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小型猪颌骨内全牙再生研究

小型猪颌骨内全牙再生研究

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2018全国口腔生物医学学术年会

作者：吴志芳夏登胜王松灵首都医科大学附属北京口腔医院首都医科大学口腔医学院口腔医学研究所全牙再生及口腔组织功能重北京市重点实验室

目的基于发育原理,采用细胞重组方法,实现大型动物小型猪颌骨内全牙再生。方法本实验以小型猪为动物模型(n=7),以胚胎猪帽状期牙胚为细胞来源,分离牙胚上皮和间充质,将其解离成单细胞后,再重组成新的组织工程牙胚;经体外三维培养后,无... 详细信息

目的基于发育原理,采用细胞重组方法,实现大型动物小型猪颌骨内全牙再生。方法本实验以小型猪为动物模型(n=7),以胚胎猪帽状期牙胚为细胞来源,分离牙胚上皮和间充质,将其解离成单细胞后,再重组成新的组织工程牙胚;经体外三维培养后,无需生物支架材料,回植于成年小型猪颌骨内,期间以骨髓间充质干细胞和阿司匹林为免疫调节介质(n=4);从影像学和组织学方面观察牙齿再生情况。结果回植150天后,影像学资料显示:在有免疫干预的4头小型猪颌骨中,有3头小型猪的回植区可见高密度影的中心有一低密度影像,类似于牙体组织;用工程软件三维重建后,发现为再生牙类似于单根牙。HE染色,发现再生牙具有非常类似于自然牙的牙体及牙周组织结构,包括牙釉质、牙本质、牙髓、牙骨质、牙周膜及牙槽骨等。免疫组织化学染色发现:再生牙阳性表达NF和CD31,即具有神经和血管结构。结论基于发育学原理,利用细胞重组技术,无需支架材料,可在大型动物颌骨内再生出具有类似于天然牙解剖结构的全牙,为将来开展人类全牙再生转化研究提供了有意义的参考依据。

关键词：小型猪细胞重组牙发育全牙再生颌骨内再生

来源： cnki会议评论

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基于细胞重组技术的小型猪颌骨内全牙再生研究

基于细胞重组技术的小型猪颌骨内全牙再生研究

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中华口腔医学会全科口腔医学专业委员会第八次学术会议

作者：吴志芳夏登胜王松灵首都医科大学附属北京口腔医院首都医科大学口腔医学院口腔医学研究所全牙再生及口腔组织功能重北京市重点实验室

目的:基于发育原理,采用细胞重组方法,实现大型动物小型猪颌骨内全牙再生。方法:本实验以小型猪为动物模型,以胚胎猪帽状期牙胚为细胞来源,分离牙胚上皮和间充质,将其解离成单细胞后,再重组成新的组织工程牙胚;经体外三维培养后,无需生... 详细信息

目的:基于发育原理,采用细胞重组方法,实现大型动物小型猪颌骨内全牙再生。方法:本实验以小型猪为动物模型,以胚胎猪帽状期牙胚为细胞来源,分离牙胚上皮和间充质,将其解离成单细胞后,再重组成新的组织工程牙胚;经体外三维培养后,无需生物支架材料,回植于成年小型猪颌骨内,期间以骨髓间充质干细胞和阿司匹林为免疫调节介质;从影像学和组织学方面观察牙齿再生情况。结果:回植150天后,影像学资料显示,回植区可见一高密度影,中心有一低密度影像,类似于牙体组织;用工程软件三维重建后,发现为该再生牙呈水平向生长,一端较大,类似牙冠,一端较尖细,类似于单根牙牙根。获取该回植区牙槽骨进行HE染色,发现再生牙具有非常类似于自然牙的牙体及牙周组织结构,包括牙釉质、牙本质、牙髓、牙骨质、牙周膜及牙槽骨等。结论:基于发育学原理,利用细胞重组技术,无需支架材料,可在大型动物颌骨内再生出具有类似于天然牙解剖结构的全牙,为将来开展人类全牙再生转化研究提供了有意义的参考依据。

关键词：小型猪细胞重组牙发育全牙再生颌骨内再生

来源： cnki会议评论

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冻干牙复合乳牙牙髓干细胞聚合体用于牙髓牙周再生的临床转化应用研究

冻干牙复合乳牙牙髓干细胞聚合体用于牙髓牙周再生的临床转化应用...

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作者：伍美玲第四军医大学

学位级别：硕士

牙齿再生具有重要的临床价值和科研意义,近年来愈发成为组织工程与再生医学在口腔医学领域的研究热点。多种牙源性间充质干细胞已被分离培养作为种子细胞用于牙体牙髓牙周乃至全牙再生的实验研究,其中人乳牙牙髓干细胞(SHED)因其较强的... 详细信息

牙齿再生具有重要的临床价值和科研意义,近年来愈发成为组织工程与再生医学在口腔医学领域的研究热点。多种牙源性间充质干细胞已被分离培养作为种子细胞用于牙体牙髓牙周乃至全牙再生的实验研究,其中人乳牙牙髓干细胞(SHED)因其较强的增殖能力、多向分化潜能及较易的获取途径成为组织工程与再生医学理想的种子细胞。课题组前期实验利用SHED细胞聚合体成功再生出了牙髓-牙本质复合体,并将其应用于完全脱位牙的再植治疗后取得了良好的牙周牙髓再生的治疗效果。临床上对众多牙齿缺失患者实现全牙再生是牙齿组织工程研究的最终目标,而能找到生物相容性好、无毒性刺激且能促进牙体组织再生的支架材料是至关重要的。近年研究发现牙本质和牙骨质作为天然的牙齿结构支架,不仅具有良好的生物相容性,而且牙质中包含的细胞生长因子和蛋白活性成分还能为种子细胞提供一个与牙生长发育相似的微环境,另外也易于获取。因此我们课题组希望借鉴骨组织工程制备支架材料常用的冷冻干燥法来处理牙齿,得到形态结构完整、低免疫原性并富含利于组织再生的诱导因子的冻干牙。本研究首先通过制备冻干牙并检测其生物学性能,明确其用于牙髓、牙周组织再生的可行性;进而采用冻干牙复合SHED细胞聚合体进行全牙异位移植和原位再植的动物实验,分析牙髓再生和牙周组织重建情况;最后开展一例临床前瞻性试验,评估自体冻干牙复合自体乳牙牙髓干细胞聚合体用于年轻恒牙完全脱位牙髓牙周再生治疗的预后,以期建立一种新的用于修复牙齿缺失的全牙再生方法,并为冻干牙及乳牙牙髓干细胞聚合体的临床转化应用提供研究基础和实验依据。第一部分冻干牙的制备及其生物学性能的实验研究目的:制备冻干牙并明确其生物学性能。方法:收集临床拔除的单根牙,通过牙体形态预备、脱脂、脱蛋白、冻干前预处理、冷冻干燥、消毒灭菌等过程完成冻干牙的制备;首先利用扫描电镜对其形态和结构进行观察并测试其机械性能;进而将人乳牙牙髓干细胞(SHED)接种到冻干牙片进行共同培养,扫描电镜观察细胞在不同时间段的形态变化,Hoechst细胞核染色后观察不同时间段牙片上细胞数目的变化,MTT法检测其对SHED细胞增殖能力的影响;大鼠皮下移植冻干牙,HE观察炎症反应情况。结果:冻干牙片表面玷污层较少,牙本质小管的开放程度较高,冻干牙整体形态与正常牙齿无差异;冻干牙釉质及牙本质的显微硬度都比正常牙略低但无统计学差别;冻干牙表面细胞的黏附生长情况要更好,在培养18h时细胞数量有显著统计学差异,MTT结果显示冻干牙对SHED细胞增殖活性的影响低于与正常牙;对移植后的大鼠皮肤进行HE染色,发现相同时间段正常牙植入组及冻干牙植入组的皮下炎症细胞的浸润程度没有显著差异,植入28天时炎症反应完全消退,未发现严重的免疫排斥反应。结论:制备的冻干牙不仅保持原有的形态结构和机械性能,并且具有良好的生物相容性和低免疫原性,是一种理想的牙再生支架材料。第二部分冻干牙复合SHED细胞聚合体异位移植的动物实验研究目的:观察SHED细胞聚合体复合冻干牙裸鼠皮下移植后牙髓、牙周、牙体组织再生情况,探索全牙再生的新方法。方法:分别将SHED细胞聚合体植入预备好的正常及冻干牙根管内,并且包裹覆盖牙根表面,而后移植至6周雌性裸鼠的背部皮下孵育。术后2月取材,组织脱矿后应用HE、免疫组化等方法观察分析组织再生情况。结果:组织学观察发现冻干牙组与正常牙组的再生组织充满根管,牙根表面也可见纤维结缔组织附着。HE染色显示两组根管内壁牙本质有新形成的前期牙本质,成牙本质样细胞排列整齐,其内侧可见均匀分布的成纤维样细胞、胶原纤维以及毛细血管结构;牙根表面可见牙周膜样的纤维结缔组织附着;再生组织中未见炎性肉芽组织及不规则钙化团块。免疫组化染色显示根管内再生组织中可见神经标志物S100染色阳性的纤维网状结构,并可见血管内皮细胞标记物CD31染色呈阳性。冻干牙组与正常牙组未见明显差异。结论:SHED细胞聚合体复合冻干牙异位移植后能形成包含成牙本质细胞、毛细血管及神经丛结构的牙髓组织以及牙周膜样组织。第三部分冻干牙复合乳牙牙髓干细胞聚合体用于小型猪牙髓牙周再生的实验目的:利用小型猪(mini-pig)牙再植实验模型检测自体牙及异体冻干牙复合自体乳牙牙髓干细胞(SPED)聚合体进行牙髓牙周再生的效果。方法:分离和培养小型猪的乳牙牙髓干细胞,制备SPED细胞聚合体;建立冻干牙再植的实验动物模型,设自体牙复合自体SPED聚合体再植组、异体冻干牙复合自体SPED聚合体再植组;术后6月对实验牙的动度、颜色进行观察,采集小型猪的外周血进行T细胞表面抗原的流式检测,取材后进行HE、免疫组化等组织学检测观察牙髓再生及牙周愈合情况。结果:进行异体冻干牙再植的小型猪未出现任何不良的免疫排斥反应,流式细胞检测发现异体冻干牙植入组小型猪外周血中CD3、CD4、CD8阳性表达的T细胞亚群比

关键词：乳牙牙髓干细胞聚合体冻干牙牙再植牙髓再生全牙再生

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