检索结果-南通市图书馆

作者：原剑中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

在蛋白质组学研究的很长时间内,天然多肽被视为体内代谢的生物垃圾。最近几年很多研究者发现,多肽作为蛋白代谢产物,反映了体内生物代谢过程。多肽组是疾病标志物的重要的宝库,对于肿瘤的早期预警、早期诊断具有重要的研究意义。肝癌作... 详细信息

在蛋白质组学研究的很长时间内,天然多肽被视为体内代谢的生物垃圾。最近几年很多研究者发现,多肽作为蛋白代谢产物,反映了体内生物代谢过程。多肽组是疾病标志物的重要的宝库,对于肿瘤的早期预警、早期诊断具有重要的研究意义。肝癌作为世界范围内高发病率疾病,引起众多研究者的关注,其在亚洲,具有与乙肝、肝硬化等密切联系的疾病特点,因此肝癌的早期预警技术研究对于预防肝癌、预测肝癌的发病趋势具有特殊的研究价值和社会意义。目前,用于临床确诊的肝癌标志物主要还是甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)、鳞状细胞癌抗原免疫球蛋白M复合物(SCCA-IgM IC)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)及其他联检标志物,最常用的AFP诊断方法对于直径3cm以下的肿瘤具有诊断局限性。因此急需开展新的标志物的研究,以适应肝癌的早期诊断研究。本论文建立了一种免疫质谱检测多肽标志物的方法,同时将该方法应用于肝癌患者血清多肽的检测分析。首先我们采用传统的单克隆抗体制备方法制备出2种多肽单克隆抗体:抗SP0104抗体、抗SP0105抗体,在此基础上使用Protein G Agarose建立了基于多肽抗体和MALDI-TOF-MS的免疫质谱方法,使用该方法对两种多肽标准品SP0104、SP0105进行检测,偏差小于0.5Da。本文进一步优化了影响免疫质谱方法灵敏度和通量的条件,确定优化结果抗体/载体量比为3.9μg/μL,抗体与载体联接采用非交联方式、抗体孵育环境4℃旋转、抗体孵育时间15分钟、抗原孵育时间8小时、洗脱液含0.1%TFA的70%ACN、洗脱时间1分钟。通过优化以上影响抗体固定和抗原检测的关键因素,提高了免疫质谱方法检测通量及灵敏度。本文分别对所建立优化后的免疫质谱方法的线性范围、准确性、重复性、冻融稳定性进行方法评价,其中在0.1pmol.4pmol范围内线性关系良好,检测限0.1pmol,线性方程为I=601.5N-79.3,相关系数为0.9642。我们分别将0.3pmol、0.9 pmol、2.7pmol标准品注入空白血清,回收率为117.6%、81.6%、125%,平行检测三次,RSD分别为26.3%、5.4%、25.6%。将0.9 pmol标准品注入空白血清,经三次冻融偏差幅度为7.3%9.2%,显示3次冻融检测结果具有稳定性。评价结果表明,优化后的免疫质谱方法适用于血清低浓度多肽的检测。最后我们比较了有机溶剂沉淀、超滤、去除IgG和白蛋白、解离白蛋白连接的多肽等4种血清多肽预处理方法和不处理对免疫质谱检测结果的影响,结果表明不处理时标志物检测值最高。采用通过优化的免疫质谱方法完成对20例正常血清、20例肝癌血清的检测,结果两组质谱峰强度检测值经过t检验,P免疫质谱方法可用于肝癌多肽血清标志物的诊断研究。

关键词：免疫质谱多肽标志物肝癌血清

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MALDI-TOF质谱在肿瘤临床应用的研究进展

引用

中国肿瘤 2008年第12期17卷 1027-1031页

作者：郑智国毛伟敏浙江省肿瘤医院浙江省肿瘤研究所浙江杭州310022

随着MALDI-TOF质谱技术的发展,它在分子诊断学的领域起着越来越重要的作用,也被广泛的应用到肿瘤临床研究中,尤其是该技术能同时应用于DNA、RNA、Pr等不同分子层次的检测。该文就MAILDI-TOF质谱技术平台及其在肿瘤领域的应用及存在的问... 详细信息

随着MALDI-TOF质谱技术的发展,它在分子诊断学的领域起着越来越重要的作用,也被广泛的应用到肿瘤临床研究中,尤其是该技术能同时应用于DNA、RNA、Pr等不同分子层次的检测。该文就MAILDI-TOF质谱技术平台及其在肿瘤领域的应用及存在的问题,以及将来的应用前景作一探讨。

关键词：肿瘤 MALDI-TOF 免疫质谱分子诊断学

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