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八珍益智方的质量控制与体内过程研究

八珍益智方的质量控制与体内过程研究

作者：卜凡淑南京中医药大学

学位级别：硕士

八珍益智处方由龙眼肉、益智仁、陈皮、炙甘草、茯苓、白术、莲子、山药组成,具有增强智力、延缓衰老、提高记忆力的功效。近年来,八珍益智方在提取、制备工艺及药理学研究方面取得了一定的进展,但关于质量控制与体内过程的研究有所欠... 详细信息

八珍益智处方由龙眼肉、益智仁、陈皮、炙甘草、茯苓、白术、莲子、山药组成,具有增强智力、延缓衰老、提高记忆力的功效。近年来,八珍益智方在提取、制备工艺及药理学研究方面取得了一定的进展,但关于质量控制与体内过程的研究有所欠缺。本实验拟建立八珍益智方薄层色谱、特征图谱、含量测定的分析方法进行质量控制研究,以期为八珍益智方质量标准的建立提供实验依据,并通过肠吸收研究、组织分布研究、代谢产物分析、排泄研究及药动学研究的角度进行八珍益智方的体内过程分析。第一章文献研究本章对八珍益智方的研究现状及各药味的主要化学成分、药理作用及体内过程研究进展进行了系统的理论综述。通过查阅文献可知,八珍益智方水提液除含有大量多糖外,益智仁、白术等还含有较为丰富的挥发性成分,这些挥发性成分亦能发挥治疗记忆力减退、延缓衰老、预防阿尔茨海默症的药理作用。挥发油在发挥药理作用的同时是否会对其他成分产生影响?因此,本实验基于挥发性成分是否会影响体内过程这一问题进行了实验与探究。第二章八珍益智方的质量控制研究第一节八珍益智方薄层鉴别方法的建立对八珍益智方水提液中各单味药材的薄层鉴别方法进行摸索,通过对多种提取方法、展开剂、显色剂进行筛选与优化,发现水提液中龙眼肉、莲子、山药、茯苓、益智仁、白术均未能在与对照药材相同位置处呈现相同颜色的斑点,最终建立了八珍益智方中陈皮、炙甘草的薄层鉴别方法。第二节八珍益智方特征图谱的建立采用超高效液相色谱(UPLC)技术,建立不同批次八珍益智方特征图谱,利用特征图谱对各批次八珍益智方进行质量控制研究。特征图谱中共确定19个共有峰,采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术指认其中15个化学成分,各批次样品相似度均大于0.936,具有较好的一致性。第三节八珍益智方中化学成分含量测定方法的建立采用UPLC技术,对各批次八珍益智方中原儿茶酸、甘草苷、橙皮苷、异甘草苷、桔皮素、川陈皮素、甘草酸进行定量分析。第三章八珍益智方的体内过程研究采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电轨道阱串联质谱联用(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)技术进行代谢产物分析。采用超高效液相色谱-三重四级杆-复合线性离子阱质谱联用(UPLC-QTRAP-MS)技术,进行八珍益智方的肠吸收、组织分布、排泄研究与药动学研究,并在进行体内过程研究的同时,通过分组给药(水提液给药组(NEO)与加入挥发油的水提液给药组(NEO+EO))的形式,比较挥发油是否会对八珍益智方的体内过程产生影响。第一节八珍益智方的肠吸收研究基于大鼠单向在体肠灌流实验探究八珍益智方的药物肠吸收特点。对不同肠段进行考察,结果表明,甘草酸主要吸收部位为结肠、回肠;川陈皮素、桔皮素、异甘草苷、橙皮苷的主要吸收部位为十二指肠;甘草苷的主要吸收部位为结肠、空肠。对NEO+EO组与NEO组各成分在不同肠段的吸收状态进行考察,结果显示,与NEO组相比,挥发油(EO)可显著增加桔皮素在四个肠段的吸收,可显著增加橙皮苷、甘草酸在十二指肠的吸收及川陈皮素在十二指肠、空肠、结肠吸收;而甘草苷在空肠、回肠、结肠的吸收减少;异甘草苷在结肠的吸收减少。第二节八珍益智方组织分布研究基于组织分布实验,研究八珍益智方在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和脑中的分布情况,并探究挥发油对八珍益智方在各组织中的分布是否会产生影响。结果表明:异甘草苷在各组织中含量均低于检测限,川陈皮素、甘草苷以肝分布为主;桔皮素以脾、肝中分布为主;橙皮苷、甘草酸以肝和肺中分布为主,且均可在脑组织检测到。桔皮素在给药后1h内迅速分布到肝、脾中,橙皮苷则主要分布在肝、肺中,且肝中含量降低缓慢。此外,与加入挥发油(EO)的组相比,橙皮苷在肝中含量增加;川陈皮素在肾中含量增加,在肺脏中分布减少;桔皮素在肝和脑中分布降低,甘草酸在心、肺、肾中含量均增加,甘草苷在肺中分布先增加后减少。第三节八珍益智方的代谢研究基于代谢实验,对八珍益智方中异甘草苷、白杨素、桔皮素、川陈皮素、橙皮素、茯苓新酸A的代谢产物与可能代谢途径进行分析,在大鼠血浆、胆汁、尿液、粪便中共鉴定出44个代谢产物。其中,异甘草苷可脱葡萄糖基转化为异甘草素,后者可发生更为广泛的Ⅱ相结合反应。多甲氧基类化合物桔皮素与川陈皮素可通过Ⅰ相代谢酶的催化,将甲氧基转化为羟基,以进行硫酸化、葡萄糖醛酸化等Ⅱ相代谢反应。第四节八珍益智方的排泄研究基于排泄实验,对八珍益智方中橙皮苷、川陈皮素、桔皮素、甘草酸、甘草苷、异甘草苷进行排泄研究,并探究挥发油对八珍益智方的排泄情况的影响。在胆汁、尿液、粪便中均可检测到这6种成分,其中,胆汁排泄是甘草酸的主要排泄途径,甘草苷、桔皮素和川陈皮素主要通过尿液排出体外,在粪便样品中检测到的橙皮苷、异甘草苷含量最高。与加入挥发油(EO)的组相比,在胆汁样品中,川陈皮素

关键词：八珍益智方质量控制体内过程

八珍益智方改善老年小鼠轻度认知功能障碍初步功效评价研究

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中医药临床杂志 2021年第7期33卷 1308-1311页

作者：茆春阳杜燕周波牛阳王荣李亚荣马飞云宁夏医科大学宁夏银川750004 济宁医学院山东济宁272000

目的:探讨八珍益智方对老年小鼠轻度认知功能障碍功效影响。方法:随机将昆明种小鼠分为青年对照组、老年对照组、脑复康组、八珍组(低)、八珍组(中)、八珍组(高),通过运用避暗试验和跳台试验观察老年小鼠认知功能改善情况。结果:老年对... 详细信息

目的:探讨八珍益智方对老年小鼠轻度认知功能障碍功效影响。方法:随机将昆明种小鼠分为青年对照组、老年对照组、脑复康组、八珍组(低)、八珍组(中)、八珍组(高),通过运用避暗试验和跳台试验观察老年小鼠认知功能改善情况。结果:老年对照组较青年对照组小鼠学习记忆功能明显减退,差异极其显著;八珍益智方组和脑复康组均能改善老年小鼠的认知功能,与老年对照组相比,有统计学差异;八珍益智方中、高剂量组老年小鼠认知功能改善优于脑复康组。结论:八珍益智方具有显著改善轻度认知功能障碍功效。

关键词：八珍益智方老年小鼠轻度认知功能障碍痴呆治未病

八珍益智方中非挥发性成分在大鼠体内的代谢产物

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中成药 2021年第7期43卷 1690-1698页

作者：卜凡淑牛阳张婷黄楷迪钱大玮段金廒南京中医药大学江苏省中药资源产业化过程协同创新中心江苏省方剂高技术研究重点实验室江苏南京210023 宁夏医科大学回医药现代化教育部重点实验室宁夏银川750004 中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心江苏南京210023

目的分析八珍益智方中非挥发性成分在大鼠体内的代谢产物。方法大鼠灌胃给予八珍益智方水煎液(13.95 g/kg)后,采用超高效液相色谱⁃线性离子阱⁃静电轨道阱串联质谱联用(UHPLC⁃LTQ⁃Orbitrap⁃MS)法分析其血浆、胆汁、尿液、粪便中的非挥发... 详细信息

目的分析八珍益智方中非挥发性成分在大鼠体内的代谢产物。方法大鼠灌胃给予八珍益智方水煎液(13.95 g/kg)后,采用超高效液相色谱⁃线性离子阱⁃静电轨道阱串联质谱联用(UHPLC⁃LTQ⁃Orbitrap⁃MS)法分析其血浆、胆汁、尿液、粪便中的非挥发性成分。结果共鉴定出6个原型及40个代谢产物,主要发生Ⅰ相代谢反应(氧化、去甲基化等)、II相代谢反应(磺化、葡萄糖醛酸化、甘氨酸或谷胱甘肽结合等)。结论该方法快速有效,可用于鉴定大鼠体内八珍益智方代谢产物,并为进一步研究该复方制剂的功效物质基础和药动学提供依据。

关键词：八珍益智方非挥发性成分代谢产物超高效液相色谱⁃线性离子阱⁃静电轨道阱串联质谱联用(UHPLC⁃LTQ⁃Orbitrap⁃MS)

基于网络药理学和分子对接技术研究八珍益智方治疗阿尔茨海默病的潜在作用机制

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南京中医药大学学报 2020年第6期36卷 876-881页

作者：夏玲郭盛钱大玮武文星卜凡淑朱悦赵明牛阳段金廒南京中医药大学江苏省中药资源产业化过程协同创新中心/中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心/江苏省方剂高技术研究重点实验室江苏南京210023 宁夏医科大学中医药现代化教育部重点实验室宁夏银川750021

目的利用网络药理学方法及分子对接技术,研究八珍益智方治疗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的潜在药效物质基础和作用机制,为其临床应用提供理论依据。方法通过TCMSP、BATMAN-TCM、TCMID、中国知网(CNKI)和Pubmed数据库检索八珍... 详细信息

目的利用网络药理学方法及分子对接技术,研究八珍益智方治疗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的潜在药效物质基础和作用机制,为其临床应用提供理论依据。方法通过TCMSP、BATMAN-TCM、TCMID、中国知网(CNKI)和Pubmed数据库检索八珍益智方8味组方药材化学成分和作用靶点;通过GeneCards、OMIM数据库查询AD的相关靶点;利用R语言3.6.3得到药物和疾病的交集靶点;借助String数据库和Cytoscape 3.7.2软件构建PPI网络,筛选核心靶点;通过DAVID数据库进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析;利用AutoDock tools 1.5.6、AutoDock vina 1.1.2进行分子对接。结果八珍益智方共收集到200个化学成分和226个靶点,Cytoscape 3.7.2软件筛选出包括AKT1、MAPK3、IL-6、VEGFA、CASP3等37个核心靶点,槲皮素、山柰酚、柚皮苷、豆甾醇、7-甲氧基-2-甲基异黄酮等15个核心化合物。GO富集分析得到1331个条目(P八珍益智方治疗AD的通路主要涉及癌症的途径、MAPK信号通路、前列腺癌、神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路等,研究结果为八珍益智方治疗AD作用机制的进一步阐明提供了指引。

关键词：八珍益智方阿尔茨海默病网络药理学分子对接技术