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兔多杀性巴氏杆菌环介导等温扩增检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2013年第11期35卷 903-906页

作者：李科刘燕韦强肖琛闻季权安鲍国连浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310021

为建立一种快速、准确地检测兔多杀性巴氏杆菌(Pm)的环介导等温扩增(LAMP)方法,本研究利用设计的4条特异性引物,在链置换DNA聚合酶的作用下,优化反应条件,并进行特异性和敏感性试验。结果表明,建立的LAMP扩增反应可以在70 min内完成;具... 详细信息

为建立一种快速、准确地检测兔多杀性巴氏杆菌(Pm)的环介导等温扩增(LAMP)方法,本研究利用设计的4条特异性引物,在链置换DNA聚合酶的作用下,优化反应条件,并进行特异性和敏感性试验。结果表明,建立的LAMP扩增反应可以在70 min内完成;具有良好的特异性;敏感性为普通PCR的10倍,最低可以检测量为16 cfu的DNA;采用建立的LAMP方法对27份经PCR检测Pm阳性的样品进行检测,结果均呈阳性。该方法的建立为Pm在临床上的快速检测提供了一种新的技术手段。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌 Kmt1 环介导等温核酸扩增 PCR

兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白ompH2基因的克隆与原核表达

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中国兽医科学 2013年第7期43卷 728-732页

作者：王开马红霞高云航胡桂学裴志花吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

为克隆和表达兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白ompH2基因,并对其表达产物的反应原性进行研究,用设计的1对特异性引物对兔多杀性巴氏杆菌CVCC500株总DNA进行ompH2基因的PCR扩增。将PCR片段克隆至pMD18-T载体中,进行测序。随后,将该基因克隆到原... 详细信息

为克隆和表达兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白ompH2基因,并对其表达产物的反应原性进行研究,用设计的1对特异性引物对兔多杀性巴氏杆菌CVCC500株总DNA进行ompH2基因的PCR扩增。将PCR片段克隆至pMD18-T载体中,进行测序。随后,将该基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,将重组表达质粒pET30a(+)-ompH2转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导。测序分析证明,得到了1条大小为1 052bp的基因片段,与国内外报道的兔多杀性巴氏杆菌ompH2基因的核苷酸序列相似性达99%以上。重组表达质粒的酶切鉴定、PCR扩增和测序分析表明,重组表达载体构建成功。SDS-PAGE检测结果证实,该基因可以在大肠杆菌中表达,表达产物为分子质量约47ku的融合蛋白。Western-blot分析表明,表达的重组蛋白ompH2具有反应原性。为研究兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白ompH2的免疫学活性奠定了基础。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌 ompH2基因克隆原核表达

兔多杀性巴氏杆菌铁调节外膜蛋白(IROMPs)抗原交叉性试验

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微生物学报 2004年第5期44卷 667-671页

作者：顾宏伟陆承平南京农业大学农业部疾病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

分别以含铁培养基和限铁培养基培养 4株兔多杀性巴氏杆菌JS、C5 1 2、C5 1 3及C5 1 17株 ,用刚果红结合试验初步分析铁调节外膜蛋白 (IROMPs)表达情况 ,同时破碎菌体 ,提取外膜蛋白 ,经SDS PAGE比较这 4株细菌在正常培养条件、富铁培养... 详细信息

分别以含铁培养基和限铁培养基培养 4株兔多杀性巴氏杆菌JS、C5 1 2、C5 1 3及C5 1 17株 ,用刚果红结合试验初步分析铁调节外膜蛋白 (IROMPs)表达情况 ,同时破碎菌体 ,提取外膜蛋白 ,经SDS PAGE比较这 4株细菌在正常培养条件、富铁培养条件及限铁培养条件时外膜蛋白的表达差异 ,结果表明 :限铁培养时 ,细菌表现出对刚果红染料较强结合性 ,且这 4株巴氏杆菌均表达数种高分子量的IROMPs,主要有 14 7kD、135kD、99kD、94kD、82kD及 72kD蛋白带 ,4株之间存在一定的差异 ,而正常或富铁条件培养时均不表达上述条带。免疫印迹结果显示 ,正常条件培养的全菌 (C5 1 17株 )抗血清中不含有针对IROMPs的抗体 ,限铁培养的C5 1 17株IROMPs可诱导机体产生相应抗体 ,并且能与JS、C5 1 2及C5 1 3株的IROMPs发生抗原交叉性反应。同时用间接ELISA检测C5 1 17株 3种IROMP(99kD、94kD和 87 6kD)的交叉抗体效价 ,结果这 3种抗血清均与其它 3株的产生较高的交叉抗体滴度。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌铁调节外膜蛋白交叉抗原性

兔多杀性巴氏杆菌株外膜蛋白A基因克隆及序列分析

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浙江农业学报 2010年第6期22卷 741-744页

作者：庞安娜鲍国连刘燕韦强肖琛闻季权安浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310021

参考GenBank中登录的多杀性巴氏杆菌序列设计了一对特异性引物,采用PCR方法分别扩增出兔多杀性巴氏杆菌C51-2-499株、C51-3-500株的OmpA全长片段,克隆到pMD18-T载体上进行序列测定和分析。结果表明：OmpA全长1.068 kb,含有一个1.068 kb... 详细信息

参考GenBank中登录的多杀性巴氏杆菌序列设计了一对特异性引物,采用PCR方法分别扩增出兔多杀性巴氏杆菌C51-2-499株、C51-3-500株的OmpA全长片段,克隆到pMD18-T载体上进行序列测定和分析。结果表明：OmpA全长1.068 kb,含有一个1.068 kb的开放阅读框（ORF）,编码353个氨基酸,相对分子量为37 969.8 kD,等电点pI为8.90。与6株参考菌株比较,核苷酸同源性为89.7%~99.1%,氨基酸同源性为82.9%~98.6%。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白A 序列分析

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兔多杀性巴氏杆菌PCR检测方法建立及优化

中国公共卫生 2011年第4期27卷 527-528页

作者：秦翠丽牛明福李松彪宫强孙晓菲河南科技大学食品与生物工程学院生物工程系河南洛阳471003

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,PM）是一种重要的畜、禽、野生动物及人类共患性病原菌。由该菌引起的兔巴氏杆菌病传播快、病程急、发病率和死亡率高,对养兔业危害非常大〔1〕,同时也会影响到人类的生命健康和安全。该病传统... 详细信息

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,PM）是一种重要的畜、禽、野生动物及人类共患性病原菌。由该菌引起的兔巴氏杆菌病传播快、病程急、发病率和死亡率高,对养兔业危害非常大〔1〕,同时也会影响到人类的生命健康和安全。该病传统的实验室检测方法（病原分离与生化鉴定等）繁杂费时。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌聚合酶链式反应检测

兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白OMPH1基因的克隆及原核表达

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中国兽医杂志 2014年第6期50卷 15-17,21页

作者：裴志花高云航马红霞王开孟轲音吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122

本试验旨在克隆和表达兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白OMPH1基因,并对其表达产物的反应原性进行研究。以兔多杀性巴氏杆菌C51-2-499株总DNA为模板,进行外膜蛋白基因OMPH1的PCR扩增,得到了1条大小为1 041 bp的基因片段,克隆至pMD-18T中。测序... 详细信息

本试验旨在克隆和表达兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白OMPH1基因,并对其表达产物的反应原性进行研究。以兔多杀性巴氏杆菌C51-2-499株总DNA为模板,进行外膜蛋白基因OMPH1的PCR扩增,得到了1条大小为1 041 bp的基因片段,克隆至pMD-18T中。测序分析证明,它与国内外报道的多杀性巴氏杆菌OMPH1基因的核苷酸序列相似性达99%以上。将该基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,经酶切和测序分析表明,重组表达载体pET-30a(+)-OMPH1构建成功。将此重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导。SDS-PAGE检测结果证实,该基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式得到表达,表达产物的分子质量约47KD,与预期的结果一致。Western-blot分析表明,OMPH1重组表达蛋白具有反应原性,可被兔多杀性巴士杆菌阳性血清识别,为兔多杀性巴氏杆菌基因重组疫苗及新型诊断试剂的研究奠定了基础。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌 OMPH1基因克隆原核表达

兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌双重PCR检测方法的建立及应用

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中国养兔 2015年第2期 15-18页

作者：于新友李天芝王金良沈志强山东绿都生物科技有限公司滨州256600 山东省滨州畜牧兽医研究院滨州256600

根椐Gen Bank公布的兔多杀性巴氏杆菌16S r RNA和支气管败血波氏杆菌fim N基因序列,设计两对引物,在建立两种细菌单项PCR检测方法的基础上,优化双重PCR反应条件,建立了两种细菌的双重PCR检测方法,用这两对引物对同一样品中的兔多杀性巴... 详细信息

根椐Gen Bank公布的兔多杀性巴氏杆菌16S r RNA和支气管败血波氏杆菌fim N基因序列,设计两对引物,在建立两种细菌单项PCR检测方法的基础上,优化双重PCR反应条件,建立了两种细菌的双重PCR检测方法,用这两对引物对同一样品中的兔多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌核酸为模板进行双重PCR扩增,结果可同时扩增兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌的258bp和449bp的特异性片段,而对其他4种兔病原菌的扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,对兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌的最低核酸检出限分别均为1pg。通过对78份临床病料检测,将建立的双重PCR技术和单项PCR方法进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为100%。表明建立的双重PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌的同时检测和鉴别诊断。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌支气管败血波氏杆菌双重PCR 检测

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兔多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性研究

广西农业科学 2010年第11期41卷 1219-1222页

作者：刘梅黄红梅吴健敏谢彬陈凤莲华俊白安斌广西大学动物科学技术学院南宁530005 广西兽医研究所南宁530001

从病死兔肝脏中分离获得1株两极着色、革兰氏阴性球杆菌,根据发病情况、病理变化、菌株形态特征、培养特性、生理生化特性及其16S rRNA序列测定结果,确定为兔多杀性巴氏杆菌。通过动物试验证实,该分离菌株具有较强的致病性;药敏特性检... 详细信息

从病死兔肝脏中分离获得1株两极着色、革兰氏阴性球杆菌,根据发病情况、病理变化、菌株形态特征、培养特性、生理生化特性及其16S rRNA序列测定结果,确定为兔多杀性巴氏杆菌。通过动物试验证实,该分离菌株具有较强的致病性;药敏特性检测结果表明,该分离菌株对常用抗生素有较强的耐药性,在所检测的22种抗生素中仅对氟苯尼考、头孢氨苄、磺胺六甲氧嘧啶、头孢噻肟、洛美沙星、菌必治等8种抗生素高度敏感,因此防治时应进行药敏试验筛选敏感药物;耐药基因检测发现,该分离菌株携带有多种耐药基因,与药敏试验结果一致。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌分离鉴定 16SrRNA 药敏特性耐药基因

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兔多杀性巴氏杆菌的血清型及其免疫原性

中国兽医杂志 1988年第2期 12-15页

作者：姜国华北京市农林科学院畜牧兽医研究所

兔巴氏杆菌病是由兔多杀性巴氏杆菌(Pasteurella cuniculicida)引起的急性、致死性或慢性传染病,兔发病率达20—70%,死亡率(急性型)可高达40%。由于疾病的扩散,使兔生长缓慢,甚至大批死亡,从而给我国毛兔及肉用兔的生产造成极为严重的

关键词：兔多杀性巴氏杆菌膜型交互免疫热浸型特异性荚膜抗原血清型血清变种免疫原性