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无乳链球菌诱导吉富罗非鱼分泌型免疫球蛋白m(sIgm)重链基因的克隆及原核表达

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生物技术通报 2014年第2期30卷 116-123页

作者：王培鲁义善王蓓汤菊芬蔡佳吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 仲恺农业工程学院广州510225

以灭活的无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)诱导后的吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)为材料,构建其头肾SmART cDNA文库,应用同源性克隆和RACE-PCR技术克隆到吉富罗非鱼(O.niloticus)分泌型免疫球蛋白m(sIgm)重链基因的全长cDNA序列并对其进行生物信息学分析。sIgm基因cDNA全长为1 921 bp,开放阅读框(ORF)为1 740 bp,5'端非编码区(5'-UTR)41 bp,3'端非编码区(3'-UTR)140 bp,编码579个氨基酸,N端有信号肽结构。预测分子量(mW)为64.26 kD,理论等电点(pI)为5.36。系统进化树分析显示,吉富罗非鱼(O.niloticus)sIgm与牙鲆(Paralichthys olivaceus)和军曹鱼(Rachycentron canadum)的亲缘关系较近。sIgm基因有4个恒定区。将吉富罗非鱼(O.niloticus)sIgm基因恒定区序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建原核表达质粒pET28-sIgm,诱导表达后确定最优条件为37℃条件下,IPTG浓度为0.05 mmol/L时诱导4 h蛋白表达量最大。纯化蛋白后经Western blot分析,sIgm融合蛋白与鼠抗His-Tag发生特异结合,表明目的蛋白成功表达。

关键词：吉富罗非鱼免疫球蛋白m 基因克隆原核表达蛋白免疫印迹

乌鳢免疫球蛋白m重链和免疫球蛋白轻链的克隆与特征分析

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华中农业大学学报 2010年第1期29卷 79-84页

作者：贾伟章周秀霞广东药学院生命科学院广州510006 中国科学院水生生物研究所武汉430072

应用RACE-PCR方法克隆并鉴定了乌鳢免疫球蛋白m(i mmunoglobulin m,Ig m)重链(H)和免疫球蛋白轻链(L)全长cDNA。乌鳢IgH cDNA全长1 912个核苷酸(nt),包含1 797 nt的开放阅读框,编码598个氨基酸(aa)。IgH恒定区(CH)均包含1对保守的半胱... 详细信息

应用RACE-PCR方法克隆并鉴定了乌鳢免疫球蛋白m(i mmunoglobulin m,Ig m)重链(H)和免疫球蛋白轻链(L)全长cDNA。乌鳢IgH cDNA全长1 912个核苷酸(nt),包含1 797 nt的开放阅读框,编码598个氨基酸(aa)。IgH恒定区(CH)均包含1对保守的半胱氨酸残基形成链内二硫键,其中CH1区氨基末端存在保守的半胱氨酸残基与轻链形成链间二硫键,4个推测的N-糖基化位点(NXT和NXS)则分别位于CH1、CH2和CH4。序列比对发现乌鳢IgHCH1与CH2交界处氨基酸序列的插入使铰链区肽段较其他硬骨鱼IgH长,此外IgH CH4区羧基末端参与单体间聚合的半胱氨酸被赖氨酸替换,这反映乌鳢IgH分子结构的特异性。序列相似性比较显示乌鳢IgH与点带石斑鱼、黑鳍冰鱼、牙鲆、虹鳟的相似性依次为55%、50%、45%和36%,与斑马鱼类的相似性较低(为28%)。乌鳢IgL cDNA全长941 nt,包含729 nt的开放阅读框,编码242个aa。轻链可变区(VL)和恒定区(CL)均包含保守的半胱氨酸,形成链内和链间二硫键。序列比对分析表明乌鳢IgL与五条鰤和花狼IgL的相似性为78%和77%,而与斑点叉尾鮰和虹鳟的相似性仅为32%和31%。根据IgH和IgL恒定区氨基酸序列构建系统进化树,鱼类IgH形成硬骨鱼和软骨鱼两大分支,其中乌鳢IgH与河豚IgH的亲缘关系较近;硬骨鱼IgL系统树显示3个主要的分支:L1、L2和L3,乌鳢IgL位于L1分支的L1 A亚类。

关键词：免疫球蛋白m 重链轻链克隆乌鳢

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草鱼免疫球蛋白m重链基因的克隆及表达

水产学报 2008年第1期32卷 13-20页

作者：王欣欣孙宝剑昌鸣先聂品中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室湖北武汉430072

用RACE-PCR方法扩增出草鱼免疫球蛋白m(immunoglobulin m,Igm)分泌型的重链全长cDNA。其cDNA全长为1 940nt,包含5′非编码区20nt,3′非编码区189nt,开放阅读框1 731nt,编码576个氨基酸。序列比对分析表明草鱼Igm与鲤的相似性高达68%,与... 详细信息

用RACE-PCR方法扩增出草鱼免疫球蛋白m(immunoglobulin m,Igm)分泌型的重链全长cDNA。其cDNA全长为1 940nt,包含5′非编码区20nt,3′非编码区189nt,开放阅读框1 731nt,编码576个氨基酸。序列比对分析表明草鱼Igm与鲤的相似性高达68%,与斑马鱼、斑点叉尾鱼回、鳜以及大西洋鳕的相似性分别为61%、43%、33%和30%。ClustalX比对结果显示:草鱼Igm中存在半胱氨酸和色氨酸的保守位点。进化分析表明,草鱼Igm与斑马鱼的Igm聚为一枝。荧光定量PCR显示草鱼Igm的mRNA主要在头肾、中肾和脾脏中表达,表明了这三个免疫器官是Igm表达的主要场所。

关键词：草鱼免疫球蛋白m 克隆荧光定量PCR

弥漫大B细胞淋巴瘤合并淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症伴Igm及IgG共存的临床研究

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检验医学与临床 2024年第11期21卷 1655-1659页

作者：汉英石亚军吴涛联勤保障部队第九四〇医院血液科甘肃兰州730050

目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤合并淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症(LPL/Wm)伴免疫球蛋白m(Igm)及免疫球蛋白G(IgG)共存的发病机制、诊断标准、治疗方案及预后。方法分析1例弥漫大B细胞淋巴瘤合并LPL/Wm伴Igm及IgG共存患者的临床资料... 详细信息

目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤合并淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症(LPL/Wm)伴免疫球蛋白m(Igm)及免疫球蛋白G(IgG)共存的发病机制、诊断标准、治疗方案及预后。方法分析1例弥漫大B细胞淋巴瘤合并LPL/Wm伴Igm及IgG共存患者的临床资料,以“弥漫大B细胞淋巴瘤”“免疫球蛋白”“单克隆”“Igm”“IgG”“淋巴浆细胞淋巴瘤”“华氏巨球蛋白血症”“diffuse large B-cell lymphoma”“immune globulin”“monoclonal”“lymphoplasmacytic lymphoma”“Waldenstr9m macroglobulinemia”为检索词,对中国知网数据库、万方知识服务平台及Pubmed数据库中2017年1月至2023年6月发表的文献进行检索。结果该例患者明确诊断为弥漫大B细胞淋巴瘤合并LPL/Wm伴Igm及IgG共存,确诊后经环磷酰胺+多柔比星+长春新碱+泼尼松(CHOP)方案、环磷酰胺+长春新碱+泼尼松(COP)方案治疗有效,但治疗期间病情进展,从发病到死亡存活10个月。依照上述检索条件并经过阅读文献题目与摘要筛选出7篇文献。阅读全文共筛出11例双克隆免疫球蛋白共存LPL/Wm患者,其中Igm伴IgG双克隆6例,Igm伴免疫球蛋白A(IgA)双克隆2例,IgG伴IgA双克隆2例及Igmκ伴Igmλ双克隆1例。文献中提到的治疗方案主要包括硼替佐米+利妥昔单抗方案、COP方案、CHOP方案等,上述方案联合化疗均有效,但该病的发病机制尚不明确,尚无标准的治疗方案及确切的生存期。结论弥漫大B细胞淋巴瘤合并LPL/Wm伴Igm及IgG共存系首次报告,因该病发病率极低,发病机制尚不明确,因此目前尚无统一的治疗方案,预后尚不明确,临床需进一步提高对该病的认识,未来对于其发病机制及新型分子靶向药物的应用进行深入研究,将会大大改善患者的预后。

关键词：弥漫大B细胞淋巴瘤免疫球蛋白单克隆免疫球蛋白m 免疫球蛋白G 淋巴浆细胞淋巴瘤华氏巨球蛋白血症

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大菱鲆免疫球蛋白m(Igm)单克隆抗体的制备与特性鉴定

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中国工程科学 2014年第9期16卷 16-20页

作者：王蔚芳李青梅柴书军甘玲玲洪磊郭军庆雷霁霖中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛市海水鱼类种子工程与生物技术重点实验室山东青岛266071 河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室郑州450002 四川省富顺县水产渔政局四川富顺643200

应用细胞工程技术研制大菱鲆免疫球蛋白m(immunoglobulin m,Igm)的单克隆抗体并分析其免疫学特性。小鼠骨髓瘤细胞NS0与经Igm免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合,经过反复有限稀释法克隆,筛选获得4株抗大菱鲆Igm的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别... 详细信息

应用细胞工程技术研制大菱鲆免疫球蛋白m(immunoglobulin m,Igm)的单克隆抗体并分析其免疫学特性。小鼠骨髓瘤细胞NS0与经Igm免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合,经过反复有限稀释法克隆,筛选获得4株抗大菱鲆Igm的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别为B1D1、D5C2、E1B2和F4A1。经小鼠腹水扩大生产后,单抗效价为1∶1.024×106检测灵敏度为32 ng/mL。Western blot分析表明,获得的单抗与Igm重链区特异性结合。交叉结果显示,单抗与大菱鲆血清呈强阳性反应,与褐牙鲆、红鳍东方鲀、许氏平鲉、六线鱼、鲈鱼均呈微弱阳性反应,而与半滑舌鳎、鲤鱼、鲫鱼、草鱼、鳙鱼的血清无交叉反应。本研究制备的大菱鲆Igm单克隆抗体效价高、灵敏度高、特异性强,适合用于大菱鲆免疫学相关研究和生产实际应用。

关键词：大菱鲆免疫球蛋白m 单克隆抗体 BALB/C小鼠

石英晶体微天平用于免疫球蛋白m免疫反应的动力学研究

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高等学校化学学报 1996年第7期17卷 1025-1029页

作者：楚霞林朝晖沈国励俞汝勤湖南大学化学计量学与化学传感技术研究所

在镀银电极的压电石英晶体表面涂覆甲基丙烯酸甲酯－甲基丙烯酸羟乙酯共聚物涂层，经ＣＮＢｒ活化后固定抗体，用石英晶体微天平技术监测ＩｇＭ抗原在压电石英晶体上的吸附与解吸过程，研究了免疫反应体系ＩｇＭ－抗人ＩｇＭ的反应动力... 详细信息

在镀银电极的压电石英晶体表面涂覆甲基丙烯酸甲酯－甲基丙烯酸羟乙酯共聚物涂层，经ＣＮＢｒ活化后固定抗体，用石英晶体微天平技术监测ＩｇＭ抗原在压电石英晶体上的吸附与解吸过程，研究了免疫反应体系ＩｇＭ－抗人ＩｇＭ的反应动力学．结果表明：ＩｇＭ在压电石英晶体上的键合行为很好地符合Ｌａｎｇｍｕｉｒ吸附方程，免疫反应的结合常数Ｋａｓｓ为７．１０×１０￣７（ｍｏｌ／Ｌ）￣（－１）．在抗原过量情况下为一级反应。计算了ＩｇＭ免疫反应的活化能Ｅａ和不同温度下的反应速率常数ｋｆ．

关键词：石英晶体微天平免疫反应动力学免疫球蛋白m

北京市朝阳区人群中新型冠状病毒血清抗体水平检测结果分析

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慢性病学杂志 2024年第3期 384-387+391页

作者：田甜张士尧许志远王海滨赵剑虹王媛杰徐则超任兴梅李欢欢崔淑娟孙灵利北京市朝阳区疾病预防控制中心微生物检验科

目的探究北京市朝阳区人群中新型冠状病毒血清抗体水平及意义。方法选取2023年2月至2023年3月在北京市朝阳区高碑店社区卫生服务中心和金盏第二社区卫生服务中心接受新型冠状病毒血清抗体检查的320例受试者作为研究对象，所有受试人... 详细信息

目的探究北京市朝阳区人群中新型冠状病毒血清抗体水平及意义。方法选取2023年2月至2023年3月在北京市朝阳区高碑店社区卫生服务中心和金盏第二社区卫生服务中心接受新型冠状病毒血清抗体检查的320例受试者作为研究对象，所有受试人群均抽取5 mL静脉血，采用磁微粒化学发光法检测血清新型冠状病毒特异性免疫球蛋白G (immunoglobulin G,IgG)和免疫球蛋白m (immunoglobulin m,Igm)的水平，观察血清新型冠状病毒特异性IgG和Igm的阳性率，观察年龄、性别、采集时间、采集地点等对人群血清新型冠状病毒特异性IgG和Igm水平及阳性率的影响。结果 320例受试者中IgG阳性298例，占93.13%;Igm阳性13例，占4.06%;Igm和IgG均阳性12例，占3.75%；单纯IgG阳性286例，占89.38%,Igm和IgG均阴性21例，占6.56%。Igm和Igm均阴性人群年龄为54 (37.5～72)岁，非Igm和Igm均阴性人群年龄为41 (32～54)岁，组间比较差异有统计学意义（Z=-2.210,P=0.027）。不同性别、采集地点人群的IgG、Igm血清表达水平和阳性率相比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。不同年龄人群的新型冠状病毒血清IgG抗体表达水平和阳性率相比较，差异无统计学意义（P>0.05）；不同年龄的血清Igm抗体表达水平和阳性率有统计学意义（P0.05）；不同采集时间人群的新型冠状病毒血清Igm水平相比较，差异有统计学意义（Pm、IgG阳性率相比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。血清IgG抗体水平与Igm阳性率呈负相关（r=-0.145,P=0.009）。结论朝阳区社区居民仍存在一定比例新型冠状病毒感染人群，呈年龄、检测时间和IgG抗体水平依赖性，居民中绝大多数曾感染过新型冠状病毒，6.56%的人群缺乏中和抗体保护，且年龄较高，需引起关注。

关键词：新型冠状病毒抗体免疫球蛋白m 免疫球蛋白G

如何消除血清中高Igm对尿酸、前白蛋白检测干扰的探讨

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现代科学仪器 2024年第1期41卷 20-22页

作者：沈军王弘明上海交通大学附属第一人民医院检验医学中心上海200080

目的:试图找出常规湿生化检测中,降低较高浓度的Igm对尿酸(UA)、前白蛋白(PA)干扰的较为便捷的方法。方法:聚乙二醇(25%PEG),去离子水(DH2O),生理盐水(0.9%NaCl),对标本进行稀释,分别使用3000rpm、10000rpm离心10分钟,取上清液检测,结... 详细信息

目的:试图找出常规湿生化检测中,降低较高浓度的Igm对尿酸(UA)、前白蛋白(PA)干扰的较为便捷的方法。方法:聚乙二醇(25%PEG),去离子水(DH2O),生理盐水(0.9%NaCl),对标本进行稀释,分别使用3000rpm、10000rpm离心10分钟,取上清液检测,结果乘稀释倍数。结果:使用25%PEG或蒸馏水稀释离心可以有效消除高Igm对UA和PA的干扰,而使用生理盐水效果不好。结论:在高浓度Igm标本中使用25%PEG10000rpm、DH2O3000和10000rpm可消除其对UA、PA的检测。

关键词：聚乙二醇尿酸前白蛋白免疫球蛋白m

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牙鲆血清中免疫球蛋白m的分离及其测定

海洋科学 2004年第4期28卷 8-12页

作者：王先磊张培军李军徐永立中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放研究实验室山东青岛266071

通过提取健康养殖牙鲆(Paralichthys　olivaceus)血清中的免疫球蛋白(Ig),并测定其相对分子质量,其中重链(H链)的相对分子质量为74.2　ku,轻链(L链)的相对分子质量为23.8　ku。用纯化的牙鲆血清中的Ig作抗原,制备多克隆抗体,确立牙鲆血... 详细信息

通过提取健康养殖牙鲆(Paralichthys　olivaceus)血清中的免疫球蛋白(Ig),并测定其相对分子质量,其中重链(H链)的相对分子质量为74.2　ku,轻链(L链)的相对分子质量为23.8　ku。用纯化的牙鲆血清中的Ig作抗原,制备多克隆抗体,确立牙鲆血清中免疫球蛋白的最佳测定方法。

关键词：牙鲆血清免疫球蛋白m Igm ELISA 抗原多克隆抗体