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免疫荧光双标记技术检测胎盘HBsAg-抗-HBs复合物

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第四军医大学学报 2001年第12期22卷 1125-1128页

作者：王歆徐德忠刘蓬勃李玉松王素萍第四军医大学预防医学系流行病学教研室陕西西安710033 第四军医大学基础部病理学教研室陕西西安710033

目的　探讨乙肝病毒 (HBV)以何种形式感染胎盘滋养层细胞 .方法　通过免疫荧光双标记技术检测 12例血清HBs Ag阳性母亲的胎盘滋养层细胞 HBs Ag-抗 - HBs复合物 .结果　血清学 HBs Ag阳性母亲胎盘滋养层细胞中存在 HB-s Ag-抗 - HBs复合... 详细信息

目的　探讨乙肝病毒 (HBV)以何种形式感染胎盘滋养层细胞 .方法　通过免疫荧光双标记技术检测 12例血清HBs Ag阳性母亲的胎盘滋养层细胞 HBs Ag-抗 - HBs复合物 .结果　血清学 HBs Ag阳性母亲胎盘滋养层细胞中存在 HB-s Ag-抗 - HBs复合物 .结论　提示 HBV可能通过 HBs Ag与抗 - HBs结合成复合物的方式进入胞内 ,导致胎盘屏障的第一层细胞受到

关键词：乙型肝炎病毒胎盘抗原抗体复合物免疫荧光双标记 HBsAg-抗-HBs复合物

水通道蛋白-4表达变化与急性高眼压视网膜损伤的相关性研究

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解剖学报 2008年第5期39卷 677-682页

作者：陈海孙善全汪克建杨美谭戈刘超重庆医科大学神经生物学研究室重庆400016

目的观察不同高眼压作用下,水通道蛋白-4(AQP4)及其mRNA在大鼠视网膜内的表达变化,以探讨AQP4与眼压异常性疾病的关系。方法采用前房加压灌注法,分别制作75cm、125cm和150cm水柱不同压力急性高眼压大鼠模型;通过HE和尼氏染色了解视网膜... 详细信息

目的观察不同高眼压作用下,水通道蛋白-4(AQP4)及其mRNA在大鼠视网膜内的表达变化,以探讨AQP4与眼压异常性疾病的关系。方法采用前房加压灌注法,分别制作75cm、125cm和150cm水柱不同压力急性高眼压大鼠模型;通过HE和尼氏染色了解视网膜病理改变和神经节细胞数目变化;应用免疫组织化学、免疫荧光双标、原位杂交以及RT-PCR等技术检测不同高眼压作用下,AQP4及其mRNA在视网膜内的表达变化。结果与对照组相比,各实验组大鼠视网膜呈不同程度水肿样改变,其内层厚度增加,神经节细胞数目明显减少;AQP4及其mRNA在视网膜内的表达明显增强,其表达上调水平与眼压升高程度呈正相关,并与视网膜内层厚度增加以及节细胞数目减少相关(P<0.01)。结论急性高眼压作用下,大鼠视网膜内AQP4及其mRNA的表达明显增强,呈压力依赖性,其异常高表达可能与急性高眼压的病理损伤过程以及眼内水、电解质代谢失衡有关。

关键词：急性高眼压视网膜 Müller细胞水通道蛋白-4 免疫荧光双标记大鼠

弥散性神经内分泌细胞标志物在妊娠期山羊黄体细胞中的共存

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2009年第1期37卷 22-28页

作者：陈树林段会娟张宝雷治海蒋田园林磊李兆才马永生西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

【目的】探讨S-100蛋白、5-羟色胺（5-HT）、神经特异性烯醇化酶（NSE）和突触素（SYP）4种弥散性神经内分泌细胞标志物在黄体细胞中的共存情况。【方法】采取妊娠中期（50～70d）奶山羊卵巢，常规方法制备石蜡切片，采用免疫荧光双标... 详细信息

【目的】探讨S-100蛋白、5-羟色胺（5-HT）、神经特异性烯醇化酶（NSE）和突触素（SYP）4种弥散性神经内分泌细胞标志物在黄体细胞中的共存情况。【方法】采取妊娠中期（50～70d）奶山羊卵巢，常规方法制备石蜡切片，采用免疫荧光双标记法结合激光扫描共聚焦显微镜观察，对4种弥散性神经内分泌细胞标志物的分布进行了检测。【结果】S-100蛋白与SYP共存于同一黄体细胞中，表达呈强阳性，阳性细胞主要分布在黄体周边，占总阳性细胞的56．57％。S-100蛋白与5-HT、5HT与SYP、NSE与SYP、5-HT与NSE、S-100蛋白与NSE共存的细胞呈弱阳性，分别占总阳性细胞的18．42％，15．67％，4．31％，4．30％和0．73％，均匀分布于整个黄体中。【结论】S-100蛋白、5HT、NSE和SYP在山羊黄体细胞中有两两共存现象。

关键词：神经内分泌标志物免疫荧光双标记激光扫描共聚焦显微镜黄体山羊

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热休克蛋白在涎腺肿瘤中的表达

基础医学与临床 2009年第9期29卷 948-954页

作者：王桂兰顾晓林陈莉鄂群曹斌南通大学医学院病理教研室江苏南通226001 南通大学医学院第二附属医院口腔科江苏南通226001 南通大学医学院附属海安人民医院病理科江苏南通226000

目的研究热休克蛋白(HSPs)在涎腺良性、恶性肿瘤中的表达特征,探讨其对涎腺肿瘤发生发展的影响及意义。方法用免疫组化(S-P)法和免疫荧光双标记激光扫描共聚焦显微镜法检测41例良性和17例恶性肿瘤中HSPs的表达。采用stata7.0卡方检验和s... 详细信息

目的研究热休克蛋白(HSPs)在涎腺良性、恶性肿瘤中的表达特征,探讨其对涎腺肿瘤发生发展的影响及意义。方法用免疫组化(S-P)法和免疫荧光双标记激光扫描共聚焦显微镜法检测41例良性和17例恶性肿瘤中HSPs的表达。采用stata7.0卡方检验和spearman相关分析。结果(1)5种HSPs在良、恶性肿瘤中均明显表达,且良性混合瘤的HSP84(β)和HSP86(α)的表达率均显著高于腺瘤和腺淋巴瘤(P双阳性表达率高达100%(Fisher s exactP<0.05)。结论(1)HSPs共同参与了涎腺肿瘤的发生,但存在表达种类和率的差异。(2)HSP27表达减弱可能是涎腺肿瘤分化降低的标志。(3)HSP70、HSP90,尤其HSP86(90α)可能通过致瘤顾客蛋白的持续活化促使恶性肿瘤发生发展,以HSP86(90α)为主的Hsp90可能是涎腺恶性肿瘤治疗的靶点。

关键词：涎腺肿瘤热休克蛋白免疫组化免疫荧光双标记激光扫描共聚焦显微镜

延髓头端腹外侧区血管紧张素Ⅱ对脊髓投射神经元氨基酸递质释放的调节

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生理学报 2001年第5期53卷 385-390页

作者：胡联朱大年王强孙中杰姚泰复旦大学基础医学院生理学教研室

用脊髓 (T8)中间外侧柱 (IML)微透析方法结合高效液相色谱 (HPLC)技术 ,研究延髓头端腹外侧区(RVLM)微量注射血管紧张素Ⅱ (ANGⅡ ,10 0pmol,n =11)后脊髓IML氨基酸递质释放的变化。在RVLM区微量注射ANGⅡ ( 10 0pmol,n =11) ,能显著增... 详细信息

用脊髓 (T8)中间外侧柱 (IML)微透析方法结合高效液相色谱 (HPLC)技术 ,研究延髓头端腹外侧区(RVLM)微量注射血管紧张素Ⅱ (ANGⅡ ,10 0pmol,n =11)后脊髓IML氨基酸递质释放的变化。在RVLM区微量注射ANGⅡ ( 10 0pmol,n =11) ,能显著增加 (P 免疫荧光双标记结合共聚焦显微镜观察到RVLM内 62 %～ 91%的谷氨酸能神经元呈AT1受体免疫阳性。此结果提示ANGⅡ诱发的脊髓内谷氨酸释放可能来源于RVLM内AT1受体免疫阳性的谷氨酸能脊髓投射神经元。

关键词：延髓头端腹外侧区脊髓中间外侧柱血管紧张素Ⅱ 微透析免疫荧光双标记氨基酸递质心血管运动神经元

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红藻氨酸诱导内质网应激模型的途径

中国组织工程研究 2014年第36期18卷 5861-5867页

作者：袁磊张海霞钱诗蕾徐斌龚济钦刘湘华唐园禹华旭长沙医学院第一临床学院湖南省长沙市410219 长沙医学院第一附属医院湖南省长沙市410219 长沙医学院湖南省重点建设学科湖南省长沙市410219

背景:前期研究表明,海马内注射红藻氨酸海可诱发兴奋性红藻氨酸受体KA1亚受体在海马神经元的表达明显上调,内质网应激标志物磷酸化真核翻译起始因子2α表达增加并伴随细胞死亡。目的:探讨红藻氨酸海马内注射后内质网应激发生的机制。方... 详细信息

背景:前期研究表明,海马内注射红藻氨酸海可诱发兴奋性红藻氨酸受体KA1亚受体在海马神经元的表达明显上调,内质网应激标志物磷酸化真核翻译起始因子2α表达增加并伴随细胞死亡。目的:探讨红藻氨酸海马内注射后内质网应激发生的机制。方法:取昆明小鼠32只,将0.15 nmol红藻氨酸注入海马CA1区域,注射时间为60 s。分别于红藻氨酸注射后第1,2,3,4,5,6,8,12小时灌注取脑,灌注取脑前进行Bederson体征评分,然后行全脑切片FJB染色分析与免疫荧光双标记观察。结果与结论:1红藻氨酸注射后第3,4,5,6,8小时,Bederson体征评分表明中枢神经功能出现明显损伤,FJB染色示小鼠海马内神经元死亡明显;注射后第1,2,12小时,Bederson体征评分中枢神经功能未见明显损伤,FJB染色小鼠海马神经元死亡结果不明显。2根据FJB结果,取第3,8小时的脑片做免疫组化。海马内注射红藻氨酸后导致海马神经元中KA1和磷酸化真核翻译起始因子2α在相同的时间点表达明显上调,将KA1与磷酸化真核翻译起始因子2α图片结果进行叠加处理,两者完全重合,表明KA1的表达和内质网应激发生在同一个神经细胞内。结果表明红藻氨酸首先诱导了兴奋性膜上受体KA1表达的上调,其KA1的表达上调可能引起细胞内质网功能紊乱,导致内质网应激反应,并进一步促进了神经细胞的死亡。

关键词：实验动物组织构建修复重建移植内质网应激糖尿病脑病免疫荧光双标记 KA1亚受体 Adobe Photoshop CS5 国家自然科学基金

脐血间充质干细胞移植对大鼠局灶性脑缺血的影响

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中华实验外科杂志 2005年第4期22卷 456-459,i002页

作者：刘海英张庆俊赵宗茂李洪钧孙国柱韩忠朝河北医科大学第二医院神经外科中国医学科学院石家庄050000 中国协和医科大学血液学研究所

目的　从人脐血中分离纯化间充质干细胞(MSC) ,观察其移植对大鼠大脑中动脉栓塞后神经功能恢复的影响及细胞的存活、迁移向神经细胞分化的情况。方法　雄性SD大鼠45只,用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,大鼠随机分为3组:MSC移... 详细信息

目的　从人脐血中分离纯化间充质干细胞(MSC) ,观察其移植对大鼠大脑中动脉栓塞后神经功能恢复的影响及细胞的存活、迁移向神经细胞分化的情况。方法　雄性SD大鼠45只,用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,大鼠随机分为3组:MSC移植组、单核细胞组和生理盐水组。移植后1、7、14、2 1、2 8d采用改良神经功能损害评分(mNSS)观察大鼠神经功能恢复情况,应用免疫组织化学和免疫荧光双标记技术检测5溴 2脱氧尿核苷(BrdU )标记的MSC细胞的存活、迁移及其胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性核蛋白(NeuN)的表达。结果　人脐血MSC细胞移植可显著提高大鼠局灶性脑缺血后神经功能的恢复(P <0 .0 5 )。移植的MSC细胞可在大鼠脑组织中存活,并向缺血区域迁移,11.67%MSC细胞表达GFAP ,3 .72 %MSC细胞表达NeuN。结论　人脐血中含有MSC细胞并可促进局灶性脑缺血大鼠的神经功能恢复,移植细胞可在大鼠脑缺血区域中存活。

关键词：大鼠局灶性脑缺血间充质干细胞移植胶质纤维酸性蛋白神经功能恢复 MSC细胞大脑中动脉栓塞免疫荧光双标记神经细胞分化神经功能损害免疫组织化学神经元特异性星形胶质细胞缺血区域细胞表达生理盐水组大鼠脑组织神经元分化人脐血分离纯化 SD大鼠

中药肝豆汤含药血清对Wilson病模型TX小鼠肝细胞内ATP7b蛋白亚细胞定位和功能表达的影响

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中华中医药杂志 2017年第1期32卷 250-253页

作者：徐陈陈董健健程楠韩咏竹王训安徽中医药大学研究生部合肥230038 安徽中医药大学神经病学研究所附属医院神经内科合肥230061

目的:观察肝豆汤调控TX小鼠肝细胞内铜转运通路的分子靶点,研究其调控机制。方法:免疫荧光双标记经激光共聚焦显微镜观察由含肝豆汤兔血清孵育后TX小鼠肝细胞内ATP7b蛋白的亚细胞定位变化。结果:ATP7b蛋白在DL小鼠肝细胞内定位于反面高... 详细信息

目的:观察肝豆汤调控TX小鼠肝细胞内铜转运通路的分子靶点,研究其调控机制。方法:免疫荧光双标记经激光共聚焦显微镜观察由含肝豆汤兔血清孵育后TX小鼠肝细胞内ATP7b蛋白的亚细胞定位变化。结果:ATP7b蛋白在DL小鼠肝细胞内定位于反面高尔基体管网状结构(TGN),位于高铜环境中则转运至顶端膜区,去除高铜环境则重新定位于TGN;ATP7b蛋白在TX小鼠肝细胞内不能定位于TGN及顶端膜区域,去除高铜环境也不能促使ATP7b蛋白重新定位于TGN。中药肝豆汤可促使ATP7b蛋白逐步重新定位于TGN。结论:肝豆汤可以通过诱导ATP7b蛋白重新定位于TGN,进而发挥细胞内排铜作用,改善Wilson病的临床症状。

关键词：肝豆汤 TX小鼠 Wilson病 ATP7b蛋白反面高尔基体管网状结构免疫荧光双标记

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叶酸对胎鼠神经干细胞体外增殖的影响

营养学报 2008年第2期30卷 144-147,152页

作者：张绪梅黄国伟姬长珍张文治苏心天津医科大学公共卫生学院天津300070 天津市神经外科研究所天津300060

目的探讨叶酸对体外培养的胚胎大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响。方法本研究采用显微解剖、机械吹打、无血清悬浮培养方法分离培养鼠胚大脑NSCs,用巢蛋白(nestin)免疫荧光染色对其进行鉴定,5'-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)掺... 详细信息

目的探讨叶酸对体外培养的胚胎大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响。方法本研究采用显微解剖、机械吹打、无血清悬浮培养方法分离培养鼠胚大脑NSCs,用巢蛋白(nestin)免疫荧光染色对其进行鉴定,5'-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)掺入法检测细胞增殖状态;设立正常对照组,叶酸低、高剂量(培养液中添加叶酸4.0 40 mg/L)和叶酸缺乏组(培养液中添加叶酸拮抗剂甲氨蝶呤0.4mg/L);通过nestin+BrdU免疫荧光双标记和绘制细胞生长曲线(MTT法)检测叶酸对细胞增殖状态的影响。结果无血清培养液中可形成大量呈nestin抗原阳性细胞组成的神经球,BrdU免疫标记证实培养的NSCs具有增殖能力。免疫荧光双标记和MTT结果显示,两个叶酸干预组NSCs增殖能力较对照组显著增强。结论体外培养的胚胎大鼠NSCs具有增殖和自我更新的能力;叶酸可以在一定程度上增强NSCs的增殖能力,促进神经干细胞的生长。

关键词：叶酸神经干细胞 nestin BrdU 免疫荧光双标记