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中药“抗炎6号”注射液抗感染作用机理的实验研究——Ⅱ.对特异性体液免疫应答功能的影响

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武汉医学院学报 1984年第5期 344-347页

作者：薛昭华刘延兵蔡昌学张训桓武汉医学院基础医学部微生物学教研室

本文报道应用溶血空斑试验(分光光度计测定法)、免疫特异性玫瑰花结形成试验及抗绵羊红细胞抗体测定三项指标,观察“抗炎6号”对小鼠特异性体液免疫应答功能的影响。结果表明,药液对特异性体液免疫应答的不同阶段均有明显的促进作用,且... 详细信息

本文报道应用溶血空斑试验(分光光度计测定法)、免疫特异性玫瑰花结形成试验及抗绵羊红细胞抗体测定三项指标,观察“抗炎6号”对小鼠特异性体液免疫应答功能的影响。结果表明,药液对特异性体液免疫应答的不同阶段均有明显的促进作用,且药液剂量与免疫反应呈平行关系。证实其抗感染效应与促进机体非特异性免疫及特异性体液免疫应答功能有关。

关键词：特异性体液免疫 “抗炎6号” 注射液空斑形成细胞(PFC) 免疫特异性玫瑰花结形成细胞(IRFC) 抗绵羊红细胞抗体(抗SRBC)

褐飞虱细胞色素P450基因CYP4C62的原核表达及多克隆抗体的制备

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昆虫学报 2014年第6期57卷 656-662页

作者：孙海霞陈俊杨之帆湖北大学生命科学学院生物资源绿色转化湖北省协同创新中心武汉430062 武汉科技大学化学工程与技术学院武汉430081

【目的】细胞色素P450单加氧酶在昆虫生长发育和适应环境过程中发挥着重要功能。【方法】本研究克隆了褐飞虱Nilaparvata lugens细胞色素P450基因CYP4C62的开放阅读框(不含信号肽编码序列部分),在大肠杆菌Escherichia coli中实现了高效... 详细信息

【目的】细胞色素P450单加氧酶在昆虫生长发育和适应环境过程中发挥着重要功能。【方法】本研究克隆了褐飞虱Nilaparvata lugens细胞色素P450基因CYP4C62的开放阅读框(不含信号肽编码序列部分),在大肠杆菌Escherichia coli中实现了高效表达,经Ni-NTA琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化得到了重组的CYP4C62蛋白。将该蛋白免疫日本大耳白兔Oryctolagus cuniculus雄兔,制备了兔抗CYP4C62血清抗体。采用间接ELISA方法检测了血清抗体的效价;并通过Western印迹杂交检测了该抗体的免疫学特异性。【结果】结果表明,通过大肠杆菌表达出的CYP4C62蛋白相对分子量为56 kD。间接ELISA法检测表明,制备的兔抗CYP4C62抗体的效价达到1∶100 000。Western印迹杂交证实,该抗体既可与异源表达的CYP4C62蛋白特异性结合,也可以与褐飞虱总蛋白中内源的CYP4C62特异性结合,表明具有较好的免疫反应特异性。【结论】CYP4C62多克隆抗体的成功制备,为后续分析CYP4C62在褐飞虱各组织中的时空表达水平,并通过免疫组织化学法定位分析该蛋白的组织、细胞及亚细胞分布规律,及最终解析CYP4C62的生物学功能奠定了基础。

关键词：褐飞虱细胞色素P450基因原核表达蛋白纯化多克隆抗体免疫特异性

小鼠抗棉铃虫硫酸酯酶(HaSulf1)多克隆抗体的制备与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第10期37卷 936-941页

作者：李雪古丽·库尔班张龙马小丽新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室新疆乌鲁木齐830046

目的原核表达棉铃虫硫酸酯酶1(HaSulf1)蛋白,制备其多克隆抗体。方法构建原核表达载体,诱导表达,用镍柱纯化重组蛋白,注射免疫小鼠。采血后用ELISA检测多克隆抗体的效价,Western blot法检测其免疫特异性。结果获得重组质粒,诱导表达得... 详细信息

目的原核表达棉铃虫硫酸酯酶1(HaSulf1)蛋白,制备其多克隆抗体。方法构建原核表达载体,诱导表达,用镍柱纯化重组蛋白,注射免疫小鼠。采血后用ELISA检测多克隆抗体的效价,Western blot法检测其免疫特异性。结果获得重组质粒,诱导表达得到融合蛋白并成功纯化。ELISA实验检测获得的多克隆抗体效价最高可达到1∶819200。Western blot结果显示该抗体能与体外表达重组蛋白及棉铃虫体内的天然硫酸酯酶结合。结论原核表达获得重组HaSulf1蛋白并制备了特异性的小鼠多克隆抗体。

关键词：棉铃虫棉铃虫硫酸酯酶1(HaSulf1) 原核表达纯化多克隆抗体免疫特异性

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凡纳滨对虾类Ig定性和定位的初步研究

海洋科学 2005年第9期29卷 31-35页

作者：章跃陵刘文杰王三英黄通旺厦门大学生命科学学院福建厦门361005 汕头大学理学院生物学系广东汕头515063

以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象,运用Western-blotting和免疫组织化学等现代免疫学方法,对对虾中的类Ig(immunoglobulin,免疫球蛋白)蛋白进行定性和定位研究。结果发现,虾血清中有两种分子质量约为70 ku和62 ku的蛋白可... 详细信息

以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象,运用Western-blotting和免疫组织化学等现代免疫学方法,对对虾中的类Ig(immunoglobulin,免疫球蛋白)蛋白进行定性和定位研究。结果发现,虾血清中有两种分子质量约为70 ku和62 ku的蛋白可与抗人Ig发生特异性的结合。同时,虾血细胞——无颗粒细胞的外膜及虾类淋巴器、肝胰脏、心脏、胃和肠等5种组织器官的石蜡切片与抗人Ig反应呈不同程度的阳性,其中类淋巴器和肝胰脏显色较深。提示,虾体内确实存在能与抗人Ig发生特异性结合的类Ig蛋白,其不仅存在于虾血清中,还存在于无颗粒细胞、类淋巴器和肝胰脏等组织中,为对虾的免疫系统的研究和疾病的防治奠定基础。

关键词：凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei) 类Ig蛋白免疫特异性组织定位

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囊尾蚴病一氧化氮免疫机制的临床研究

中国人兽共患病杂志 1999年第1期15卷 55-56页

作者：陈学 陈兵邱守义佳木斯大学医学院流行病教研室佳木斯大学医学院第一附院感染科

为了研究一氧化氮（ＮＯ）在抗囊免疫机制中的作用及其与临床症状轻重的关系，本文观察了３５例皮肌型或混合型囊尾蚴病病人的囊节数目与其血清中ＮＯ水平的关系，分别用Ｇｒｉｅｅｓ法和ＥＬＩＳＡ法检测其血清中的ＮＯ水平和特异性Ｉ... 详细信息

为了研究一氧化氮（ＮＯ）在抗囊免疫机制中的作用及其与临床症状轻重的关系，本文观察了３５例皮肌型或混合型囊尾蚴病病人的囊节数目与其血清中ＮＯ水平的关系，分别用Ｇｒｉｅｅｓ法和ＥＬＩＳＡ法检测其血清中的ＮＯ水平和特异性ＩｇＧ（ＩｇＧ＃）含量，并将两组数据作相关性分析，发现该病病人的皮下囊节数目与血清中ＮＯ水平有关，病人血清中ＮＯ水平与ＩｇＧ＃含量呈正相关，病人血清中ＮＯ水平和特异性ＩｇＧ水平明显高于正常人（Ｐ＜０．０５）。由此可推测该病病人血清中ＮＯ值是反映其免疫反应强弱和临床症状轻重的一个指标。

关键词：囊尾蚴病一氧化氮免疫特异性 IgG

血管内皮生长因子在肝移植后急性排斥反应中的作用

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中华器官移植杂志 2009年第1期30卷 61-62页

作者：周天保陈规划中山大学附属第三医院肝移植中心广州510630

目前所知参与移植器官急性排斥反应过程的细胞因子按功能可为炎症性细胞因子、免疫特异性细胞因子、炎症细胞激活细胞因子和生长因子等4类，其中起着直接诱导内皮细胞分裂、增殖和迁移作用的生长因子主要有血管内皮生长因子（VEGF）和... 详细信息

目前所知参与移植器官急性排斥反应过程的细胞因子按功能可为炎症性细胞因子、免疫特异性细胞因子、炎症细胞激活细胞因子和生长因子等4类，其中起着直接诱导内皮细胞分裂、增殖和迁移作用的生长因子主要有血管内皮生长因子（VEGF）和成纤维生长因子（FGF）家族等^[1]。最近的研究显示，炎症细胞浸润和血管新生的互动和时间上的重叠才是导致移植后急性排斥反应（AR）的主要机制^[1]，这在临床上已得到证实，即有时只有将改善微血管和微胆管的药物合用才能消除肝移植后AR的症状。

关键词：血管内皮生长因子急性排斥反应移植后炎症性细胞因子成纤维生长因子炎症细胞浸润肝免疫特异性

抗棉铃虫Ⅳ型几丁质酶(HaCHT4)小鼠多克隆抗体的制备与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2018年第9期34卷 845-849页

作者：麦麦提艾力·阿卜杜纳斯尔古新蓉马纪马小丽刘小宁新疆大学生命科学与技术学院新疆生物基因工程重点实验室新疆乌鲁木齐830046

目的原核表达棉铃虫Ⅳ型几丁质酶(HaCHT4)并制备其多克隆抗体。方法在大肠杆菌中表达组蛋白-HaCHT4融合蛋白(His-HaCHT4),镍柱纯化目的蛋白,经足垫加皮下注射免疫小鼠。4次免疫后,用ELISA检测抗His-HaCHT4多克隆抗体的效价,Western blo... 详细信息

目的原核表达棉铃虫Ⅳ型几丁质酶(HaCHT4)并制备其多克隆抗体。方法在大肠杆菌中表达组蛋白-HaCHT4融合蛋白(His-HaCHT4),镍柱纯化目的蛋白,经足垫加皮下注射免疫小鼠。4次免疫后,用ELISA检测抗His-HaCHT4多克隆抗体的效价,Western blot法检测其免疫特异性。结果成功纯化His-HaCHT4融合蛋白,小鼠抗His-HaCHT4的多克隆抗体的滴度高于1∶204 800。Western blot结果显示该抗体能与His-HaCHT4融合蛋白及棉铃虫体中的天然HaCHT4结合,但不能与黄粉虫的蛋白结合。结论成功原核表达和纯化了His-HaCHT4,制备了特异性的鼠多克隆抗体。

关键词：棉铃虫 Ⅳ型几丁质酶(HaCHT4) 多克隆抗体免疫特异性

人心肌型脂肪酸结合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化

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药物生物技术 2018年第1期25卷 7-11页

作者：钟丽施建丰周竞马小力江苏省中西医结合医院检验科江苏南京210028

人心脏型脂肪酸结合蛋白(Heart type-fatty acid binding protein,H-FABP)是存在于心肌细胞质内的小分子可溶性蛋白质,占心脏全部可溶性蛋白的4%~8%,具有很强的器官特异性。在急性心肌梗塞(AMI)早期,心肌细胞中H-FABP大量增加,因此可将... 详细信息

人心脏型脂肪酸结合蛋白(Heart type-fatty acid binding protein,H-FABP)是存在于心肌细胞质内的小分子可溶性蛋白质,占心脏全部可溶性蛋白的4%~8%,具有很强的器官特异性。在急性心肌梗塞(AMI)早期,心肌细胞中H-FABP大量增加,因此可将其作为急性心肌梗塞等心肌损伤的生化标志物。大肠杆菌是常用的可快速生产重组蛋白的宿主,且融合或嵌合"标签"蛋白连接靶蛋白不仅能提高靶蛋白的溶解性,同时也可以防止细胞内的蛋白水解。作者旨在获得重组可溶性人心肌型脂肪酸结合蛋白(H-FABP),为进一步开发应用奠定基础。选择麦芽糖结合蛋白(MBP)作为H-FABP的融合标签蛋白,以提高H-FABP在大肠杆菌中的可溶性表达能力。通过RT-PCR扩增人H-FABP的基因序列,将目的基因克隆入pET28a表达载体,转化到DH5α感受态细菌中扩增得到原核表达重组质粒pET28a-MBP-H-FABP。将质粒转化入大肠杆菌BL21中,通过IPTG诱导,表达MBPH-FABP融合蛋白,同时SDS-PAGE分析验证。后经镍固定金属亲和层析纯化及离子亲和纯化法纯化,并经SDSPAGE和免疫印迹分析鉴定纯化后重组蛋白的免疫特异性。SDS-PAGE和免疫印迹分析显示重组蛋白相对分子质量约为55 k。经Ni^(+2)-NTA纯化后,MBP-H-FABP重组蛋白在SDS-PAGE电泳下获得单一条带,且MBP-H-FABP可与商业化的H-FABP单克隆抗体(Clone 12-1)呈特异性反应。其意义在于提供在大肠杆菌中制备可溶性重组人H-FABP的方法,为研究其生物学功能和制备单克隆抗体以及今后进行大规模的生产奠定了基础。

关键词：心肌型脂肪酸结合蛋白麦芽糖结合蛋白表达纯化大肠杆菌免疫特异性

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大鼠Fcε3-4基因克隆及原核表达

河北大学学报（自然科学版） 2012年第4期32卷 387-392页

作者：张艳芬时海浪王培莹乔晓强刘中成河北大学实验室管理办公室河北保定071002 河北大学药学院河北保定071002

为了获得重组Fcε3-4蛋白,从变态反应性哮喘大鼠脾组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法克隆大鼠Fcε3-4基因,构建成原核表达载体pET17b-Fcε3-4,并转化大肠杆菌进行诱导表达,Fcε3-4蛋白主要以包涵体形式存在.经Ni-NAT亲和层析柱对尿素溶解... 详细信息

为了获得重组Fcε3-4蛋白,从变态反应性哮喘大鼠脾组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法克隆大鼠Fcε3-4基因,构建成原核表达载体pET17b-Fcε3-4,并转化大肠杆菌进行诱导表达,Fcε3-4蛋白主要以包涵体形式存在.经Ni-NAT亲和层析柱对尿素溶解的Fcε3-4蛋白进行了纯化,并利用降低尿素梯度的方法柱上对纯化蛋白进行了复性.经Western Blotting和ELISA鉴定,Fcε3-4蛋白具有Fcε的免疫特异性,能被抗大鼠Fcε抗体特异性识别,为下一步研究该蛋白奠定了基础.

关键词：大鼠 Fcε3-4基因克隆表达免疫特异性