检索结果-南通市图书馆

三种常见人呼吸道腺病毒六邻体蛋白的克隆、表达及抗原性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第5期34卷 393-396页

作者：田新贵周荣薛春燕李潇周志超广州医科大学附属第一医院呼吸疾病国家重点实验室广州呼吸疾病研究所 510230

目的：克隆、表达常见的人呼吸道腺病毒的主要中和抗原六邻体蛋白，分析重组表达产物的抗原性和免疫原性。方法分别PCR扩增克隆人3型、4型、7型腺病毒完整的六邻体蛋白基因，测序和序列比对并与GenBank上人腺病毒的六邻体蛋白进行同源... 详细信息

目的：克隆、表达常见的人呼吸道腺病毒的主要中和抗原六邻体蛋白，分析重组表达产物的抗原性和免疫原性。方法分别PCR扩增克隆人3型、4型、7型腺病毒完整的六邻体蛋白基因，测序和序列比对并与GenBank上人腺病毒的六邻体蛋白进行同源性比对；对其主要的抗原区进行克隆、表达和纯化，表达产物免疫动物，ELISA和Western blot实验对表达产物的抗原性和免疫原性及其交叉反应进行分析。结果国内首次报道1株人4型腺病毒的六邻体基因序列，与GenBank中的NHRC3分离株核酸及氨基酸的同源性均大于99％；3种腺病毒包含全部高变区的六邻体部分区段在大肠杆菌中成功表达并纯化，重组蛋白可以被不同型别的人腺病毒免疫血清识别，重组蛋白免疫小鼠血清可以识别不同型别的人腺病毒，而型间反应有显著差异，预测了3种腺病毒六邻体型、型间特异性表位。结论成功表达人3型、4型、7型腺病毒六邻体蛋白主要抗原区，重组表达产物有强免疫原性，包含型间、型特异性抗原表位。

关键词：人呼吸道腺病毒六邻体蛋白重组表达免疫原性表位

牛腺病毒3型六邻体蛋白的截短表达、单克隆抗体制备及初步应用

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中国预防兽医学报 2014年第6期36卷 475-478页

作者：严昊朱远茂史鸿飞王雪枝蔡红王姝马磊薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为制备牛腺病毒3型(BAV-3)的单克隆抗体(MAb),本研究采用原核表达系统截短表达了BAV-3六邻体蛋白(Hexon),并以纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合筛选出14株杂交瘤细胞株。Western blot与间接免疫荧光试验表明14株MAbs均具有良好... 详细信息

为制备牛腺病毒3型(BAV-3)的单克隆抗体(MAb),本研究采用原核表达系统截短表达了BAV-3六邻体蛋白(Hexon),并以纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合筛选出14株杂交瘤细胞株。Western blot与间接免疫荧光试验表明14株MAbs均具有良好的反应性。特异性试验表明这些MAbs与牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒及牛传染性鼻气管炎病毒无交叉反应。免疫组化试验表明其中一株1F8亲和力最强,可以用于检测BAV-3。本研究为进一步鉴定BAV-3抗原表位及研发相应的诊断试剂奠定了基础。

关键词：牛腺病毒3型六邻体蛋白单克隆抗体特异性

血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的原核表达及鉴定

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华北农学报 2018年第5期33卷 106-110页

作者：刘娜刘青涛李银杨婧李祥瑞江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

通过原核表达的方法得到血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白;根据GenBank中血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的基因序列,设计一对特异性引物,利用普通PCR方法扩增得到hexon基因的全长序列。将PCR扩增得到的血清4型禽腺病毒六邻体基因片... 详细信息

通过原核表达的方法得到血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白;根据GenBank中血清4型禽腺病毒六邻体蛋白的基因序列,设计一对特异性引物,利用普通PCR方法扩增得到hexon基因的全长序列。将PCR扩增得到的血清4型禽腺病毒六邻体基因片段,在其两端插入酶切位点后克隆至载体pMD18T中,经PCR鉴定和测序分析正确后,与原核表达载体pET-32 a进行连接,构建pET-32 a-hexon原核表达载体,并对其进行双酶切和测序鉴定。将构建成功的表达载体转化至BL21(DE3)中,用1 mmol/L的IPTG进行诱导表达,对得到的重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western Blot鉴定;经双酶切鉴定和测序鉴定,pET-32a-hexon原核表达载体构建成功,插入的六邻体蛋白基因片段大小为2 814 bp,在1 mmol/L浓度IPTG诱导3 h时重组蛋白表达量最高,且重组蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中。SDS-PAGE分析结果显示,融合蛋白分子量为118 ku。免疫印迹分析结果显示,融合蛋白可被抗FAdV-4的血清和HIS标签抗体特异性识别;成功表达了血清4型禽腺病毒的主要结构蛋白六邻体蛋白,且得到的重组蛋白具有良好的反应原性,可用于血清4型禽腺病毒的进一步研究中,为血清4型禽腺病毒病的预防和治疗奠定了良好的基础。

关键词：血清4型禽腺病毒六邻体蛋白原核表达

腺病毒六邻体蛋白部分基因的构建表达及表达产物抗原性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第4期22卷 433-434页

作者：张勤张霆辛若雷包怡华吴建新首都儿科研究所北京100020

腺病毒是人类呼吸道、胃肠道、眼部等部位许多疾患的重要病原之一，引起人的急性呼吸系统疾病、流行性角膜结合膜炎、咽结合膜热等。在儿童急性感染疾病中，2%-7%是由腺病毒引起的，有时可造成一定范围的流行。由于腺病毒型别较多，给... 详细信息

腺病毒是人类呼吸道、胃肠道、眼部等部位许多疾患的重要病原之一，引起人的急性呼吸系统疾病、流行性角膜结合膜炎、咽结合膜热等。在儿童急性感染疾病中，2%-7%是由腺病毒引起的，有时可造成一定范围的流行。由于腺病毒型别较多，给实验室诊断带来一定困难。在临床时行腺病毒感染的快速诊断时常需要获得特异性强的高效价病毒抗体。而传统的纯化病毒方法制备腺病毒抗体费时、费力，且往往难以得到特异性较高的抗体。本研究通过计算机比较腺病毒六邻体氨基酸序列，结合三维结构图提示的多肽暴露情况以及抗原性预测分析，选择性地表达了若干个抗原性较强的多肽，并对其具有免疫原性进行了初步分析。

关键词：基因表达免疫原性间接免疫荧光法免疫印迹法腺病毒六邻体蛋白

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鸡减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因的序列分析

中国兽医学报 1997年第3期17卷 215-218页

作者：曾力宇金奇章金钢朱雷姚二梅李茂祥李富胜殷震侯云德中国预防医学科学院病毒基因工程国家重点实验室

从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ），经非免疫鸭胚增殖后，用差速离心法纯化和蛋白酶Ｋ法抽提，获得全长约为３４ｋｂ的ＥＤＳＶ全基因组。用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ酶解ＥＤＳＶ全基因，以ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡ... 详细信息

从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ），经非免疫鸭胚增殖后，用差速离心法纯化和蛋白酶Ｋ法抽提，获得全长约为３４ｋｂ的ＥＤＳＶ全基因组。用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ酶解ＥＤＳＶ全基因，以ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡ为载体，构建了ＥＤＳＶ的ＨｉｎｄⅢ酶解片段的文库，并对其中的Ｄ片段（长为３．６ｋｂ）进行了序列测定及同源分析，结果提示该片段中唯一一个完整的开放读码框架（ＯＲＦ）（４３０～３１６２位）编码ＥＤＳＶ的六邻体蛋白，其特定氨基酸残基的排列组合和功能区的分布等与其他几个具有代表性的腺病毒的六邻体蛋白相似，它们之间的核苷酸序列同源性在４９．６％～７２．９％，氨基酸序列同源性在４６．３％～８３．９％。本研究为进一步阐明ＥＤＳＶ基因组的结构特点。

关键词：六邻体蛋白序列鸡减蛋综合征病毒

鸡减蛋综合征病毒河北分离株六邻体蛋白基因的表达及免疫活性测定

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黑龙江畜牧兽医 2013年第4期 94-96页

作者：杜冬华周静王爱华河北北方学院动物科技学院动物医学系河北张家口075131

为了研究减蛋综合征病毒河北分离株(EDSV-HB)六邻体(Hexon)蛋白免疫原性,试验对六邻体基因进行了表达及免疫活性测定,将克隆得到的EDSV-HB株Hexon基因亚克隆到pET-32a-c(+)原核表达载体上,并用重组蛋白免疫6周龄非免疫鸡,用间接ELISA方... 详细信息

为了研究减蛋综合征病毒河北分离株(EDSV-HB)六邻体(Hexon)蛋白免疫原性,试验对六邻体基因进行了表达及免疫活性测定,将克隆得到的EDSV-HB株Hexon基因亚克隆到pET-32a-c(+)原核表达载体上,并用重组蛋白免疫6周龄非免疫鸡,用间接ELISA方法检测。结果表明:免疫鸡均产生了较高的抗体水平。说明体外表达的重组蛋白保留了天然蛋白所具有的抗原性。

关键词：减蛋综合征病毒河北分离株六邻体蛋白基因克隆表达免疫原性

人3型腺病毒GZ13株的分离鉴定及六邻体蛋白的分子进化研究

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广东医学 2012年第9期33卷 1198-1201页

作者：张其威赵素慧王长兵朱冰朱利赵卫李凌万成松南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系广州510515 广东省广州市妇女儿童医疗中心中心实验室 510120

目的分离鉴定1株引起儿童急性支气管肺炎的腺病毒及分析其主要中和抗原六邻体蛋白的分子进化趋势。方法采用荧光定量PCR方法,对1例引起严重支气管肺炎的患儿咽拭子进行检测,并从中分离得到1株腺病毒(命名为GZ13)。利用型特异性引物PCR... 详细信息

目的分离鉴定1株引起儿童急性支气管肺炎的腺病毒及分析其主要中和抗原六邻体蛋白的分子进化趋势。方法采用荧光定量PCR方法,对1例引起严重支气管肺炎的患儿咽拭子进行检测,并从中分离得到1株腺病毒(命名为GZ13)。利用型特异性引物PCR进行初步亚型鉴定;克隆该株腺病毒完整的六邻体蛋白基因,测序和序列比对,确定其型别;同时与GenBank上人3型腺病毒的六邻体蛋白进行同源性比对,分析预测六邻体蛋白的分子进化趋势。结果该临床标本经荧光定量PCR鉴定为腺病毒强阳性,型特异性引物PCR初步鉴定为3型;完整六邻体基因比对最终确定为人3型腺病毒;GZ13株与我们先前分离的GZ01、GZ02株及台湾地区分离株核苷酸及氨基酸的同源性均大于99%。结论引起该例儿童急性支气管肺炎的病原体为人3型腺病毒,目前在广州以及台湾地区流行的3型腺病毒仍属同一流行株,其主要中和性抗原六邻体蛋白未出现明显变异,这对今后开发研究人3型腺病毒疫苗及药物具有重要指导意义。

关键词：人3型腺病毒六邻体蛋白分子进化

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EDSV-HB株六邻体蛋白免疫原性试验

中国兽医杂志 2013年第1期49卷 22-24页

作者：杜冬华周静王爱华河北北方学院动物科技学院动物医学系河北张家口075131

本试验主要对减蛋综合征病毒河北分离株(EDSV-HB)的六邻体(Hexon)基因进行了扩增、克隆、测序、表达及免疫原性的试验。将EDSV-HB株六邻体基因克隆至pET-32a-c(+)原核表达载体进行表达。重组蛋白免疫6周龄鸡,间接ELISA方法检测产生的抗... 详细信息

本试验主要对减蛋综合征病毒河北分离株(EDSV-HB)的六邻体(Hexon)基因进行了扩增、克隆、测序、表达及免疫原性的试验。将EDSV-HB株六邻体基因克隆至pET-32a-c(+)原核表达载体进行表达。重组蛋白免疫6周龄鸡,间接ELISA方法检测产生的抗体水平。结果显示,表达的重组蛋白能刺激机体产生较高抗体水平。由此表明,体外表达的六邻体蛋白能够保留天然蛋白具有的抗原性。

关键词： EDSV HB株六邻体蛋白免疫原性

牛腺病毒3型六邻体蛋白单抗制备及双抗夹心ELISA的建立与应用

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牛腺病毒3型六邻体蛋白单抗制备及双抗夹心ELISA的建立与应用

作者：严昊中国农业科学院

学位级别：硕士

牛呼吸道传染病多表现为牛呼吸道疾病综合征(BRDC),对养牛业危害严重,每年都使全球的养牛业蒙受重大的经济损失。牛呼吸道疾病综合征多是由应激与一种或数种病毒感染造成的,其中牛腺病毒3型(Bovine adenovirus type3, BAV-3)是引起牛呼... 详细信息

牛呼吸道传染病多表现为牛呼吸道疾病综合征(BRDC),对养牛业危害严重,每年都使全球的养牛业蒙受重大的经济损失。牛呼吸道疾病综合征多是由应激与一种或数种病毒感染造成的,其中牛腺病毒3型(Bovine adenovirus type3, BAV-3)是引起牛呼吸道疾病的最重要的病原体之一。BAV-3为腺病毒科(Adenoviridae)哺乳动物腺病毒属(Mastadenovirus)的成员。牛腺病毒(BAV)感染牛可引发一系列不同的临床症状,包括结膜炎、肺炎、腹泻和多发性关节炎。自从1965年Darbyshire等在英国从健康牛结膜首次分离出牛腺病毒3型以来,美国、加拿大、芬兰、比利时、澳大利亚、土耳其和日本等国均有该病毒感染的报道。BAV-3对犊牛的实验感染表明其对犊牛有致病性,被感染犊牛出现发热和食欲不振等呼吸道病症状及肺脏实变的肉观病变,自然感染BAV-3的犊牛亦发生呼吸道疾病。最近的血清学调查表明BAV-3在牛群中血清阳性率较高,最高可达92.3%。2009年国内首次报道从黑龙江的一头患有呼吸道疾病病牛的鼻腔拭子分离到一株BAV-3,命名为HLJ0955株,在2009年之前我国一直没有BAV-3的相关报道。随后在我国的辽宁省与山东省亦分离到了该病毒。目前,我国对BAV-3的研究尚处起步阶段,国内还没有商品化疫苗与检测试剂盒.腺病毒的六邻体蛋白位于病毒粒子表面,是病毒粒子中含量最高的结构蛋白,约占病毒粒子分子质量的63%,且含有潜在的血清特异性抗原表位,为此本研究选择了六邻体蛋白作为目标蛋白,进行了单抗制备及双抗夹心ELISA的研究,为BAV-3的检测提供相应的技术支持。本研究采用原核表达系统截短表达了BAV-3黑龙江分离株HLJ0955的六邻体蛋白,用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾脏与SP2/0细胞融合并筛选出14株杂交瘤细胞株。免疫印迹与间接免疫荧光试验表明14株单抗具有良好的反应性。特异性试验表明该单抗不与牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒及牛呼吸道合胞体病毒反应。免疫组化试验表明其中一株1F8可以检测实验感染BAV-3的实验动物体内的病原。上述研究为BAV-3抗原表位的进一步鉴定及病原的免疫组化检测奠定了基础。同时,利用抗BAV-3的兔源多克隆体与筛选出的MAb182建立了双抗夹心ELISA,以用于检测BAV-3的病毒抗原。以50份已确定的BAV-3阴性样品的ELISA的OD值为参照,确立了cut-off值为0.29,当OD492值大于0.29时,判定检测样本为阳性;等于或低于该值判定为阴性。特异性实验结果表明该检测方法只针对BAV-3,不与其它导致牛呼吸道疾病的病毒反应;敏感性实验结果显示该方法最低检测为每50μL含10L8TCID50培养的病毒。对102份采自哈尔滨市周边地区的牛鼻腔棉拭子样品进行了检测,结果检出21份阳性样品,阳性率20.6%,表明一部分牛可自然感染BAV-3,并可从鼻腔排出病毒,应引起足够的重视。综上所述,本研究制备了14株针对BAV-3六邻体蛋白的单克隆抗体,其中一株单抗1F8可以用于实验感染动物体内BAV-3的免疫组化检测。同时本研究利用BAV-3的兔源多抗和一株单抗182建立了检测BAV-3病毒抗原的双抗夹心ELISA,对102份牛鼻拭子的检测结果表明,该双抗夹心ELISA可试用于BAV-3的样品检测及病原学调查。本研究为BAV-3的病原学诊断奠定了基础。

关键词：牛腺病毒3型六邻体蛋白单克隆抗体双抗夹心ELISA