检索结果-南通市图书馆

水产学报 2017年第1期41卷 142-149页

作者：曾伟伟王庆王英英李莹莹郝贵杰石存斌沈锦玉中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔药创制重点实验室浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室

为建立一种检测草鱼呼肠孤病毒HZ08株(HZ08)抗体的免疫学方法,本实验以接种HZ08病毒的细胞培养板为抗原板,以免疫弱毒疫苗的草鱼血清为抗体,通过反应条件优化,建立了检测GCRV HZ08血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA)方法,并对... 详细信息

为建立一种检测草鱼呼肠孤病毒HZ08株(HZ08)抗体的免疫学方法,本实验以接种HZ08病毒的细胞培养板为抗原板,以免疫弱毒疫苗的草鱼血清为抗体,通过反应条件优化,建立了检测GCRV HZ08血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA)方法,并对该方法特异性、敏感性、重复性、与ELISA检测结果的符合率及对临床血清样品的检测效果等进行了验证。结果显示,HZ08株种毒按照1×103拷贝/μL浓度接种后72h固定,HRP-Ig G二抗1∶1000稀释,待检血清1∶100稀释时效果最佳;该IPMA方法与草鱼阴性血清、免疫细菌三联疫苗的草鱼血清、感染GCRV JX0901(GCRVⅠ型)的草鱼血清无交叉反应;GCRV HZ08株阳性血清稀释至1∶800时仍能检出;批内和批间重复性实验显示,该方法具有良好的重复性;符合性实验结果显示,该IPMA方法与ELSIA方法的阳性和阴性符合率分别为95.7%和87.5%;用建立的IPMA方法检测草鱼出血病弱毒疫苗免疫草鱼,免疫2周后抗体水平达到峰值;对现地送检的126份草鱼血清样本进行检测,平均检出阳性率为72.2%。研究表明,建立的HZ08株IPMA方法特异性强、重复性好、敏感性高,为GCRVⅡ型的流行病学调查、疫苗免疫效果评价及抗原抗体检测提供了一种有效的检测手段。

关键词：草鱼呼肠孤病毒免疫过氧化物酶单层细胞实验抗体检测

来源：

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

水貂肠炎细小病毒VP2蛋白多克隆抗体的制备与IPMA方法的建立

水貂肠炎细小病毒VP2蛋白多克隆抗体的制备与IPMA方法的建立

引用

作者：卞赛赛新疆农业大学

学位级别：硕士

水貂肠炎细小病毒(Mink Enteritis Virus,MEV)又称水貂细小病毒,由其引起的水貂病毒性肠炎对水貂的生长和毛皮质量都有很大的影响。自从1981年我国初次发现此病以来,随后接连在多省的水貂养殖场内检测出该病病毒。本研究的目的有二:一... 详细信息

水貂肠炎细小病毒(Mink Enteritis Virus,MEV)又称水貂细小病毒,由其引起的水貂病毒性肠炎对水貂的生长和毛皮质量都有很大的影响。自从1981年我国初次发现此病以来,随后接连在多省的水貂养殖场内检测出该病病毒。本研究的目的有二:一是通过构建pET-32a-VP2的重组质粒,转化至大肠杆菌原核表达系统,获得重组蛋白。以该重组蛋白对新西兰大白兔进行免疫,获得MEV VP2多克隆抗体,为实验室后续研究MEV VP2的相关结构提供基础。二是建立MEV的免疫过氧化物酶单层细胞实验(Immunoperoxidase Monolayer Assay,IPMA),为貂场MEV的检测和防控提供可靠简便的方法。所获得的结果如下:根据GenBank数据库中MEV VP2基因序列,经多序列比对,并在上下游两端引入Bam H I和Xho I酶切位点,设计了引物VP2 F和VP2 R,以MEV全基因组重组质粒pB-MEV-L为模板,利用PCR技术,扩增出MEV VP2片段,该片段与pET-32a载体连接,转化至DH5α感受态细胞中,经酶切与序列测定,证明成功构建了VP2基因原核表达质粒pET-32a-VP2。将该质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导,高效表达了pET-32a-VP2重组蛋白。经免疫印迹实验证明,获得的重组蛋白具有较好的反应原性。将纯化后的蛋白作为免疫原,免疫新西兰兔,制备抗血清。经四次免疫后,用ELISA方法检测该抗血清效价,效价达到1:1024;经免疫荧光实验证明,获得的抗体与MEV具有良好的结合活性。建立了一种在血清中检测MEV抗原的IPMA检测方法,并对该检测方法的特异性、敏感性、重复性以及病毒感染检出时间进行了实验验证。结果显示:细胞接毒48 h后进行固定和检测效果最佳;一抗最佳稀释度为1:100,最适作用时间为60 min;二抗最高稀释度为1:2000,最佳孵育时间为90 min;该IPMA方法与犬瘟热病毒、犬冠状病毒、水貂阿留申病毒无交叉反应;对培养的MEV稀释10仍能用该方法检出,敏感性较PCR方法高1个稀释度;该方法的重复性良好;对大鼠接毒第4天后即可在血液中检测出MEV;对采集的90份水貂血样进行检测,结果显示MEV感染阳性水貂血样为19份,感染率为21%。

关键词：水貂肠炎细小病毒 VP2 多克隆抗体免疫过氧化物酶单层细胞实验

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：