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利用免疫荧光标记研究磷酸化组蛋白H3在乳腺癌细胞中的分布

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Acta Genetica Sinica 2002年第6期29卷 471-475,T001页

作者：杨琴陈家童耿朝晖俞新大黄熙泰南开大学生命科学学院生物化学与分子生物学系天津300071

在时间上与细胞周期相关并且在功能上又与染色质凝集偶联的一类组蛋白翻译后修饰就是组蛋白H3磷酸化。运用一个针对H3 Ser10磷酸化的特异性抗体 ,通过SDS PAGE、免疫印迹和免疫荧光标记检测了磷酸化H3在MCF 7细胞周期中的分布。共聚焦... 详细信息

在时间上与细胞周期相关并且在功能上又与染色质凝集偶联的一类组蛋白翻译后修饰就是组蛋白H3磷酸化。运用一个针对H3 Ser10磷酸化的特异性抗体 ,通过SDS PAGE、免疫印迹和免疫荧光标记检测了磷酸化H3在MCF 7细胞周期中的分布。共聚焦显微结果显示 :H3磷酸化在早前期细胞核膜附近以斑点状起始 ,之后扩展到整个凝集的染色质上 ,然后在早中期达到最高水平。H3去磷酸化开始于有丝分裂后期 ,很快在末期完成 ,而此时末期细胞凝集的染色质并未完全解凝集。H3磷酸化与染色质初期凝集之间存在着精确的时间和空间上的相关性。另外 ,对H3磷酸化可能的作用进行了讨论。

关键词：免疫荧光标记磷酸化组蛋白H3 乳腺癌细胞分布染色质凝集细胞周期

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免疫荧光标记在原生动物纤毛虫观察中的应用

实验室研究与探索 2009年第1期28卷 29-30,110页

作者：尹飞周素娟盛春顾福康华东师范大学生命科学学院上海200062

提出了一种显示原生动物纤毛和细胞骨架结构的免疫荧光标记方法,并总结了实验操作过程中的注意点。

关键词：原生动物免疫荧光标记实验操作

双重免疫荧光标记及激光共聚焦显微镜技术对不稳定膀胱逼尿肌间隙连接蛋白43的定量和定位实验

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中国临床康复 2005年第26期9卷 155-157,i0007页

作者：周德荣章振保汕头大学医学院第二附属医院泌尿外科广东省汕头市515041

目的:建立一种应用荧光免疫组织化学双重标记技术和激光扫描共聚焦显微镜观察不稳定膀胱逼尿肌连接蛋白43表达和分布模式的方法。方法:实验于2003-09/2004-06在汕头大学医学院病理实验室完成。选择健康清洁级wistar大鼠50只,随机分成两... 详细信息

目的:建立一种应用荧光免疫组织化学双重标记技术和激光扫描共聚焦显微镜观察不稳定膀胱逼尿肌连接蛋白43表达和分布模式的方法。方法:实验于2003-09/2004-06在汕头大学医学院病理实验室完成。选择健康清洁级wistar大鼠50只,随机分成两组,对照组10只,不稳定膀胱组40只。建立膀胱出口梗阻模型之后行充盈性膀胱测压,确定不稳定膀胱组13只。对照组只行尿道分离术而不作结扎术。麻醉未醒即处死大鼠,取下膀胱分离出逼尿肌组织。①荧光免疫组织化学双重标记:应用罗丹明麦芽凝集素标记逼尿肌肌细胞膜,异硫氰酸荧光素素标记间隙连接蛋白43。②激光共聚焦显微镜技术:使用ACAS/Ultima312型激光共聚焦显微镜的检测器1和检测器2同时分别检测连接蛋白43和细胞膜(当只开通检测通道1时,仅显示代表连接蛋白43的绿色小短杆状或小点状荧光斑;当仅开通检测通道2时,仅显示被染成红色的细胞膜,清楚地显示了细胞的外形轮廓,胞浆及胞核则不显示;当两个通道同时开通时,绿色的连接蛋白43与红色细胞膜重叠后变成黄色)。主要参数如下:小孔孔径225μm,X轴扫描点数390,Y轴扫描点数390,扫描步径0.6μm,镜扫描速度10mm/s,扫描强度85%,激光强度360mW,每点采样次数30,物镜40倍,检测器1(最适波长488nm)灵敏度62%,检测器2(最适波长514nm),灵敏度58%。③激光共聚焦显微镜图像分析法:应用ImageAnalysis程序进行图像分析。以连接蛋白43的像素值占总像素值的百分比值作为连接蛋白43的像素密度,其大小代表连接蛋白43量的大小;以连接蛋白43荧光斑面积的大小反映连接蛋白43量的大小。结果:不稳定膀胱组中出现不稳定膀胱的13只和对照组10只进入结果分析。①两组大鼠逼尿肌连接蛋白43的像素密度和荧光斑面积比较:不稳定膀胱组连接蛋白43象素密度值较对照组象素密度值明显增多(3.45±1.58,0.85±0.44,t=5.037,P荧光斑面积较对照组显著增大犤(19.92±8.61)μm2,(11.46±2.55)μm2,t=2.995,P标记的大鼠逼尿肌连接蛋白43荧光图像:对照组逼尿肌肌束细胞平行排列,分布均匀,连接蛋白43表达量极少。不稳定膀胱组细胞大小不一,形状多样,排列紊乱,连接蛋白43数量较对照组明显增多,表现在密度增大,荧光斑面积增大,连接蛋白43的表达主要出现在细胞与细胞连接处。结论:采用双重标记的荧光免疫组织化学和激光共聚焦显微镜技术,抗连接蛋白43单克隆抗体特异地与间隙连接蛋白43结合,在组织原位上准确地标记间隙连接,同时显示细胞膜,既能对其进行定量分析,又能同时对其进行定位。

关键词：膀胱疾病缝隙接合部连接蛋白43 荧光免疫技术激光共聚焦显微镜技术间隙连接蛋白43 不稳定膀胱膀胱逼尿肌免疫荧光标记病理实验室

量子点-CK19抗体荧光探针对乳腺癌细胞免疫荧光标记及毒性研究

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中华肿瘤防治杂志 2014年第2期21卷 81-85页

作者：郑少鸾王本忠朱立新许小亮尹乃强黄乾鹏安徽医科大学第一附属医院乳腺外科安徽合肥230022 安徽医科大学第一附属医院普外科安徽合肥230022 中国科学技术大学物理系安徽合肥230026

目的:制备量子点-细胞角蛋白19抗体(cytokeratin,CK19)荧光探针,利用其光学性质和特异性识别能力对乳腺癌细胞株MDA-MB-231进行荧光标记,并探讨其细胞毒性。方法:用水热法合成CdTeS量子点,并将其与CK19抗体连接。通过直接免疫荧光法,利... 详细信息

目的:制备量子点-细胞角蛋白19抗体(cytokeratin,CK19)荧光探针,利用其光学性质和特异性识别能力对乳腺癌细胞株MDA-MB-231进行荧光标记,并探讨其细胞毒性。方法:用水热法合成CdTeS量子点,并将其与CK19抗体连接。通过直接免疫荧光法,利用合成的量子点-CK19抗体探针对乳腺癌细胞株MDA-MB-231进行荧光标记,并观察探针在细胞内的分布。分别采用流式细胞术和MTT法,检测探针作用后细胞凋亡情况和增殖变化。结果:量子点-CK19抗体探针能与抗原特异性结合,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜示,该探针能有效对乳腺癌细胞株MDA-MB-231进行特异性荧光标记,荧光主要位于细胞质和细胞膜,荧光清晰明亮,持续时间长。与对照组相比,量子点-CK19抗体探针浓度≤2nmol/L时,对照组乳腺癌细胞株MDA-MB-231的凋亡率为(3.763±0.130)%,0.25nmol/L组为(3.760±0.161)%,0.5nmol/L组为(3.827±0.107)%,1nmol/L组为(3.947±0.081)%,2nmol/L组为(4.013±0.055)%。单因素方差分析结果显示,各剂量组与对照组比较,差异无统计学意义,F=3.023,P=0.071。量子点-CK19抗体探针可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖,F=133.407,P荧光探针,该探针能有效对乳腺癌细胞株MDA-MB-231进行荧光标记,且具有良好的光学性质和较低的细胞毒性。

关键词：量子点细胞角蛋白19 乳腺癌细胞免疫荧光标记细胞毒性

水溶性CdTe量子点-广谱抗细胞角蛋白单克隆抗体荧光探针的制备及其对肝癌细胞HepG2的免疫荧光标记

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中国老年学杂志 2010年第5期30卷 628-631页

作者：隋玉杰王茜王雅丽吴枚郑锦花杜珍武张玉成张桂珍吉林大学第二医院中心实验室吉林大学中日联谊医院肾病内科吉林大学中日联谊医院中心实验室吉林长春130033

目的制备水溶性CdTe量子点-广谱抗细胞角蛋白单克隆抗体(QDs-MAb)荧光探针,并对其特异免疫性识别能力和荧光稳定性进行检测。方法在EDC偶联剂的作用下,将水溶性CdTe量子点与广谱细胞角蛋白单克隆抗体(PanCK)进行了连接;对肝癌细胞HepG2... 详细信息

目的制备水溶性CdTe量子点-广谱抗细胞角蛋白单克隆抗体(QDs-MAb)荧光探针,并对其特异免疫性识别能力和荧光稳定性进行检测。方法在EDC偶联剂的作用下,将水溶性CdTe量子点与广谱细胞角蛋白单克隆抗体(PanCK)进行了连接;对肝癌细胞HepG2采用免疫细胞化学法和QDs-MAb单抗荧光探针直接免疫荧光标记法观察比较PanCK蛋白在细胞内的分布;将量子点与传统的荧光染料FITC的荧光强度和荧光稳定性进行了比较。结果QDs-MAb单抗荧光探针对HepG2细胞内的PanCK分子具有特异性的识别能力;与FITC相比,QDs-MAb荧光探针荧光度更强,光化学稳定性更好,激发光连续照射30min及室温放置3d后均未见明显淬灭。结论本实验成功制备了QDs-MAb荧光探针,为半导体量子点用于上皮来源的肿瘤细胞内PanCK分子的相关检测提供了科学依据。

关键词：量子点角蛋白免疫荧光标记荧光稳定性

小麦叶片原生质体微管骨架的免疫荧光标记及其影响因素

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河北农业大学学报 2002年第3期25卷 23-27页

作者：党磊王冬梅刘娟王智炘河北农业大学生命科学学院河北保定071001

以小麦叶肉细胞原生质体为材料 ,利用免疫荧光标记并辅以共聚焦激光扫描显微镜检术 (Confocalla serscanningmicroscopy ,CLSM)观察 ,对含有叶绿体较多的小麦叶肉细胞微管骨架的标记方法及其影响因素进行了探索。结果表明 ,来自未完全... 详细信息

以小麦叶肉细胞原生质体为材料 ,利用免疫荧光标记并辅以共聚焦激光扫描显微镜检术 (Confocalla serscanningmicroscopy ,CLSM)观察 ,对含有叶绿体较多的小麦叶肉细胞微管骨架的标记方法及其影响因素进行了探索。结果表明 ,来自未完全展开叶片的原生质体中 ,微管的数量多且骨架的排列方式较复杂 ,而从完全展开的叶片获得的原生质体中 ,微管数量很少。实验中发现 ,外加Ca2 + 离子浓度的增加 ,使微管的稳定性降低 ,并确定了导致微管解聚的Ca2 + 浓度。

关键词：小麦叶片原生质体微管骨架免疫荧光标记共聚焦激光扫描显微镜检

对虾白斑综合症病毒P9蛋白转录水平的微阵列分析及其免疫荧光标记

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厦门大学学报（自然科学版） 2006年第2期45卷 268-271页

作者：吴常嵩谢希贤杨丰厦门大学生命科学学院福建厦门361005 国家海洋局第三海洋研究所福建厦门361005

从构建的对虾白斑综合症病毒cDNA文库中,我们筛选到一个拷贝数最高,编码82个氨基酸的基因(命名为p9,wsv230).该基因被克隆到pGEX-2T载体中进行GST融合蛋白的原核表达,纯化的融合蛋白GST-P9用于制备特异的多克隆抗体.利用微阵列技术和免... 详细信息

从构建的对虾白斑综合症病毒cDNA文库中,我们筛选到一个拷贝数最高,编码82个氨基酸的基因(命名为p9,wsv230).该基因被克隆到pGEX-2T载体中进行GST融合蛋白的原核表达,纯化的融合蛋白GST-P9用于制备特异的多克隆抗体.利用微阵列技术和免疫荧光标记技术,对该蛋白的转录水平及其在感染细胞内的分布进行了初步研究,表明该基因为高丰度表达,推测是对虾白斑综合症病毒的一个重要基因.

关键词：对虾白斑综合症病毒 p9基因微阵列免疫荧光标记

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CD45新型免疫荧光标记与检测方法研究

中国生物工程杂志 2005年第2期25卷 73-74,77页

作者：袁亚莉许金生邓健唐国华许金华南华大学衡阳421001 衡阳师范学院衡阳421008

使用经生物修饰后的荧光纳米颗粒,探索了白细胞共同抗原CD45的新型荧光标记与检测方法。将联吡啶钌配合物[三(2,2-联吡啶)氯化钌,六水]为核,二氧化硅为外壳的荧光纳米颗粒用鼠抗人CD45Pur进行生物修饰后,对人体白细胞进行荧光标记,通过... 详细信息

使用经生物修饰后的荧光纳米颗粒,探索了白细胞共同抗原CD45的新型荧光标记与检测方法。将联吡啶钌配合物[三(2,2-联吡啶)氯化钌,六水]为核,二氧化硅为外壳的荧光纳米颗粒用鼠抗人CD45Pur进行生物修饰后,对人体白细胞进行荧光标记,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测标记样品的细胞数目和荧光强度,结果表明,该新型荧光标记方法的灵敏度高,光学稳定性好,可准确有效地识别人体白细胞。

关键词： CD45 白细胞人体流式细胞仪检测免疫荧光标记抗原检测方法新型氯化联吡啶

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细胞自动免疫荧光标记微流控技术及装置研究

细胞自动免疫荧光标记微流控技术及装置研究

作者：侯良生大连海事大学

学位级别：硕士

对于长期太空飞行和星际航行来说,空间辐射损伤的在轨实时检测和评估具有重要意义。通过实施现场监测辐射损伤标志物进行评估是重要的前沿领域。目前国际上主攻微流控技术在极端环境下的应用。然而,在空间微重力环境下,该技术将面临消... 详细信息

对于长期太空飞行和星际航行来说,空间辐射损伤的在轨实时检测和评估具有重要意义。通过实施现场监测辐射损伤标志物进行评估是重要的前沿领域。目前国际上主攻微流控技术在极端环境下的应用。然而,在空间微重力环境下,该技术将面临消除微重力影响、降低功耗,以及提高检测自动化程度和特异性等关键问题。本课题研究了基于永久磁铁带动免疫磁珠的微流控芯片反应体系,通过攻克免疫磁珠高效混合技术、微流控芯片免疫荧光标记技术和自动控制技术,开发了一种细胞自动免疫荧光标记微流控技术及便携式装置,可实现免疫磁珠与细胞高效混合及细胞自动免疫荧光标记。主要研究工作及相关结果如下:1)提出了基于微流控芯片的免疫磁珠与细胞三维混合技术,研制了相关装置并考察了其基本性能。2)研制了细胞自动免疫荧光标记微流控装置,包括免疫磁珠三维混合模块和免疫磁珠自动控制模块,采用单片机控制的步进电机实现高效、快速的免疫磁珠混合及自动化免疫磁珠控制;实现室温下40 min内自动完成淋巴细胞的γ-H2AX免疫荧光标记功能。3)研制了细胞免疫荧光标记微流控芯片,该芯片包括6个椭圆形液池以及相邻液池之间的间隔池,完成免疫荧光标记的细胞数量满足监测需求。4)通过不同剂量UVC辐射CD4 T淋巴细胞,采用该微流控装置实现γ-H2AX的自动免疫荧光标记并考察了相关参数,特异性荧光标记的效果采用流式细胞仪进行检测,结果满足辐射剂量-效应关系,初步验证了该装置的实用性。本工作提出的细胞自动免疫荧光标记微流控技术,以免疫磁珠作为样品高效混合及操控的载体,以微流控芯片及便携式磁场控制装置作为自动免疫荧光标记的操作平台。该装置具有自动化、便携化、低成本、易进一步集成等优点。整个免疫荧光标记过程可以在室温条件下进行,全程快速、高效,无需专业人员操作,且适合微重力环境下的操作,为进一步构建实时现场检测系统并实现空间在轨应用提供了原理样机。

关键词：空间辐射微重力免疫荧光标记微流控单片机