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脂肪组织来源的基质细胞向神经元样细胞分化

四川大学学报（医学版） 2003年第3期34卷 381-384页

作者：杨立业郑佳坤刘相名惠国桢费俭郭礼和广东省潮州市中心医院神经外科潮州521021 苏州大学附属第一医院神经外科中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所

目的　研究脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化的可能性 ,为神经移植探索新的细胞来源。方法　采用β-巯基乙醇诱导脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化 ,以免疫细胞化学方法对分化的和未分化的细胞进行鉴定。结果　从成年大鼠的... 详细信息

目的　研究脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化的可能性 ,为神经移植探索新的细胞来源。方法　采用β-巯基乙醇诱导脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化 ,以免疫细胞化学方法对分化的和未分化的细胞进行鉴定。结果　从成年大鼠的脂肪组织中分离出基质细胞 ,在体外生长形态类似成纤维细胞 ,可以维持在未分化状态稳定增殖 ,体外扩增可超过 10多代。β-巯基乙醇可诱导这种细胞向神经元样细胞分化 ,分化的细胞早期表达巢蛋白 ,后期则表达神经元的标志物——神经元特异性烯醇化酶和神经微丝 ,在最适合的诱导条件下约 60 %～85 %的细胞表达这两种神经元的标志物。

关键词：脂肪组织来源基质细胞神经元样细胞分化 β-巯基乙醇免疫细胞化学方法

人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞及运动神经元生存蛋白表达的研究

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中华医学杂志 2005年第16期85卷 1125-1128页

作者：杨晓苏吴海香肖波中南大学湘雅医院神经内科长沙410008

目的　定向诱导人骨髓间质干细胞(hMSC)分化为神经元样细胞,并检测诱导前后细胞的运动神经元生存(SMN)基因mRNA及蛋白质的表达。方法　分离和纯化hMSC;在体外用碱性成纤维细胞生长子预诱导hMSC,再用二甲基亚砜和丁化羟基苯甲醚诱导hMSC... 详细信息

目的　定向诱导人骨髓间质干细胞(hMSC)分化为神经元样细胞,并检测诱导前后细胞的运动神经元生存(SMN)基因mRNA及蛋白质的表达。方法　分离和纯化hMSC;在体外用碱性成纤维细胞生长子预诱导hMSC,再用二甲基亚砜和丁化羟基苯甲醚诱导hMSC分化为神经元样细胞;用免疫细胞化学方法鉴定诱导前后的细胞是否表达神经元特异性标志物神经元稀醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)以及SMN蛋白;用RT- PCR检测诱导前hMSC及诱导后神经元样细胞SMN基因mRNA的表达。结果　hMSC诱导3h后,大多数细胞转变为类似于神经元的形态,有长的突起,相互之间连接呈网状。NSE、NF进行鉴定,结果显示NSE、NF呈阳性。诱导前的hMSC及诱导后的神经元样细胞均可见SMN基因mRNA表达,但诱导后表达增加,差异有统计学意义(P细胞SMN蛋白表达为阳性。结论　hMSC能分化为神经元样细胞,并表达神经元的特异性标志物。hMSC分化的神经元样细胞既能高表达SMN基因的mRNA,也表达SMN蛋白。

关键词：神经元样细胞运动神经元生存蛋白间质干细胞分化表达的研究人骨髓间质干细胞免疫细胞化学方法基因mRNA表达特异性标志物碱性成纤维细胞 SMN蛋白分离和纯化二甲基亚砜神经丝蛋白 PCR检测 SMN基因定向诱导蛋白表达

炎性痛诱导海马神经元形态学变化及PKC的表达上调(英文)

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神经科学通报 2005年第2期21卷 129-134页

作者：杨丽平李清君中国人民解放军第263医院神经内科北京101149 河北医科大学基础医学研究所病理生理研究室河北石家庄050017

目的　观察福尔马林诱导炎性痛过程中海马蛋白激酶C的表达和神经元形态学变化,并进一步明确海马与疼痛的关系。方法　SD大鼠被随机分为对照组和实验组,实验组又按照注射福尔马林后炎性痛发生时间分为1h, 3h, 12h, 1d, 3d和7d组。应用组... 详细信息

目的　观察福尔马林诱导炎性痛过程中海马蛋白激酶C的表达和神经元形态学变化,并进一步明确海马与疼痛的关系。方法　SD大鼠被随机分为对照组和实验组,实验组又按照注射福尔马林后炎性痛发生时间分为1h, 3h, 12h, 1d, 3d和7d组。应用组织化学和免疫细胞化学方法观察炎性痛过程中海马神经元形态学变化和PKC活性的改变。结果　注射福尔马林1d后海马PKC免疫反应明显上调,PKC被激活并由细胞核转移到膜结构;而“黑神经元”于注射福尔马林后3d最明显,于第7天有所恢复。PKC的活性与神经元的形态学变化均以海马CA3区明显。结论　实验结果表明海马参与了对伤害性信息的调节,而且PKC与炎性痛过程中神经元的损伤有密切关系。

关键词：形态学变化海马神经元炎性痛表达上调免疫细胞化学方法福尔马林海马CA3区蛋白激酶C PKC活性伤害性信息 SD大鼠发生时间组织化学免疫反应密切关系实验组对照组注射膜结构核转移

吲哚美辛诱导肝癌细胞凋亡及与环氧合酶-2和凋亡调控基因表达关系

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中华消化杂志 2004年第10期24卷 604-607页

作者：谢勇吕农华周小江黄德强陈江王崇文江西医学院第一附属医院消化研究所南昌330006

目的探讨非甾体类抗炎药(MSAIDs)诱导肝癌细胞株SMMC7721细胞凋亡的作用及可能机制,为其应用于肝细胞癌的化学预防和治疗提供实验和理论依据。方法采用TUNEL法和免疫细胞化学方法研究了不同浓度吲哚美辛对肝癌细胞株SMMC7712的诱导凋亡... 详细信息

目的探讨非甾体类抗炎药(MSAIDs)诱导肝癌细胞株SMMC7721细胞凋亡的作用及可能机制,为其应用于肝细胞癌的化学预防和治疗提供实验和理论依据。方法采用TUNEL法和免疫细胞化学方法研究了不同浓度吲哚美辛对肝癌细胞株SMMC7712的诱导凋亡作用,及其对环氧合酶(COX)2和凋亡相关基因p53、p27kipl、Cmyc蛋白和Fas抗原表达的影响。结果①对照组、100、200、400、600和800μmol/L吲哚美辛组肝癌细胞的细胞凋亡指数分别为(2.4±1.4)%、(4.2±1.5)%、(8.0±3.2)%、(14.3±5.1)%、(14.9±4.3)%和(19.0±6.1)%(P0.05)。结论吲哚美辛可诱导肝癌细胞凋亡,且与其?

关键词：吲哚美辛强阳性 p27kipl 对照组肝癌细胞凋亡诱导凋亡调控基因表达免疫细胞化学方法环氧合酶

人胎儿和新生儿脊髓和DRG内nNOS阳性神经元的表达和分布

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解剖学杂志 2004年第6期27卷 655-659页

作者：熊抗辉林爱华李金莲第四军医大学基础部解剖学教研室梁銶琚脑研中心西安710032 第四军医大学校直门诊部

目的 :观察 2 4～ 2 7w人胎儿和新生儿的脊髓和背根神经节 (DRG)内神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)阳性神经元的表达和分布。方法 :ABC免疫细胞化学方法。结果 :( 1 ) 2 4～ 2 7w人胎儿胸髓和腰 1～ 3节段的中间带外侧核和前角Ⅷ层和Ⅸ层... 详细信息

目的 :观察 2 4～ 2 7w人胎儿和新生儿的脊髓和背根神经节 (DRG)内神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)阳性神经元的表达和分布。方法 :ABC免疫细胞化学方法。结果 :( 1 ) 2 4～ 2 7w人胎儿胸髓和腰 1～ 3节段的中间带外侧核和前角Ⅷ层和Ⅸ层内可观察到nNOS阳性神经元。颈、胸、腰各段DRG内nNOS免疫阳性神经元占DRG细胞总数的 84%～ 88%。 ( 2 )新生儿脊髓和DRG内nNOS免疫阳性神经元的分布情况与上述胎儿相似。但DRG内nNOS免疫阳性神经元的体积有所增加 ,数量明显减少 ,约占DRG细胞总数的 70 %～ 73 %。结论 :人胎儿脊髓和DRG在发育的 2 4～ 2 7w至出生时 ,nNOS阳性神经元的表达在定位分布上无差异。

关键词： DRG 人胎儿脊髓 NOS阳性神经元免疫阳性神经元新生儿表达外侧核发育免疫细胞化学方法

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人膀胱癌P-糖蛋白结合肽的筛选

中华泌尿外科杂志 2003年第12期24卷 824-826页

作者：王祥卫郭应禄张立新杨唐俊那彦群叶刚杨清浩第三军医大学第二附属医院泌尿外科重庆400037 北京大学泌尿外科研究所军事医学科学院附属第三零七医院肿瘤分子生物室

目的　寻找人膀胱癌P 糖蛋白特异性结合肽。　方法　利用表达获得的P 糖蛋白胞外段融合蛋白为靶蛋白 ,采用酶联板法筛选噬菌体随机 12肽库 ,免疫细胞化学方法进行鉴定。　结果　从噬菌体随机肽库中筛选获得与P 糖蛋白特异性结合的噬菌... 详细信息

目的　寻找人膀胱癌P 糖蛋白特异性结合肽。　方法　利用表达获得的P 糖蛋白胞外段融合蛋白为靶蛋白 ,采用酶联板法筛选噬菌体随机 12肽库 ,免疫细胞化学方法进行鉴定。　结果　从噬菌体随机肽库中筛选获得与P 糖蛋白特异性结合的噬菌体阳性克隆 ,测序获得特异性结合肽序列。免疫细胞化学结果显示 :筛选得到的噬菌体阳性克隆可与耐药细胞BIU 87/ADM结合 ,而与敏感细胞BIU 87不结合。筛选获得的结合肽具有亲和力 ,表现出一定的肿瘤特异性。　结论　P 糖蛋白结合肽的筛选。

关键词：膀胱癌 P-糖蛋白结合肽筛选酶联板法筛选噬菌体免疫细胞化学方法

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挫伤脑组织对人胚神经干细胞影响的体外研究

中华神经外科杂志 2005年第4期21卷 204-207页

作者：张泽舜万虹邓民强历俊华张亚卓王忠诚广东省中医院神经外科广州510120 北京市神经外科研究所湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院脑外科

目的建立人胚胎来源的神经干细胞体外培养方法,初步研究挫伤脑组织提取液(TBITE)对人胚神经干细胞(HNSCs)存活、增殖能力和分化的影响。方法10周龄左右的胎儿大脑皮层细胞体外培养,神经干细胞增殖2～3代后,剔除生长因子,分别加入不同浓... 详细信息

目的建立人胚胎来源的神经干细胞体外培养方法,初步研究挫伤脑组织提取液(TBITE)对人胚神经干细胞(HNSCs)存活、增殖能力和分化的影响。方法10周龄左右的胎儿大脑皮层细胞体外培养,神经干细胞增殖2～3代后,剔除生长因子,分别加入不同浓度的脑外伤病人的挫伤脑组织提取液,培养2-3周后,免疫细胞化学方法鉴定细胞分化后的类型。用Laemmli凝胶电泳法分析培养液上清。结果成功获得以神经球形式生长的人胚神经干细胞,Nestin表达阳性;与空白对照相比,TBITE组中的神经干细胞有明显的增殖,并分化为神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞。随着TBITE含量的增加,星形胶质细胞的比例增加。结论脑外伤的局部微环境可促进神经干细胞增殖和分化。

关键词：人胚神经干细胞体外研究挫伤神经干细胞增殖免疫细胞化学方法 Nestin表达脑组织提取液星形胶质细胞体外培养方法细胞体外培养少突胶质细胞凝胶电泳法局部微环境增殖能力大脑皮层生长因子外伤病人不同浓度

大鼠谷氨酰胺合成酶RNA干扰表达载体的构建及其影响星形胶质细胞黏附的初探

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南京医科大学学报（自然科学版） 2010年第10期30卷 1397-1401页

作者：刘春兴张滨邹健华东疗养院检验科江苏无锡214065 南京医科大学附属无锡人民医院中心实验室江苏无锡214023

目的:构建并鉴定大鼠谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)RNA干扰表达载体,并检测GS对星形胶质细胞黏附的影响。方法:利用软件根据GS mRNA序列设计特异性siRNA序列,与GS真核表达载体GS-EGFP以LipofectamineTM2000试剂联合转染Hela-... 详细信息

目的:构建并鉴定大鼠谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)RNA干扰表达载体,并检测GS对星形胶质细胞黏附的影响。方法:利用软件根据GS mRNA序列设计特异性siRNA序列,与GS真核表达载体GS-EGFP以LipofectamineTM2000试剂联合转染Hela-G细胞,以GFP为指标鉴定其有效性;体外合成该siRNA插入序列,将其定向克隆至真核表达载体pRNATH1.l/Neo中并转染至大鼠星形胶质细胞中,以免疫细胞化学方法鉴定GS的表达;通过免疫化学法对actin特异性染色分析GSRNA干扰后对星形胶质细胞黏附的影响。结果:GS siRNA能有效抑制GS-EGFP在Hela-G细胞中的表达;DNA测序证实合成并被克隆入真核表达载体pRNAT HI.1/Neo的siRNA插入序列完全正确,GS siRNA表达载体可特异性抑制星形胶质细胞中GS的表达;GS RNA干扰导致细胞黏附力显著降低。结论:成功构建大鼠GS siRNA真核表达载体,初步表明GS影响星形胶质细胞的黏附,为后期研究GS在中枢神经系统损伤后反应性星形胶质细胞中的功能奠定了基础。

关键词：反应性星形胶质细胞谷氨酰胺合成酶真核表达载体 RNA干扰细胞黏附 siRNA表达载体大鼠免疫细胞化学方法

新生小鼠视神经少突胶质细胞系定向分化培养及鉴定

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江苏医药 2005年第7期31卷 527-529页

作者：卜曙阳黄强徐国旭周丽英苏州大学附属第二医院眼科 215004 江苏省神经科学研究所

目的探索P2期小鼠视神经少突胶质细胞的分化规律。方法经颅开眶法获取P2期小鼠管内段视神经2mm,组织块法培养,振荡法分离纯化,化学限定性培养基定向分化培养纯化,免疫细胞化学方法鉴定,流式细胞仪检测纯度。结果混合胶质细胞原代培养7d... 详细信息

目的探索P2期小鼠视神经少突胶质细胞的分化规律。方法经颅开眶法获取P2期小鼠管内段视神经2mm,组织块法培养,振荡法分离纯化,化学限定性培养基定向分化培养纯化,免疫细胞化学方法鉴定,流式细胞仪检测纯度。结果混合胶质细胞原代培养7d时细胞分层,少突胶质细胞前体细胞(O-2A)分散于星形细胞层上,分离后的O2A祖细胞抗神经节苷脂GD3阳性;无血清甲状腺素限定性培养基定向培养2周后O-2A祖细胞分化为MBP阳性成熟的少突胶质细胞细胞。结论组织块法培养、振荡法分离纯化P2期小鼠视神经少突胶质细胞前体细胞,纯度高。O-2A祖细胞可分化为成熟少突胶质细胞。

关键词：定向分化视神经新生小鼠鉴定少突胶质细胞 O-2A祖细胞细胞系免疫细胞化学方法流式细胞仪检测细胞原代培养抗神经节苷脂血清甲状腺素组织块法分离纯化前体细胞星形细胞细胞分化定向培养振荡法培养基管内段