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螺旋藻全蛋白与家族分类

食品科学 2018年第16期39卷 201-207页

作者：王娜向清豪赵肖荣李博生聂中良北京林业大学生物科学与技术学院北京100083 北京林业大学林业食品加工与安全北京市重点实验室北京100083 北京林业大学螺旋藻研究所北京100083 西南林业大学生命科学学院云南昆明650224

采用相对和绝对定量同位素标记实验的方法对螺旋藻全蛋白进行定性分析,并选用合理的统筹归类方法对其进行实用性归类。结果表明,共定性检测到螺旋藻蛋白质数为2 085个,其中已知蛋白1 562个;通过序列分类法将869个蛋白共分成233个蛋白超... 详细信息

采用相对和绝对定量同位素标记实验的方法对螺旋藻全蛋白进行定性分析,并选用合理的统筹归类方法对其进行实用性归类。结果表明,共定性检测到螺旋藻蛋白质数为2 085个,其中已知蛋白1 562个;通过序列分类法将869个蛋白共分成233个蛋白超家族与87个(均为已知蛋白)蛋白家族;根据蛋白的性质、结构和功能可分成7大类,发现蛋白超家族在抗氧化、抗癌、抗肿瘤、免疫调节等方面具有重要功能,可被广泛应用于食品、保健和医药等领域。由此可见,螺旋藻活性蛋白具有极大的开发前景。

关键词：螺旋藻全蛋白家族分类相对和绝对定量同位素标记实验(iTRAQ) 功能分析

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酿酒酵母全蛋白的提取

食品与发酵工业 2014年第9期40卷 180-184页

作者：方芳赵华咸漠刘辉天津科技大学生物工程学院天津300457 中国科学院生物基材料重点实验室中国科学院青岛生物能源与过程研究所山东青岛266101

酿酒酵母全蛋白制备方法多样,破碎细胞和制备温度等操作条件差异很大,有必要进行综合比较和量化分析,从而有利于选择适于双向电泳的最优制备方法。文中以蛋白释放率、全蛋白浓度为指标,对制备酿酒酵母全蛋白的常用方法进行了比较分析。... 详细信息

酿酒酵母全蛋白制备方法多样,破碎细胞和制备温度等操作条件差异很大,有必要进行综合比较和量化分析,从而有利于选择适于双向电泳的最优制备方法。文中以蛋白释放率、全蛋白浓度为指标,对制备酿酒酵母全蛋白的常用方法进行了比较分析。在文献报道的玻璃珠破碎制备全蛋白方法的基础上,采用单因素和正交试验设计对破碎次数、玻璃珠用量、装液比等进行了优化,得到了制备酿酒酵母提取全蛋白的最佳条件,蛋白释放率达到了9.23%,蛋白质量浓度为1.21 g/L,较优化前的方法分别提高了0.46倍和0.32倍。通过蛋白质双向电泳进行验证,优化后的电泳图像低丰度蛋白分辨率高,总蛋白点个数由124个增加到181个,35 kDa以下的低丰度蛋白的数量提高了1倍。结果表明,该制备方法可以很好地满足酿酒酵母蛋白质组学研究要求。

关键词：酿酒酵母破碎全蛋白双向电泳

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蠕形螨全蛋白提取及相对分子量鉴定

蠕形螨全蛋白提取及相对分子量鉴定

作者：朱晓丽山东大学

学位级别：硕士

人体蠕形螨,属节肢动物门,蠕形螨科,俗称毛囊虫（follicle mites）,分为毛囊蠕形螨（Demodex folliculorum）和皮脂蠕形螨（Demodex brevis）两种,分别寄生于人体毛囊和皮脂腺内。可引起人体蠕形螨病,表现为皮肤粗糙、毛孔扩张、毛囊炎... 详细信息

人体蠕形螨,属节肢动物门,蠕形螨科,俗称毛囊虫（follicle mites）,分为毛囊蠕形螨（Demodex folliculorum）和皮脂蠕形螨（Demodex brevis）两种,分别寄生于人体毛囊和皮脂腺内。可引起人体蠕形螨病,表现为皮肤粗糙、毛孔扩张、毛囊炎、皮脂腺囊肿、脱发等症状。最早在哺乳期,婴儿即可从母体感染蠕形螨。世界各地均有蠕形螨病病例报道,蠕形螨病主要通过接触传播,呈世界性分布。近十几年蠕形螨病的研究受到关注,逐渐成为人体寄生虫学及皮肤病学领域的热门课题。从目前参考文献看,对人体蠕形螨的研究不多,主要集中在形态学和临床治疗方面,国内对蠕形螨的研究在数量、深度和广度方面均已超过国外,但有关人体蠕形螨病的研究仍处于起步阶段。因观察到蠕形螨的诸多体表锐性结构,蠕形螨机械致病学说得到公认,但对其化学致病和免疫致病机制仍不清楚。临床医生对蠕形螨病尚停留在对症治疗阶段。蠕形螨分子生物学研究刚刚起步,有报道已成功提取到了蠕形螨RNA、DNA,建立了其cDNA文库,但对蠕形螨基因功能和基因表达的研究还处于空白阶段。蠕形螨分子生物学研究滞后的主要原因是,蠕形螨形体微小,需要用专门的工具和技术收集处理标本,缺乏成熟的提取蠕形螨基因和蛋白质的实验技术也成为阻碍研究进展的技术瓶颈。我们研究团队经多年的努力成功解决了上述技术难题。另外人体蠕形螨实验标本局限于从志愿者身上获取,不能人工培养,我们课题组用分子遗传学方法证明山羊蠕形螨与皮脂蠕形螨之间的遗传距离较毛囊蠕形螨与皮脂蠕形螨之间的遗传距离更近,理论上山羊蠕形螨是研究两种人体蠕形螨的理想动物模型。蛋白质是生命活动主要实施者,通过解读蛋白质来研究生物的特征,掀开了生命科学研究的新篇章。从蛋白质组学的角度出发,了解蠕形螨的生理代谢和致病机理是一种全新而根本的途径。目的蠕形螨蛋白质方面的研究还未见报道,本实验试图探索蠕形螨全蛋白的提取方法,并初步分离、鉴定和分析蠕形螨蛋白质组分。为进一步从蛋白组学的角度探索蠕形螨蛋白的结构、功能和致病性做基础铺垫。为建立蠕形螨蛋白质组数据库增添重要信息。方法从波尔山羊的新鲜皮肤结节中收集山羊蠕形螨样本。准备消毒实验器具,制备试液。在剥离面用手术刀切开羊皮结节,将其内干酪样物（0.5g）转移至特制的微型水晶研钵内,加入相同体积的洗洁精原液,用自制研磨棒将混合物充分研磨至均匀乳液状,再将其转移到15 ml玻璃试管中,加入8 ml PBS进行稀释,用玻璃材质皮试注射器吹打混匀。20℃,自然沉淀1 h,吸除上清液,重复上述步骤3次。再将清洗沉淀物转移至1.5ml EP管中,8,000 rpm离心20 min,弃上清液即得实验样本。称重等分样本,分装于EP管中,-80℃冷冻保存备用。分别用液氮研磨法和机械匀浆法破碎蠕形螨样本,每种又分别使用RIPA裂解液和自制裂解液裂解,得到四种裂解样本。13,000 rpm离心60 min,取上清液,置于EP管中,-20℃冷冻保存备用。用非干扰型蛋白质浓度测定试剂盒,检测提取蠕形螨蛋白的浓度。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析比较提取蠕形螨蛋白的效果。用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定部分蛋白质条带。根据Mascot检索软件检索NCBI数据库,对山羊蠕形螨蛋白组分进行初步分析。结果本实验成功提取了山羊蠕形螨全蛋白。实验发现,液氮研磨法破碎螨体的效果较机械匀浆法好。用自制裂解液裂解蠕形螨组织细胞的效果较传统的RIPA裂解液效果好,前者裂解出的蠕形螨蛋白浓度高,提取到的蛋白质较全,经SDS-PAGE分离蛋白可见蛋白条带多且清晰。用液氮研磨法加自制裂解液裂解样本,提取螨形螨蛋白效果最佳。MALDI-TOF-MS鉴定部分蛋白条带,检索蛛形纲蛋白数据库比对出了21种可信蛋白,170 kD的蛋白为胞质肌动蛋白,130 kD的蛋白为腺苷酰转移酶和谷氨酰胺连接酶,15 kD以下蛋白大部分为组蛋白。70 kD和15 kD蛋白与相近物种蛋白数据库比对没有对应的可信蛋白,本实验是首次提取蠕形螨蛋白,没有蠕形螨蛋白质专有数据库,因此分子量位于70 kD和15 kD的蛋白也可能是蠕形螨的专有蛋白。结论用液氮研磨法加自制裂解液裂解蠕形螨样本效果最佳,本实验成功提取到了山羊蠕形螨全蛋白。采用以蛋白分子量不同为原理的SDS-PAGE电泳和以蛋白质等电点、分子量差异为原理的双向电泳,分离了蠕形螨全蛋白。用MALDI-TOF-MS分析鉴定了蠕形螨蛋白质组分。为开展蠕形螨蛋白质组学研究,探索蠕形螨的功能蛋白及化学致病机制提供了参考。

关键词：蠕形螨全蛋白分子量十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳基质辅助激光解析电离飞行时间质谱

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砷污染胁迫对蚯蚓全蛋白表达的影响

砷污染胁迫对蚯蚓全蛋白表达的影响

共价键和方法富集全蛋白并用于蛋白质组学样品分析

2019年中国土壤学会土壤环境专业委员会、土壤化学专业委员会联合学术研讨会

作者：王亚利阿衣则克然木·依明 Michelle Thunders 邱江平李银生上海交通大学农业与生物学院河南工业大学化学化工与环境学院 Department of Pathology and Molecular Medicine University of Otago

砷(As)是一种普遍存在的元素,我国部分地区土壤砷污染形式严峻。蚯蚓是土壤中的大型动物,污染物进入蚯蚓体内后,主要集中在对该污染物较敏感的靶标位置,发挥其毒性作用。目前针对砷污染对蚯蚓全蛋白影响的研究较少。本研究采用蛋白质组... 详细信息

砷(As)是一种普遍存在的元素,我国部分地区土壤砷污染形式严峻。蚯蚓是土壤中的大型动物,污染物进入蚯蚓体内后,主要集中在对该污染物较敏感的靶标位置,发挥其毒性作用。目前针对砷污染对蚯蚓全蛋白影响的研究较少。本研究采用蛋白质组学方法来研究砷胁迫下蚯蚓全蛋白的表达差异,鉴定蚯蚓体内响应砷胁迫的重要蛋白,为寻找砷污染对蚯蚓的主要毒性效应及探讨其毒性机理提供线索。土壤中人为添加不同浓度的砷(0、5、10、

关键词：蚯蚓 As3+ 双向电泳全蛋白 MALDI-TOF/TOF-MS

来源： cnki会议评论

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共价键和方法富集全蛋白并用于蛋白质组学样品分析

麻蝇胞浆全蛋白质双向电泳及其抗菌等主要活性研究

第二十届全国色谱学术报告会及仪器展览会

作者：漆倩晏国全张祥民复旦大学化学系生命科学院

蛋白质富集方法主要基于疏水,亲水相互作用,离子交换,亲和相互作用等,这些富集方法往往容易受到高浓度盐,有机相及表面活性剂的影响。这篇文章中,我们开发了一种基于共价键和作用有效富集蛋白质的新方法,将全蛋白固定在环氧基功能化磁... 详细信息

蛋白质富集方法主要基于疏水,亲水相互作用,离子交换,亲和相互作用等,这些富集方法往往容易受到高浓度盐,有机相及表面活性剂的影响。这篇文章中,我们开发了一种基于共价键和作用有效富集蛋白质的新方法,将全蛋白固定在环氧基功能化磁性材料的表面。反应体系中的各种污染物及干扰杂质均能通过多次洗涤去除,且不会造成蛋白的损失,富集检测限能达到0.7n M BSA。通过富集及多次洗涤去除表面活性剂等干扰物质,最后将固定在材料表面的蛋白酶解,质谱分析。我们将这种方法用于液相色谱馏分中蛋白质的富集,减少由于冻干或富集效率造成的蛋白损失,提高蛋白鉴定覆盖度。

关键词：共价键和全蛋白环氧基液相色谱馏分

来源： cnki会议评论

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麻蝇胞浆全蛋白质双向电泳及其抗菌等主要活性研究

作者：朱延平江西师范大学

学位级别：硕士

麻蝇(Sarcophaga peregrina)是双翅目麻蝇科昆虫。特征为胸部灰色而带淡黑条纹,腹部有淡灰和深灰格子花纹,其繁殖速度极快。麻蝇是一种极具深度开发利用的可再生性昆虫资源。除蛹皮(壳)是优质昆虫壳聚糖的原料外,胞浆含有丰富的蛋白质... 详细信息

麻蝇(Sarcophaga peregrina)是双翅目麻蝇科昆虫。特征为胸部灰色而带淡黑条纹,腹部有淡灰和深灰格子花纹,其繁殖速度极快。麻蝇是一种极具深度开发利用的可再生性昆虫资源。除蛹皮(壳)是优质昆虫壳聚糖的原料外,胞浆含有丰富的蛋白质,是多种活性蛋白的资源库。本论文对麻蝇胞浆全蛋白进行分析并研究了其中的抗菌与抗氧化活性成分。研究内容之一,建立了麻蝇胞浆全蛋白分离提取的实验方案。采用水提、醇提、盐提、碱提等方法,分别获得水溶性蛋白、醇溶蛋白、球蛋白、碱溶蛋白及水不溶性蛋白质,并通过Brandford法测得各种蛋白质含量,其中清蛋白、小分子肽分别为41%和33%,醇溶蛋白质含量则最少为3.98%,为麻蝇胞浆全蛋白分析研究积累原始资料。研究内容之二,采用双向电泳技术建立了麻蝇胞浆全蛋白电泳分析图谱实验方案。重点摸索麻蝇胞浆全蛋白双向电泳工作条件。初步解决了麻蝇胞浆中大量的脂肪、色素及多糖对双向电泳的严重干扰问题,为获得较理想的麻蝇全蛋白双向电泳图谱及其蛋白质组的研究奠定了基础。研究内容之三,采用水杨酸法对麻蝇胞浆各分离蛋白进行抗氧化-羟基清除作用鉴定。获得了其抗氧化的基本数据,清蛋白和球蛋白对羟基自由基的清除率都能达到80%以上,其它蛋白组分的羟基清除也能达到45%以上;经两步层析纯化后的抗菌肽,电泳结果显示为单一条带,抗菌肽分子量小于14.4KD。运用滤纸片法对提取蛋白质进行抗菌活性探究,发现其对毛霉、根霉有明显的抑制作用;为麻蝇胞浆蛋白质在美容保健、动物源天然食品防腐剂等方面的开发利用提供依据。

关键词：麻蝇全蛋白双向电泳抑菌

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福建柏叶片全蛋白3种提取方法的比较

安徽农业科学 2017年第1期45卷 135-138,142页

作者：吴玉香沈少炎郑郁善福建农林大学园林学院福建福州350002 福建农林大学林学院福建福州350002

[目的]探索适于福建柏蛋白质组学研究的全蛋白样品制备的最优方案。[方法]以福建柏叶片为材料,利用3种全蛋白提取方法:TCA/丙酮法、酚提法和TCA/酚提结合法,研究不同提取方法对福建柏蛋白双向电泳结果的影响。[结果]TCA/丙酮法制备的蛋... 详细信息

[目的]探索适于福建柏蛋白质组学研究的全蛋白样品制备的最优方案。[方法]以福建柏叶片为材料,利用3种全蛋白提取方法:TCA/丙酮法、酚提法和TCA/酚提结合法,研究不同提取方法对福建柏蛋白双向电泳结果的影响。[结果]TCA/丙酮法制备的蛋白点数较少,为285个,蛋白质在制备过程中流失较多;酚提法得到的蛋白点最多,为1 226个,蛋白点较清晰但p H中端部分有轻微的蛋白堆积;TCA/酚提结合法得到了813个蛋白点,蛋白点较清晰,无明显的蛋白堆积现象。[结论]在福建柏蛋白质组学研究中,酚提法更适于福建柏全蛋白的制备,且酚提法明显优于TCA/酚提结合法。

关键词：福建柏全蛋白蛋白提取双向电泳

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麻蝇全蛋白提取及凝集素的纯化鉴定

麻蝇全蛋白提取及凝集素的纯化鉴定

作者：陈卫华江西师范大学

学位级别：硕士

麻蝇是一种开发利用价值极高的昆虫生物资源,它不仅是一种很有前途的廉价、优质动物蛋白源,而且经深加后可获得多种有效成分,具有较大的发展潜力,可开发成医药、保健品、生化制剂及化工产品,并应用于癌症、艾滋病等难治病的治疗,是近年... 详细信息

麻蝇是一种开发利用价值极高的昆虫生物资源,它不仅是一种很有前途的廉价、优质动物蛋白源,而且经深加后可获得多种有效成分,具有较大的发展潜力,可开发成医药、保健品、生化制剂及化工产品,并应用于癌症、艾滋病等难治病的治疗,是近年来研究的一个热点和亮点。本论文对麻蝇全蛋白提取和凝集素纯化鉴定进行了系统研究,得到较完整的全蛋白提取物及高纯度凝集素单一蛋白;并对麻蝇全蛋白电泳图谱、凝集素进行了初步分析。实验目的:建立麻蝇全蛋白质的提取方法和合理的提取方案,获得麻蝇全蛋白纯品,为制作麻蝇全蛋白电泳图谱创造条件,为麻蝇蛋白质组学研究积累基础数据。进行麻蝇凝集素的纯化与鉴定研究,获得高纯度麻蝇凝集素,为综合开发和利用麻蝇资源打下基础,为其它昆虫蛋白资源的开发利用建立可资借鉴的方案。实验方法:在预备试验的基础上,根据麻蝇蛋白的组成特点,分别用盐溶、醇溶、碱提等方法从脱脂麻蝇粉中分离提取清蛋白、小分子肽、球蛋白、醇溶蛋白和碱溶性蛋白等几类蛋白,并测定蛋白质含量,采用正交实验等技术,优化提取条件,设计麻蝇全蛋白提取方案,获得纯度较高的麻蝇全蛋白,用于制作麻蝇全蛋白电泳图谱。采用亲和层析法和戊二醛法纯化凝集素,通过SDS—PAGE凝胶电泳鉴定与分析了凝集素的理化性质与生物活性。实验结果:脱脂麻蝇粉蛋白质的主要成分是清蛋白、球蛋白和小分子肽;大部分蛋白质的分子量分部在32-86.2KD之间;蛋白质得率为44.94%,回收率为85.6%,Tris-饱和酚法获得的麻蝇全蛋白电泳图谱较为理想。亲和层析法所获凝集素的效价为256;麻蝇凝集素的相对分子质量为82.9KD。

关键词：麻蝇全蛋白凝集素纯化鉴定

低能铁离子注入烟草叶片的过氧化物酶同工酶和全蛋白分析

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河南农业科学 2004年第6期33卷 23-25页

作者：焦浈秦广雍霍裕平郑州大学离子束生物工程省重点实验室河南郑州450052

低能铁离子注入烟草叶片后 ,过氧化物酶 (POD)同工酶表达量和谱带发生了明显的变化。叶片中诱导出一条活性很强的Rf'1 同工酶谱带 ,缺失Rf5～Rf73条酶带。全蛋白的变化主要发生在蛋白表达量的差异上 ,与POD同工酶的变化具有相关性。POD... 详细信息

低能铁离子注入烟草叶片后 ,过氧化物酶 (POD)同工酶表达量和谱带发生了明显的变化。叶片中诱导出一条活性很强的Rf'1 同工酶谱带 ,缺失Rf5～Rf73条酶带。全蛋白的变化主要发生在蛋白表达量的差异上 ,与POD同工酶的变化具有相关性。POD同工酶谱的变化反映了注入造成的损伤在修复过程中细胞的生理生化变化 ,为进一步揭示低能离子注入的作用机理提供了基础。

关键词：低能铁离子注入烟草过氧化物酶(POD) 同工酶全蛋白