光强;***-time PCR、western blotting和转染表明癌细胞中有FOXM1表达;***9/AB2细胞中FOXM1与CCNB1表达比例异常;5.免疫荧光实验吉非替尼组FOXM1荧光强度比对照组弱;6.共转染实验,相对于对照组,FOXM1报告基因与癌基因共转染组荧光强,与抑癌基因共转染组荧光弱。结论： ***1在肺癌组织及细胞中高表达且与不良预后相关;2.尼古丁、癌基因c-myc、β-catenin、AKT均与细胞中FOXM1表达上调相关;吉非替尼、抑癌基因RasN17、EP300均与FOXM1表达下调相关;***1与CCNB1的表达异常可能与PC9/AB2细胞耐药机制有关

关键词：叉头框转录因子M1 肺癌报告基因尼古丁吉非替尼共转染

猪流感病毒和“猪—禽”流感重配病毒的拯救及其生物学特性的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

猪流感病毒和“猪—禽”流感重配病毒的拯救及其生物学特性的研究

作者：彭亚平华中农业大学

学位级别：硕士

猪流感(Swine Influenza,SI)是由猪流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)引起猪的一种急性、高度接触性的呼吸道传染病。SIV不仅可感染猪,同时也具有感染禽等鸟类和人、马等其他哺乳动物的能力。而猪可被禽流感病毒(Avian InfluenzaViru... 详细信息

猪流感(Swine Influenza,SI)是由猪流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)引起猪的一种急性、高度接触性的呼吸道传染病。SIV不仅可感染猪,同时也具有感染禽等鸟类和人、马等其他哺乳动物的能力。而猪可被禽流感病毒(Avian InfluenzaVirus,AIV)和人流感病毒感染,是流感病毒基因重组或重配的“混合器”和流感病毒新流行毒株产生的“孵育器”,因而猪是流感病毒“禽-哺乳动物”种间传播链中重要的中间宿主。SIV及猪的这些特征决定了它们在流感病毒种间传播中具有不可替代的地位,SIV在流感病毒的流行、跨种传播等方面的研究以及在公共卫生上都具有重要意义。本研究利用流感病毒8质粒拯救系统成功拯救了一株猪流感病毒以及两株“猪-禽”流感重配病毒,并比较两株重配病毒与其亲本毒之间的毒力差异。这为研究评估“猪-禽”流感重配病毒的风险以及流感病毒跨种传播提供了一定依据。主要研究结果如下: 1.H1N1亚型猪流感病毒的拯救利用流感病毒8质粒拯救系统成功拯救出了猪流感病毒毒株A/Swine/TianJin/01/2004(H1N1)(A/S/TJ/04)。将猪流感病毒8个基因节段经RT-PCR合成cDNA后,分别克隆到RNA聚合酶Ⅰ/Ⅱ双向表达载体pHW2000中,构建成8个重组质粒。用8个重组质粒共转染COS-1细胞,30小时后加入TPCK-胰酶至终浓度0.5μg/mL。共转染48～72h后收获COS-1细胞及其上清,经尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚。收获死亡鸡胚尿囊液并继续用SPF鸡胚传3代,得到有感染性的病毒。经血凝、血凝抑制试验、测序分析、电镜观察等均证实了A/S/TJ/04猪流感病毒的成功拯救,这为进一步研究猪流感病毒基因组结构与功能的关系、流感跨种传播的机制以及构建新型猪流感疫苗株奠定了基础。 2.“猪-禽”流感重配病毒的拯救及其生物学特性的研究以流感病毒8质粒拯救系统为工具,分别将猪流感病毒毒株A/S/TJ/04的HA基因以及HA和NA基因用禽流感病毒A/chicken/Hubei/327/2004(H5N1)(A/C/HB/04)的相应基因片段进行置换,构建了“7+1”型重配病毒T+H(HA)和“6+2”型重配病毒T+H(HA/NA),并测定亲本毒和重配毒的EID。以BALB/c小鼠为动物实验模型,各种病毒以10EID的病毒量对小鼠进行攻毒,观察小鼠的存活率和体重变化情况,并在攻读后第3、6、12天取小鼠心、肺、脾、直肠和脑,计算组织体重比(即比重),利用抗原捕捉ELISA检测方法检测各器官的病毒含量。通过对各攻毒组的数据进行比较,比较亲本毒株和重配毒株对小鼠感染致病能力的差异。结果显示,重配毒株对小鼠的致病力介于两亲本毒之间,强于猪流感病毒A/S/TJ/04而弱于禽流感病毒A/C/HB/04,其中重配毒株T+H(HA/NA)的致病力又强于T+H(HA)。结果表明猪流感病毒A/S/TJ/04在获得禽流感病毒A/C/HB/04的HA或HA和NA基因后致病力和组织嗜性都有所增强,在跨种传播和病毒流行方面具有一定的风险性,但同时也具有一定的限制性。

关键词：猪流感病毒拯救共转染禽流感病毒重配病毒致病力跨种传播

FXR激动剂高通量药物筛选模型的建立及应用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

FXR激动剂高通量药物筛选模型的建立及应用

作者：吕国平河北师范大学

学位级别：硕士

本研究为寻找治疗心血管疾病以及糖尿病药物的先导化合物,利用哺乳动物单杂交技术与高通量筛选技术在细胞水平上,建立了以FXR为靶点的FXR激动剂的高通量筛选模型,为寻找治疗血脂异常疾病药物的先导化合物开辟了道路。从肝细胞的总RNA中... 详细信息

本研究为寻找治疗心血管疾病以及糖尿病药物的先导化合物,利用哺乳动物单杂交技术与高通量筛选技术在细胞水平上,建立了以FXR为靶点的FXR激动剂的高通量筛选模型,为寻找治疗血脂异常疾病药物的先导化合物开辟了道路。从肝细胞的总RNA中,利用RT-PCR扩增FXR-LBD基因,将此DNA序列连接到pBind载体上构建了融合表达载体pBind-FXR;合成含5个拷贝的GAL4 DNA结合序列(GAL4RE)并接到pGl3 promoter载体上构建了报告载体pGl3-GAL4。通过表达质粒和报告质粒共转染,瞬时转染进入细胞,通过测定报告基因荧光素酶的表达,进行FXR的激动剂功能性筛选。CDCA是FXR的生理激动剂,有较高的激动活性,本研究选用CDCA作为筛选模型的阳性药。通过对转染条件的优化,建立起了稳定、灵敏,有较高的信噪比的FXR激动剂的高通量筛选模型。在本单杂交模型中,CDCA能明显提高荧光素酶的表达,并且在一定浓度范围内呈现剂量依赖性增长,CDCA在50μM时对荧光素酶有最大诱导活性,其倍增数为12。本研究还进一步将FXR的筛选模型进行了384孔板的微量化研究,微量化后,FXR激动活性对CDCA仍然呈浓度依赖增长关系,最大的诱导倍增比96孔板有所下降,为5倍。应用此模型对微生物次生代谢产物库中的880个样品以及纯化合物库中的120个样品进行了筛选,从中得两个活性化合物CoQ10和F01WA2076A。CoQ10能明显提高荧光素酶的表达,并且在一定浓度范围内呈现剂量依赖性增长,对荧光素酶的最大诱导倍增数为5;F01WA2076A也能明显提高荧光素酶的表达,并且在一定浓度范围内呈现剂量依赖性增长,对荧光素酶的最大诱导倍增数可达9以上。本研究过程中制备了2608株真菌和1840株放线菌的次生代谢产物共8896个样品,供本模型以及其他模型的筛选。本研究建立的FXR激动剂的高通量细胞筛选模型以及得到两个活性化合物CoQ10和F01WA2076A,为FXR相关疾病的药物研发和FXR生理机制的研究打下良好的基础。

关键词：类法尼酯X受体高通量筛选技术哺乳动物单杂交激动剂共转染微生物次生代谢产物库

VSV-G和HAS2共修饰外泌体的制备及其在骨关节炎中的应用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

VSV-G和HAS2共修饰外泌体的制备及其在骨关节炎中的应用

作者：田亚平华中科技大学

学位级别：硕士

骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是最常见的关节疾病之一,全球受影响人数超过2.5亿。关节腔内注射透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)是临床上治疗OA的常用方法,但注射用的外源性HA降解速度快、需反复注射,且存在副作用。因此,探究能够产生内源... 详细信息

骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是最常见的关节疾病之一,全球受影响人数超过2.5亿。关节腔内注射透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)是临床上治疗OA的常用方法,但注射用的外源性HA降解速度快、需反复注射,且存在副作用。因此,探究能够产生内源性HA、减少注射次数、延长作用效果的新治疗策略具有重要意义。本研究将水泡性口炎病毒糖蛋白(Vesicular Stomatitis Virus G-protein,VSV-G)和透明质酸合成酶2(Hyaluronan Synthase 2,HAS2)质粒共转染到人胚肾细胞(Human Embryonic Kidney Cells,HEK293T)中过表达,并通过差速超速离心法获得同时负载VSV-G和HAS2的外泌体(V-H EXO)。透射电镜、动态光散射以及蛋白免疫印迹等检测结果证明V-H EXO是同时负载VSV-G和HAS2的100 nm左右杯形囊泡。体外细胞实验结果表明,V-H EXO具有良好的细胞相容性,且能够通过VSV-G的膜融合作用将HAS2递送至滑膜细胞膜,增加滑膜细胞中HAS2的含量,从而促进高分子量HA合成。通过关节腔内注射碘乙酸钠构建大鼠OA模型,并于其关节腔内一次性注射VH EXO,通过行为学记录、组织学切片分析等手段评价V-H EXO对OA的治疗效果。行为学测试结果表明,V-H EXO能有效缓解OA大鼠疼痛、提高患肢承重能力。第四周的免疫酶联吸附实验结果表明,V-H EXO组大鼠滑液中的高分子量HA显著高于OA组,V-H EXO组炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)表达显著低于OA组。滑膜组织的HE和免疫荧光(F4-80、CD86)染色结果表明,V-H EXO组大鼠具有更薄的滑膜组织和更少的促炎性巨噬细胞;软骨组织的HE、番红固绿和甲苯胺蓝染色及Mankin组织学评分结果显示,V-H EXO组大鼠的软骨组织结构和功能更加完整。本研究设计表达的共载HAS2和VSV-G的外泌体,能够提高HAS2在滑膜细胞上的含量,在一次性注射的情况下显著提高高分子量HA的表达,有效抑制炎症和OA的发展,为治疗骨关节炎提供了新的思路和方法。

关键词：骨关节炎外泌体共转染透明质酸透明质酸合成酶 VSV-G蛋白

人β干挠素基因在SV40晚期启动子控制下在小鼠骨髓瘤细胞中表达

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Acta Genetica Sinica 1989年第5期16卷 399-403页

作者：王晓鸣于曼王嘉玺吴淑华胡裕文侯云德军事医学科学院微生物流行病研究所中国预防医学科学院病毒学研究所

人成纤维细胞干挠素(Hu-IFN-β)基因的HindⅡ片段,插入载体pSV2-dhfr质粒中SV40晚期启动子(Lp)下游PvuⅡ位点处。用此重组质粒与带有黄嘌呤磷酸核糖转移酶(XGPRT)基因的质粒pSV2-gpt共转染次黄嘌吟核糖转移酶(HGPRT)基因缺陷的小鼠骨髓... 详细信息

人成纤维细胞干挠素(Hu-IFN-β)基因的HindⅡ片段,插入载体pSV2-dhfr质粒中SV40晚期启动子(Lp)下游PvuⅡ位点处。用此重组质粒与带有黄嘌呤磷酸核糖转移酶(XGPRT)基因的质粒pSV2-gpt共转染次黄嘌吟核糖转移酶(HGPRT)基因缺陷的小鼠骨髓瘤(SP2/0)细胞。在含有霉酚酸和氨基喋呤的选择培基中,筛选出有效地组成性表达的细胞株。在未加氨甲喋呤压力倍增的条件下,Hu-IFN-β抗病毒活性为1275U/10~5细胞,1ml,48小时。

关键词：人 β干挠素基因共转染重组质粒