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耐钙心肌细胞的分离及基本电生理特性

第四军医大学学报 2000年第2期21卷 247-249页

作者：商立军臧益民王四旺第四军医大学基础部生理学教研室陕西西安710033 第四军医大学科研部药物研究所陕西西安710033

目的　探讨分离单个心肌细胞的方法并进行基本电生理指标测定 .方法　改进的 L angendorff灌流法及膜片钳全细胞记录法 .结果　单个心室肌细胞静息电位为 (- 85±2 .3) m V(n=1 0 ) ,记录到单个心室肌细胞典型的 L 型钙电流特性 .

关键词：心室肌细胞膜片钳全细胞记录

shRNA沉默肝癌细胞Kir6.2基因对K_(ATP)通道电流的影响

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四川医学 2008年第6期29卷 643-645页

作者：苏晓通梁平丁生才杨彤翰韩克强第三军医大学新桥医院肝胆外科重庆400037

目的研究shRNA干扰肝癌细胞Kir6.2基因后KATP通道电流的变化。方法脂质体法将构建的3种shRNA质粒表达载体HK(隐性对照质粒)、K1(质粒携带干扰序列1)、K2(质粒携带干扰序列2)分别转染肝癌细胞。实验分为4组:SK组(未转染)、HK组、K1组、K... 详细信息

目的研究shRNA干扰肝癌细胞Kir6.2基因后KATP通道电流的变化。方法脂质体法将构建的3种shRNA质粒表达载体HK(隐性对照质粒)、K1(质粒携带干扰序列1)、K2(质粒携带干扰序列2)分别转染肝癌细胞。实验分为4组:SK组(未转染)、HK组、K1组、K2组。采用膜片钳全细胞记录方法记录KATP通道电流。高阻封接后,用10mmol/L2-脱氧-D-葡萄糖灌流液灌流10min,测量各组的电流,最后换成100μM格列本脲灌流液灌流10min,再次测量电流,再次电流相减即可得格列本脲敏感的KATP电流。绘制Ⅰ-Ⅴ曲线。结果在SK、HK、K1、K2 4组中,KATP电流分别为(n=7)(nA)(1.80±0.673)、(1.87±0.541)、(5.16±1.011)、(3.89±1.287)。K1、K2组与SK组比较差异有统计学意义。K1、K2组KATP电流的幅度明显高于HK组。结论shRNA沉默肝癌细胞Kir6.2基因后KATP通道电流改变明显。

关键词： shRNA 肝癌细胞全细胞记录 2-脱氧-D-葡萄糖格列本脲

金雀异黄酮对大鼠小脑浦肯野细胞缺血后动作电位编码的影响

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蚌埠医学院学报 2012年第3期37卷 249-251页

作者：王小娇黄丽姜丽娜陈前芬赵士弟蚌埠医学院病理生理学教研室安徽蚌埠233030

目的:观察金雀异黄酮(genistein,GEN)对大鼠小脑浦肯野细胞缺血后动作电位编码的影响。方法:采用微电极技术和全细胞膜片钳方法,观察大鼠小脑浦肯野细胞在200μmol/L GEN培养10 min后缺血时动作电位编码的变化。结果:缺血诱导大鼠小脑... 详细信息

目的:观察金雀异黄酮(genistein,GEN)对大鼠小脑浦肯野细胞缺血后动作电位编码的影响。方法:采用微电极技术和全细胞膜片钳方法,观察大鼠小脑浦肯野细胞在200μmol/L GEN培养10 min后缺血时动作电位编码的变化。结果:缺血诱导大鼠小脑浦肯野细胞序列发放的动作电位峰间距缩短,动作电位峰时程标准差增大,细胞过度兴奋,动作电位编码的精确性降低。GEN能抑制脑缺血后序列发放的动作电位峰间距缩短及动作电位峰时程标准差显著增大。结论:GEN能预防小脑浦肯野细胞的过度兴奋,稳定缺血后细胞动作电位的编码能力。

关键词：脑缺血金雀异黄酮浦肯野细胞动作电位全细胞记录大鼠

HEK293细胞内源性电压门控钾离子通道电生理学特性研究

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首都医科大学学报 2005年第6期26卷 719-721页

作者：李晶玮胡大一李翠兰杨进刚首都医科大学附属北京天坛医院心血管内科首都医科大学附属北京同仁医院心血管中心北京大学人民医院心血管内科

目的探讨人胚胎肾细胞(HEK293细胞)内源性电压门控钾通道的电生理特性,避免HEK293细胞上内源性离子通道对外源性离子通道表达时的干扰。方法利用全细胞膜片钳技术分析了HEK293细胞内源性电压门控钾通道的电生理特性。结果在HEK293细胞... 详细信息

目的探讨人胚胎肾细胞(HEK293细胞)内源性电压门控钾通道的电生理特性,避免HEK293细胞上内源性离子通道对外源性离子通道表达时的干扰。方法利用全细胞膜片钳技术分析了HEK293细胞内源性电压门控钾通道的电生理特性。结果在HEK293细胞上去极化电压从-80 mV开始可触发1个外向电流。在+100 mV时电流为(422.78±68.87)pA,电流密度为(21.91±3.20)pA/pF。钾通道阻断剂四乙胺(tetraethylammonium,TEA)、4-氨基吡啶(4-aminopyri-dine,4-AP),在将细胞外液钾浓度由4 mmol/L提高到40 mmol/L时,对外向电流有影响。结论正常培养的HEK293细胞本身有内源性的钾通道。该外向电流可能包括了IK、IK1、IKur和Ito。

关键词： HEK293细胞膜片钳全细胞记录延迟整流电压门控钾电流

碘化二甲基粉防已碱对骨骼肌细胞烟碱诱发电流的抑制作用

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解放军药学学报 2001年第3期17卷 121-124页

作者：刘卫苏克林张雷王文俭赵志春俞惠琴刘传缋中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所北京100850 中国人民解放军总参谋部管理局第一门诊部北京100088 中国人民解放军总后勤部卫生部药品仪器检验所北京100071 中国人民解放军第二炮兵总医院药剂科北京100088 中国人民解放军济南军区第88医院山东泰安271000

目的　比较碘化二甲基粉防已碱 (DMTI)和二氢 - β -刺桐啶碱 (dHβE)对烟碱诱发电流的抑制作用 ,并确定DMTI在烟碱受体上的作用位点。方法　取新生Wistar大鼠骨骼肌细胞体外培养获得肌球 ,用膜片箝全细胞记录技术 ,观察肌球的烟碱诱发... 详细信息

目的　比较碘化二甲基粉防已碱 (DMTI)和二氢 - β -刺桐啶碱 (dHβE)对烟碱诱发电流的抑制作用 ,并确定DMTI在烟碱受体上的作用位点。方法　取新生Wistar大鼠骨骼肌细胞体外培养获得肌球 ,用膜片箝全细胞记录技术 ,观察肌球的烟碱诱发电流。结果　 0 .0 8mmol·L-1DMTI抑制烟碱诱发电流幅度的作用与 0 .0 2mmol·L-1dHβE的作用类似。向单个细胞持续给烟碱覆盖诱发电流的全过程。电流的衰减过程反映了烟碱受体的失敏 ,DMTI使烟碱诱发电流的慢失敏时间常数减小 ,即加速受体失敏 ,但没发现dHβE有这种作用。在 - 30、- 5 0、- 70、- 90mV钳制电压处观察电压改变对DMTI和对dHβE作用的影响 ,没有发现DMTI或dHβE抑制烟碱电流的作用随钳制电压改变而改变 ,即两者的作用都是非电压依赖性的 ,表明DMTI和dHβE都不是离子通道阻断剂。结论　由于烟碱受体是变构蛋白 ,变构调节剂能加速受体失敏 ,DMTI的抑制作用符合变构调节剂的作用特点 ,并且作用位点不在烟碱受体离子通道。

关键词：全细胞记录烟碱受体变构调节拮抗剂碘化二甲基粉防己碱

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大鼠视皮层神经元突触后电流的发育变化

中国现代医学杂志 2003年第8期13卷 9-11页

作者：秦伟阴正勤王世君赵妍君范惠民第三军医大学西南医院眼科重庆400038

目的 :揭示大鼠发育过程中视皮层神经元的突触后电流的发育特性。方法 :对出生后 7～ 2 8d龄大鼠进行脑片膜片钳全细胞记录 ,并根据输入阻抗的大小对神经元进行分类 ,以及分析其突触后电流的特性。结果 :随着输入阻抗减小 ,视皮层神经... 详细信息

目的 :揭示大鼠发育过程中视皮层神经元的突触后电流的发育特性。方法 :对出生后 7～ 2 8d龄大鼠进行脑片膜片钳全细胞记录 ,并根据输入阻抗的大小对神经元进行分类 ,以及分析其突触后电流的特性。结果 :随着输入阻抗减小 ,视皮层神经元的突触后电流的峰值、上升时间和下降时间增大。结论 :在大鼠生后早期的发育过程中 ,视觉经验调制视皮层神经元的突触可塑性。

关键词：大鼠视皮层突触可塑性发育膜片钳技术全细胞记录

大鼠视觉发育可塑性关键期终止前后视皮层AMPA受体电流的发育变化

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眼科新进展 2008年第9期28卷 641-645页

作者：王昌鹏阴正勤秦伟翁传煌第三军医大学西南医院/西南眼科医院重庆市400038

目的为了探索视觉发育可塑性关键期终止机制。对可塑性关键期终止前后，正常大鼠视皮层α-氨基-3-羟基-5-甲基4-异恶唑丙酸（amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionicacid，AMPA）受体介导的兴奋性突触后电流进行了研究。方法采... 详细信息

目的为了探索视觉发育可塑性关键期终止机制。对可塑性关键期终止前后，正常大鼠视皮层α-氨基-3-羟基-5-甲基4-异恶唑丙酸（amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionicacid，AMPA）受体介导的兴奋性突触后电流进行了研究。方法采用脑片膜片钳全细胞记录技术，记录生后3～8周正常大鼠视皮层AMPA受体介导的兴奋性突触后电流。结果在大鼠视皮层Ⅱ—Ⅳ层，95倒神经元形成全细胞记录，其中记录到AMPA受体电流43例；生后3～8周，视皮层神经元的输入阻抗、静息膜电位差异无统计学意义；生后3—8周，AMPA受体电流的潜伏期、上升时间、下降时间及半波宽差异无统计学意义；生后3～6周AMPA受体电流的幅值随发育逐渐增加，6～8周幅值变化不显著。结论视觉发育可塑性关键期高峰到成年阶段，大鼠视皮层神经元被动膜学特性无明显变化；AM—PA受体电流幅值随发育逐渐增加，关键期终止时达顶峰；突触后AMPA受体的功能变化可能参与了视觉发育可塑性关键期的终止过程。

关键词：视皮层兴奋性突触后电流全细胞记录 AMPA受体大鼠

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神经科学的突破性方法:膜片钳技术

世界科学 2020年第2期 20-21页

作者：李升伟

膜片钳技术最初是为了记录离子通过细胞膜通道蛋白的电流而发展起来的,现在它已经成为神经科学工具箱中真正的中坚力量。大脑中的信息被认为是由数千个神经元细胞产生的复杂电脉冲模式编码而成的。每个脉冲,即动作电位,是由流经神经元... 详细信息

膜片钳技术最初是为了记录离子通过细胞膜通道蛋白的电流而发展起来的,现在它已经成为神经科学工具箱中真正的中坚力量。大脑中的信息被认为是由数千个神经元细胞产生的复杂电脉冲模式编码而成的。每个脉冲,即动作电位,是由流经神经元膜的带电离子电流调节的。但是,这些离子是如何穿过神经元的绝缘膜的,多年来一直是个谜。1976年,埃尔温·内尔(Erwin

关键词：全细胞膜片钳移液管全细胞记录

Staurosporine诱导心肌细胞氯通道电流的电生理学特性

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心脏杂志 2009年第3期21卷 292-295页

作者：刘艳张卫卫李源王晓明第四军医大学西京医院老年病科陕西西安710032

目的探讨staurosporine(STS)诱导乳鼠心肌细胞凋亡的早期,凋亡性容积减少(AVD)发生时,是否有氯通道电流的产生及其电生理学特性。方法分别采用低渗组的灌流液和含STS的等渗组灌流液处理原代培养的SD乳鼠心肌细胞,以膜片钳全细胞记录法... 详细信息

目的探讨staurosporine(STS)诱导乳鼠心肌细胞凋亡的早期,凋亡性容积减少(AVD)发生时,是否有氯通道电流的产生及其电生理学特性。方法分别采用低渗组的灌流液和含STS的等渗组灌流液处理原代培养的SD乳鼠心肌细胞,以膜片钳全细胞记录法记录电流。结果①以低渗灌流液处理的心肌细胞时,可记录到氯通道电流。该电流呈现类似容积敏感性氯通道电流(volume-sensitive chloride channel current,ICl,Vol)的电生理学特性:即外向整流性、高电位刺激下的时间依赖性失活及对氯通道阻断剂4,4′-异二硫氮氐2,2′-二磺酸(DIDS)的敏感性。②以含4μmol/L STS的等渗液灌流心肌细胞时,也可记录到类似低渗诱导产生的氯通道电流,具有ICl,Vol的电生理学特性,且用氯通道阻断剂500μmol/L DIDS后,在+40 mV、+60 mV、+80 mV及+100 mV时,能够明显电压依赖性地阻断该电流。结论首次应用STS在培养乳鼠心肌细胞中记录到类似容积敏感性氯通道电流。

关键词：心肌细胞 staurosporine 容积敏感性氯通道电流全细胞记录