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藏药兔耳草常用基原的ITS2序列鉴定研究

中草药 2022年第21期53卷 6857-6864页

作者：高必兴齐景梁钟红马璐琳李倩连艳蒋桂华蒋运斌成都中医药大学药学院四川成都361113 四川省药品检验研究院国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室四川成都611731 西南大学药学院/中医药学院重庆北碚400715 成都市郸都区中医医院四川成都611730

目的利用DNA条形码内转录间隔区2(internal transcribed spacer 2,ITS2)序列针对自采及流通使用环节的不同基原兔耳草进行分析,建立一种快速鉴定常用兔耳草的方法,并分析市场流通的主流品种。方法采用试剂盒提取101份兔耳草样品的DNA,... 详细信息

目的利用DNA条形码内转录间隔区2(internal transcribed spacer 2,ITS2)序列针对自采及流通使用环节的不同基原兔耳草进行分析,建立一种快速鉴定常用兔耳草的方法,并分析市场流通的主流品种。方法采用试剂盒提取101份兔耳草样品的DNA,针对其ITS2片段进行PCR扩增并双向测序,获取ITS2序列信息;并从GenBank上下载相关序列28条。运用MEGA6.0对129条ITS2序列进行比对分析,计算种内和种间K2P遗传距离,构建邻接法(neighbor-joining,NJ)系统进化树,并预测ITS2二级结构。采用BLAST法及NJ聚类分析法分析市场流通兔耳草基原。结果除四川部分区域所产全缘兔耳草Lagotis integra与革叶兔耳草***种间亲缘关系近外,短筒兔耳草***、全缘兔耳草、圆穗兔耳草***、革叶兔耳草、短穗兔耳草***及紫叶兔耳草***的种内最大遗传距离均小于种间最小遗传距离,具有明显的条形码间距。系统进化树显示短筒兔耳草、圆穗兔耳草、短穗兔耳草及紫叶兔耳草单独聚为一支,四川部分区域所产全缘兔耳草与革叶兔耳草聚为一支,其余全缘兔耳草聚为一支。通过ITS2二级结构发现,各基原兔耳草在茎环数目、大小及位置均有一定差异,可区分亲缘关系近的全缘兔耳草与革叶兔耳草。市场分析显示,市面上流通的兔耳草有6种基原,以全缘兔耳草使用占比最高,短筒兔耳草次之,短穗兔耳草及圆穗兔耳草较低,紫叶兔耳草及革叶兔耳草最低。结论ITS2序列可以作为DNA条形码用来鉴别常用藏药兔耳草的基原,市场主流兔耳草品种为全缘兔耳草、短筒兔耳草及短穗兔耳草。

关键词：兔耳草 ITS2序列短筒兔耳草全缘兔耳草圆穗兔耳草革叶兔耳草短穗兔耳草紫叶兔耳草主流品种

基于环烯醚萜苷成分的不同基原兔耳草及药用部位差异性研究

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中药新药与临床药理 2021年第7期32卷 1019-1023页

作者：何芳齐景梁李倩杨吉玉高必兴周娟四川省食品药品检验检测院/国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室四川成都611731 成都中医药大学药学院四川成都610072

目的建立藏药兔耳草环烯醚萜苷类主要成分(梓醇、桃叶珊瑚苷)的含量测定方法,并对不同基原兔耳草及不同药用部位进行对比研究。方法采用Waters Atlantis T3 C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相:乙腈-0.1%磷酸水(1∶99);检测波长:... 详细信息

目的建立藏药兔耳草环烯醚萜苷类主要成分(梓醇、桃叶珊瑚苷)的含量测定方法,并对不同基原兔耳草及不同药用部位进行对比研究。方法采用Waters Atlantis T3 C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相:乙腈-0.1%磷酸水(1∶99);检测波长:210 nm;流速:1 mL·min^(-1)。采用单因素方差分析方法进行数据分析。结果所建立的梓醇、桃叶珊瑚苷含量测定方法分离度高,在测定的浓度范围内线性关系好,精密度、重复性、稳定性的RSD均小于2.0%。梓醇、桃叶珊瑚苷平均加样回收率分别为102.94%、100.85%。各基原兔耳草环烯醚萜苷类主要成分(梓醇、桃叶珊瑚苷)比较:全缘兔耳草>紫叶兔耳草>短穗兔耳草>圆穗兔耳草>革叶兔耳草>短筒兔耳草。同一基原不同药用部位比较:梓醇含量地下部位优于地上部位,而桃叶珊瑚苷含量地上部位优于地下部位。结论所建立的方法快速、简便、重复性好,可用于藏药兔耳草梓醇、桃叶珊瑚苷的含量测定,为兔耳草的质量控制提供参考。短筒兔耳草环烯醚萜苷类成分含量低于其他5种基原。建议将各基原兔耳草均作为藏药兔耳草使用。

关键词：兔耳草基原含量测定梓醇桃叶珊瑚苷高效液相色谱法

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藏药短管兔耳草的化学成分研究

中国中药杂志 2006年第2期31卷 164-165页

作者：史高峰黄新异鲁润华兰州理工大学石油化工学院甘肃兰州730050 中国科学院成都生物研究所四川成都610041

短管兔耳草Lagotis brevituba Maxim是玄参科兔耳草属植物,生长在海拔3000－4850m的高山草甸、倒石堆、碎石带上。主要分布于青海、西藏、甘肃等省区。该植物为常用的藏药,其藏药名为洪连,全草入药,藏医主要用于治疗全身发烧、肾炎、肺... 详细信息

短管兔耳草Lagotis brevituba Maxim是玄参科兔耳草属植物,生长在海拔3000－4850m的高山草甸、倒石堆、碎石带上。主要分布于青海、西藏、甘肃等省区。该植物为常用的藏药,其藏药名为洪连,全草入药,藏医主要用于治疗全身发烧、肾炎、肺病、阴道流黄黑色液物、湿热泻痢、高血压病、动脉粥样硬化症、综合性毒物中毒及“心热”等疾病。[第一段]

关键词：化学成分研究兔耳草藏药动脉粥样硬化症耳草属植物湿热泻痢高血压病毒物中毒玄参科

藏族药兔耳草属药用植物化学成分与药理作用研究进展

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中国实验方剂学杂志 2017年第12期23卷 214-222页

作者：朱继孝张红阳钟国跃王洪玲江西中医药大学中药资源与民族药研究中心南昌330004

藏族药兔耳草属药用植物资源充足,品种丰富,具有行血解毒,清热调经的功效,在藏族医药体系中应用广泛,是藏族药中常用的上品药材,在多种方剂中作为主药。但目前兔耳草属药用植物的研究报道较少,其研究成果主要集中在革叶兔耳草Lagotis al... 详细信息

藏族药兔耳草属药用植物资源充足,品种丰富,具有行血解毒,清热调经的功效,在藏族医药体系中应用广泛,是藏族药中常用的上品药材,在多种方剂中作为主药。但目前兔耳草属药用植物的研究报道较少,其研究成果主要集中在革叶兔耳草Lagotis alutacea,短穗兔耳草***,短管兔耳草***,圆穗兔耳草***,云南兔耳草***这几个种的兔耳草属植物的药理和化学成分的研究,其他种的兔耳草属植物罕见报道。目前研究表明,兔耳草属药用植物含有黄酮类、环烯醚萜苷类、苯丙素苷类、甾体类、三萜类等多种化学成分。现代药理研究表明其具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤、抗肝损伤、抗炎、抗痛风等多种药理活性。兔耳草属药用植物应用前景非常广阔,但对其的研究开发较少。本文搜集了对近年来兔耳草属植物的资源分布、化学成分、药理作用及其在藏族医药体系的应用进行系统的文献综述,以期为其临床合理应用和深入开发提供科学参考。

关键词：兔耳草化学成分药理作用药用植物

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藏药兔耳草的生药学研究

中药材 2020年第4期43卷 824-830页

作者：何芳高必兴赵春艳齐景梁周娟兰志琼成都中医药大学药学院四川成都610072 四川省食品药品检验检测院四川成都611730

目的:调研藏药兔耳草的使用基原,对比研究其常用基原植物及药材的性状、显微特征。方法:对藏药兔耳草主产区及藏医院、藏药企业、市场开展实地调研,并收集常用且基原准确的兔耳草原植物及药材,采用体式显微镜、光学显微镜等仪器,结合植... 详细信息

目的:调研藏药兔耳草的使用基原,对比研究其常用基原植物及药材的性状、显微特征。方法:对藏药兔耳草主产区及藏医院、藏药企业、市场开展实地调研,并收集常用且基原准确的兔耳草原植物及药材,采用体式显微镜、光学显微镜等仪器,结合植物分类学、性状鉴别法及显微鉴别法进行观察和比较。结果:藏药兔耳草为玄参科兔耳草属多种植物,常用基原植物有5种,分别是短管兔耳草、全缘兔耳草、圆穗兔耳草、革叶兔耳草及短穗兔耳草,其中全缘兔耳草、圆穗兔耳草及短管兔耳草使用频率较高。各基原植物的主要区别在于花序的形态、花萼后方开裂程度、花冠筒伸直或弯曲、茎直立或匍匐;药材性状的主要区别在于根茎大小、断面特征、匍匐茎的有无、叶的形态及花序;显微特征的主要区别在于叶柄横切面的栅栏组织细胞数目、根表皮细胞层数。结论:临床使用的兔耳草药材基原混乱,部分基原标准未收录;5种兔耳草在基原、性状、显微上均存在一定差异,通过此研究结果可有效鉴别。

关键词：兔耳草基原调研原植物研究性状鉴别显微鉴别

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藏药兔耳草醇提物对小鼠免疫功能的影响

现代免疫学 2017年第4期37卷 335-341页

作者：门连超赵勤何树梅袁东亚张景瑜吴晓军崔佩西藏民族大学医学部生命科学基础研究实验室西藏民族大学医学部基础医学院咸阳712082

为研究藏药兔耳草醇提物对小鼠免疫功能的影响,随机将小鼠分为正常对照组、模型组、兔耳草醇提物组,模型组用醋酸泼尼松,均连续灌胃给药15d,检测胸腺脾脏指数、血清溶血素抗体生成、迟发型超敏反应和脾脏T细胞亚群变化。后进行小鼠廓清... 详细信息

为研究藏药兔耳草醇提物对小鼠免疫功能的影响,随机将小鼠分为正常对照组、模型组、兔耳草醇提物组,模型组用醋酸泼尼松,均连续灌胃给药15d,检测胸腺脾脏指数、血清溶血素抗体生成、迟发型超敏反应和脾脏T细胞亚群变化。后进行小鼠廓清指数的测定及IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ的检测。与模型组相比,兔耳草醇提物组中剂量组(4.0g/kg)和高剂量组(8.0g/kg)可显著提高小鼠胸腺脾脏指数(P兔耳草醇提物组可增加小鼠脾脏T细胞的活化与数量。在廓清实验中,各剂量组均可提升小鼠的廓清指数,但只有高剂量组有差异性(P兔耳草醇提物各剂量组可提升小鼠的IL-2水平,且有一定的剂量关系;高、中剂量组能够增加IL-4的含量,高、低剂量组能够提升IFN-γ的水平(P兔耳草醇提物可以从多方面调节小鼠的免疫功能。

关键词：兔耳草醇提物免疫功能免疫因子

短管兔耳草和密花角蒿化学成分分析及其抗氧化等药理活性研究

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短管兔耳草和密花角蒿化学成分分析及其抗氧化等药理活性研究

作者：郭佳佳重庆医科大学

学位级别：硕士

短管兔耳草——玄参科兔耳草属植物,多生长于西藏、青海、甘肃一带。它作为藏药常用于治疗与抗氧化活性密切相关的发热,肾炎,肺病等疾病。目前,短管兔耳草的化学成分研究主要以苯乙醇苷类和酚类成分为主,更多的成分需要被探究。同时,由... 详细信息

短管兔耳草——玄参科兔耳草属植物,多生长于西藏、青海、甘肃一带。它作为藏药常用于治疗与抗氧化活性密切相关的发热,肾炎,肺病等疾病。目前,短管兔耳草的化学成分研究主要以苯乙醇苷类和酚类成分为主,更多的成分需要被探究。同时,由于抗氧化活性与多种疾病密切关联。因此,本文针对短管兔耳草的化学组成和体内、外抗氧化活性进行探究。密生波罗花角蒿(密花角蒿)——紫葳科角蒿属植物,是常用藏药的一种,常被发现于西藏的拉萨、昌都;青海的玉树、海西;四川的巴塘、木里等地。其味道较苦,具有调经理气、止痛止血的功能。目前,约有5篇文献对密花角蒿的化学成分进行研究,鉴定了其黄酮类、苯乙醇苷类、萜类以及挥发性成分。在药理活性方面,探究了其抗肿瘤和保肝作用。但是其同属植物大多具有的镇痛活性尚未见报道。因此,为了促进密花角蒿进一步的开发利用,本研究开展了密花角蒿化学成分及其镇痛和抗氧化活性的研究。一、短管兔耳草化学成分及其体内外抗氧化活性研究这部分采用高效液相色谱-质谱联用仪对短管兔耳草的甲醇提取物中的化学成分进行表征,同时测定其三种提取物中总黄酮、总酚和总皂苷含量。应用还原能力测定实验、自由基(DPPH、ABTS)清除实验、β-胡萝卜素/亚油酸漂白法和辐射损伤小鼠模型评价其体内外抗氧化活性。结果显示总酚、总黄酮和总皂苷类成分在水提取物中含量较高。总共44个化合物被鉴定,其中包括19种黄酮、14种酚类、8种苯乙醇苷类、2种环烯醚萜苷化合物。首次采用LC-MS/MS分析在兔耳草属植物中鉴定了化合物1到25。在自由基清除能力和还原能力测试中,短管兔耳草水提取物显示最强的抗氧化能力。但是在β-胡萝卜素/亚油酸漂白试验中表现出最优抗氧化活性的却是甲醇提取物,其原因可能是甲醇的极性与该实验的油性体系更为接近。在辐射损伤小鼠模型中,短管兔耳草提取物组与对照组相比能够剂量依赖性地增加SOD和GSH-Px的水平同时降低MDA的水平,使得小鼠各项指标趋于正常。本研究结果可给短管兔耳草未来的研究提供参考同时也表明它可成为潜在的抗氧化剂的植物来源。二、密花角蒿化学成分及其镇痛和抗氧化活性研究这部分采用高效液相色谱-质谱联用仪对密花角蒿进行定性,并对密花角蒿不同提取物中总酚、总黄酮和总生物碱的含量进行测定,探索并研究了密花角蒿的抗氧化和镇痛活性。结果显示,这三类成分在甲醇提取物中含量最高。依据LC-MS/MS结果,共解析了25种成分,其中首次在该植物中分析得到化合物1-23。在抗氧化试验中,比起具有更多黄酮类、酚类和生物碱类成分的甲醇提取物,水提取物的自由基清除能力最佳。因此推断仍有其他发挥着良好抗氧化活性的成分存在于密花角蒿中。在镇痛活性考察试验中,密花角蒿水提物在福尔马林试验的第一和第二阶段都具有剂量依赖性的镇痛作用,可延长热板试验中小鼠的疼痛潜伏期。在醋酸扭体实验中,水提物能显著减少扭体次数。结果表明,密花角蒿可成为新的抗氧化剂与镇痛剂的植物来源,本研究所得结果可拓宽其在医疗行业中的应用并为其深入研究提供参考。

关键词：角蒿兔耳草成分分析抗氧化镇痛

藏药甘青乌头抗菌、抗肿瘤活性研究以及兔耳草抗病毒活性研究

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藏药甘青乌头抗菌、抗肿瘤活性研究以及兔耳草抗病毒活性研究

作者：傅永红兰州大学

学位级别：硕士

目的: 对单味藏药甘青乌头提取物以及复方十八味诃子利尿丸进行了抑菌作用研究;深入考察了兔耳草提取物体内外抗HSV-2病毒活性及其机制;初步检测了甘青乌头生物碱类提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作用。通过实验筛选出具有抗菌、抗病毒以... 详细信息

目的: 对单味藏药甘青乌头提取物以及复方十八味诃子利尿丸进行了抑菌作用研究;深入考察了兔耳草提取物体内外抗HSV-2病毒活性及其机制;初步检测了甘青乌头生物碱类提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作用。通过实验筛选出具有抗菌、抗病毒以及抑制肿瘤细胞增殖的活性部位。方法: 本研究采用有机溶剂提取法得到甘青乌头和兔耳草全草的提取物。采用琼脂扩散法和微量稀释法以抑菌圈和最小抑菌浓度为指标对单味甘青乌头乙醇总提取物、挥发油以及生物碱类提取物和藏药复方十八味诃子利尿丸进行了体外抑菌活性研究。采用MTT法结合CPE法测定兔耳草乙醇总提取物和总皂苷对Vero细胞的毒性,以ACV为阳性对照采用空斑减少法结合定量荧光PCR法考查了兔耳草乙醇总提取物和总皂苷体外抗HSV-2病毒活性及其机制。通过建立HSV-2病毒小鼠脑炎模型和生殖器模型对兔耳草乙醇总提取物和总皂苷体内抗病毒活性进行了初步探讨。采用SRB法检测了甘青乌头生物碱类提取物对肝癌细胞HepG-2和肺癌细胞lewis增殖的抑制作用。结果: 抗菌活性研究显示:单味藏药甘青乌头乙醇总提取物、挥发油以及生物碱类提取物对金黄色葡萄球菌、耐药表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、粪肠球菌、大肠埃希菌、铜绿假单孢杆菌和白色念珠菌均形成了直径范围为9～19 mm的抑菌圈,提取物对各种菌种的MIC范围为0.125～25.00 mg/ml。藏药复方十八味诃子利尿丸对实验菌种具有抑制作用,形成直径范围为8～19 mm大小的抑菌圈,对各种菌的MIC范围为3.125～50 mg╱ml。抗病毒活性研究:兔耳草乙醇总提取物、总皂苷和阳性对照ACV对Vero细胞的半数中毒浓度TC分别为0.2103 mg/ml、0.1127 mg/ml和11.02 mg/ml,对病毒直接杀灭的半数有效浓度EC分别为0.08825 mg/ml、0.03255 mg/ml和0.2529 mg╱ml,治疗指数TI分别为2.4、3.5和44.3。抑制病毒侵入细胞作用的半数有效浓度EC分别为0.1478 mg/ml、0.09333mg/ml和0.2105mg/ml,治疗指数TI分别为1.4、1.2和52.4。兔耳草乙醇总提取物、总皂苷对小鼠灌胃的LD分别为1.27 g/kg和0.5g/kg。0.125 g/kg剂量组明显延长了小鼠的平均存活时间,总皂苷在该剂量组对小鼠的保护率为10%。生殖器感染小鼠给药一周后,小鼠生殖器疱疹病变出现好转,两周后小鼠基本康复。抑制肿瘤细胞增殖活性研究:甘青乌头脂溶性生物碱和水溶性生物碱对HepG-2细胞和Lewis细胞均具有明显的抑制作用,抑制作用随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强。结论: 抗菌活性研究:单味藏药甘青乌头各种提取物对实验菌种抑制作用:挥发油成分＞水溶性生物碱＞脂溶性生物碱＞乙醇总体提取物。各种提取物对革兰阳性(G+)菌的抑制效应比革兰阴性(G-)菌显著一些。对耐药菌和真菌效果最好,尤其是生物碱类该特性非常突出。藏药复方十八味诃子利尿丸对革兰阳性(G+)菌比对革兰阴性(G-)菌的抑制作用强,对白色念珠菌抑制效果最好。抗病毒活性研究:对HSV-2的直接杀灭和病毒侵入细胞的阻断作用是兔耳草乙醇总提取物和总皂苷体外抗病毒的主要作用途径。提取物高剂量治疗组对HSV-2病毒引起的小鼠脑炎和生殖器感染有一定的治疗作用。抑制肿瘤细胞增殖活性研究:甘青乌头脂溶性生物碱和水溶性生物碱对HepG-2细胞和Lewis细胞均具有明显的抑制作用且抑制作用随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强,其中水溶性生物碱比脂溶性生物碱的抑制作用更加明显。

关键词：甘青乌头十八味诃子利尿丸兔耳草抑菌作用抗病毒作用单纯疱疹病毒II型细胞增殖

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兔耳草有效部位的筛选

云南中医中药杂志 2011年第8期32卷 61-62页

作者：郭洁黄伟陕西中医学院陕西咸阳712046 陕西国际商贸学院医药学院陕西咸阳712046

目的:筛选兔耳草发挥保肝、镇痛、抗炎作用的有效部位。方法:用系统溶剂分离法将兔耳草分离成极性不同的组分,通过兔耳草不同组分对D-半乳糖胺致肝损伤小鼠的保护作用对热板法引起小鼠疼痛的影响以及对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响,筛选兔... 详细信息

目的:筛选兔耳草发挥保肝、镇痛、抗炎作用的有效部位。方法:用系统溶剂分离法将兔耳草分离成极性不同的组分,通过兔耳草不同组分对D-半乳糖胺致肝损伤小鼠的保护作用对热板法引起小鼠疼痛的影响以及对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响,筛选兔耳草发挥保肝、镇痛以及抗炎作用的有效部位。结果:兔耳草氯仿提取物和正丁醇提取物为兔耳草发挥保肝作用的物质基础,同时氯仿提取物为兔耳草发挥镇痛抗炎作用的有效部位。

关键词：兔耳草有效部位药理学研究保肝镇痛抗炎