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透明化大尺度生物组织快速免疫染色方法研究

透明化大尺度生物组织快速免疫染色方法研究

作者：李俊上海交通大学

学位级别：硕士

近年来,组织透明化技术发展非常迅速,特别是新近发明的CLARITY技术,因为可以创新性的将一块完整组织转变成一种光学上透明且生物大分子可渗透的水凝胶组织复合物而倍受人们关注。然而对该复合体的免疫荧光标记过程实在太过缓慢,极大的... 详细信息

近年来,组织透明化技术发展非常迅速,特别是新近发明的CLARITY技术,因为可以创新性的将一块完整组织转变成一种光学上透明且生物大分子可渗透的水凝胶组织复合物而倍受人们关注。然而对该复合体的免疫荧光标记过程实在太过缓慢,极大的限制了该技术的进一步运用和推广。本文设计了一个的实验体系,系统测量了不同大小的抗体分子在该胶体复合物中的扩散系数。根据测得的扩散系数,我们发现抗体分子在该复合物中的扩散速率与自由扩散的速率在同一量级。因而本文认为原始的CLARITY方法选择的凝胶配方已经接近最优,难以通过增加凝胶孔径来达到快速抗体渗透和标记的目的。为此,本文认为最好的解决方案是给予生物大分子一个外力来加快它们在组织凝胶复合物中运动。基于这一目的,并考虑到抗体分子在合适的条件下会带电荷的事实,我们在原来设计的扩散测试系统中加入一个电场,并用该电场去驱动抗体分子快速进入生物组织凝胶复合体。实验结果表明将Ig G抗体扩散至相同的深度,加电场的条件下要比不加电场的条件下,扩散时间减少了800多倍,因此多轮免疫染色有可能从数月的时间缩短到一天之内完成为了进一步确认该方法在实际运用中的可行性,本文尝试了用电场驱动方式免疫标记透明化后的转基因老鼠样品。免疫荧光标记信号与内源信号充分重合。尤为重要的是,没有观察到明显的样品在电场条件下被破坏的情况发生,证明了该方法在方法在组织透明化样品快速免疫方面的可靠性。该方法的实现,也使得CLARITY等组织透明化技术应用于更广范围和更大尺度组织三维结构的研究成为可能。

关键词： CLARITY 免疫染色扩散电场

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活体免疫染色评估眼底新生血管实验研究

上海交通大学学报（医学版） 2009年第5期29卷 530-534页

作者：陈颖谢冰吴强上海交通大学第六人民医院眼科上海200233 上海交通大学医学院瑞金医院眼科上海200025

目的探寻更好地对视网膜新生血管(RNV)和脉络膜新生血管(CNV)及其渗漏作定性和定量分析的方法。方法13只小鼠随机分为RNV评估组(n=7)和CNV评估组(n=6)。①RNV评估:取3只小鼠作为正常对照组,其余4只制作成未成熟视网膜病变(ROP)模型,分... 详细信息

目的探寻更好地对视网膜新生血管(RNV)和脉络膜新生血管(CNV)及其渗漏作定性和定量分析的方法。方法13只小鼠随机分为RNV评估组(n=7)和CNV评估组(n=6)。①RNV评估:取3只小鼠作为正常对照组,其余4只制作成未成熟视网膜病变(ROP)模型,分别于出生后第16天双眼内注射FITC标记的抗体或未经FITC标记的抗体以及空白组,12 h后直接视网膜铺片或用带荧光的二抗孵育后再铺片镜检。②CNV渗漏评估:激光诱导6只小鼠(12眼)制作CNV模型,随机平分为两组,分别于光凝后第7和14天眼内注射非荧光标记的抗体,12 h后腹腔内注射荧光素钠,并定量分析CNV面积及其渗漏面积。结果FITC标记抗体组的视网膜表现出高荧光、高清晰度的视网膜结构血管和RNV,而非FITC标记抗体组的视网膜只选择性染色RNV,几乎无干扰荧光背景,可观察到细微变化,利于应用图像软件对RNV图片进行定性和定量分析。应用SPOT图像软件把CNV染色的图片与CNV渗漏荧光的图片进行叠加,能够明确区分CNV及其渗漏面积;第14天与第7天CNV面积及其渗漏面积比较差异有统计学意义(P免疫染色技术可以方便地观察视网膜血管细微结构,并精准地定性和定量分析RNV和CNV渗漏。

关键词：视网膜新生血管脉络膜新生血管渗漏活体免疫染色

运用PTEN和ERG免疫染色区分针吸活检组织中前列腺导管内癌以及高级别PIN

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临床与实验病理学杂志 2015年第4期31卷 442-442页

作者： Morais C L Han J S Gordetsky J 徐磊孙咏梅江苏省连云港市第二人民医院病理科连云港222002

前列腺导管内癌和高级别上皮内瘤变（PIN）在治疗方案上有着显著的区别，但二者的针吸活检组织很难区分。在前列腺根治标本中，作者发现运用PTEN和ERG的免疫组化染色可以解决这一难题。作者在实验中进一步验证在针吸标本中这些标志物是... 详细信息

前列腺导管内癌和高级别上皮内瘤变（PIN）在治疗方案上有着显著的区别，但二者的针吸活检组织很难区分。在前列腺根治标本中，作者发现运用PTEN和ERG的免疫组化染色可以解决这一难题。作者在实验中进一步验证在针吸标本中这些标志物是否有用。单独或组合的免疫标记法运用于形态学明确的导管内癌、PIN、交界性导管内增生的活检，后者缺乏类似于导管内癌的形态学准则而比PIN更令人担忧。

关键词：导管内癌活检组织免疫染色 PTEN PIN 前列腺 ERG 针吸

PAX8,PAX2,claudin-4和h-calde-smon免疫染色在鉴别诊断腹膜间皮瘤和浆液性癌中的价值

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临床与实验病理学杂志 2013年第7期29卷 712-712页

作者：田智丹黄文斌南京医科大学附属南京医院南京210006

腹膜上皮样间皮瘤和浆液性癌广泛累及腹膜的鉴别仅依靠组织学较难，目前比较常用的免疫组化标记为间皮表达标志物（如calretinin、podoplanin、keratin5／6和thrombomodulin），或浆液性癌表达标志物（如MOC-31、Ber．EP4、BG-8、TAG-72... 详细信息

腹膜上皮样间皮瘤和浆液性癌广泛累及腹膜的鉴别仅依靠组织学较难，目前比较常用的免疫组化标记为间皮表达标志物（如calretinin、podoplanin、keratin5／6和thrombomodulin），或浆液性癌表达标志物（如MOC-31、Ber．EP4、BG-8、TAG-72、CD15和CA199）。最近研究表明，PAX8、PAX2、claudin-4和h-caldesmon免疫组化标记可辅助诊断两种肿瘤，但是大量的研究报道对以上标志物的评估不充分或者结果相互矛盾。

关键词： claudin-4 腹膜间皮瘤浆液性癌 PAX2 鉴别诊断免疫染色 calretinin podoplanin

Calretinin免疫染色有助于鼻腔的嗅神经母细胞瘤与其他小圆蓝细胞肿瘤的鉴别

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临床与实验病理学杂志 2012年第1期28卷 102-102页

作者：赵有财黄文斌南京医科大学附属南京第一医院病理科南京210006

嗅神经母细胞瘤（ONB）是罕见的鼻腔恶性肿瘤,由小圆细胞组成,肿瘤细胞巢位于富于血管的纤维性间质中。在组织学上需与其他发生于鼻窦的小圆蓝细胞肿瘤鉴别诊断,包括黑色素瘤、淋巴瘤、鼻窦未分化癌（SNUC）、垂体腺瘤、横纹肌肉瘤、尤... 详细信息

嗅神经母细胞瘤（ONB）是罕见的鼻腔恶性肿瘤,由小圆细胞组成,肿瘤细胞巢位于富于血管的纤维性间质中。在组织学上需与其他发生于鼻窦的小圆蓝细胞肿瘤鉴别诊断,包括黑色素瘤、淋巴瘤、鼻窦未分化癌（SNUC）、垂体腺瘤、横纹肌肉瘤、尤文肉瘤/PNET、高级别神经内分泌癌和非角化型鼻咽癌等。在组织足够大、保存好的活检标本中,低级别ONB和这些肿瘤在光镜下就可鉴别。

关键词：嗅神经母细胞瘤鼻腔恶性肿瘤 Calretinin 细胞肿瘤鉴别诊断免疫染色神经内分泌癌横纹肌肉瘤

CD200免疫染色在原发性纵隔大B细胞性淋巴瘤中的诊断价值

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临床与实验病理学杂志 2013年第1期29卷 39-39页

作者：黄文斌南京医科大学附属南京医院病理科南京210006

原发性纵隔大B细胞性淋巴瘤是一种起源于前纵隔胸腺B细胞的大B细胞性淋巴瘤，该病好发于年轻女性，免疫组化除了表达全B细胞标记外，还不同程度表达CD30、BCL一2、BCL-6和CDl0。同时该病还表达CD23、MAL、TRAF和，

关键词： B细胞性淋巴瘤前纵隔原发性 CD200 诊断价值免疫染色 BCL-6 细胞标记

P16免疫染色可以提高子宫平滑肌肿瘤的组织学分类

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临床与实验病理学杂志 2008年第1期24卷 46-46页

作者： Atkins K A Arronte N Darus C J 黄文斌(摘译) 不详南京医科大学附属南京第一医院病理科南京210006

子宫平滑肌肿瘤根据核分裂像、细胞学异型性和凝固性肿瘤细胞坏死可分为平滑肌瘤和平滑肌肉瘤。平滑肌瘤和平滑肌肉瘤是不同的肿瘤,不属于一个生物学谱系。然而,恶性潜能未定的子宫平滑肌肿瘤(STUMP)因缺乏临床经验而不能明确归入平滑... 详细信息

子宫平滑肌肿瘤根据核分裂像、细胞学异型性和凝固性肿瘤细胞坏死可分为平滑肌瘤和平滑肌肉瘤。平滑肌瘤和平滑肌肉瘤是不同的肿瘤,不属于一个生物学谱系。然而,恶性潜能未定的子宫平滑肌肿瘤(STUMP)因缺乏临床经验而不能明确归入平滑肌瘤或平滑肌肉瘤。作者研究了p16在各种子宫平滑肌肿瘤(平滑肌肉瘤15例、平滑肌瘤22例、STUMP8例和10例正常子宫肌层)中的表达,结果显示12/15例平滑肌肉瘤强烈而弥漫性表达p16,平滑肌瘤仅有3例局灶性表达,正常子宫肌层均表达阴性,3例发生转移的STUMP中2例p16呈强而弥漫性表达。作者认为p16优先表达于子宫平滑肌肉瘤中,在STUMP中特别是伴有凝固性肿瘤细胞坏死者,应用p16免疫染色可有助于降低这种分类的不确定性。P16免疫染色可以提高子宫平滑肌肿瘤的组织学分类@Atkins K A@Arronte N@Darus C J@黄文斌$南京医科大学附属南京第一医院病理科!南京210006

关键词：子宫平滑肌肿瘤组织学分类免疫染色 P16 平滑肌肉瘤平滑肌瘤肿瘤细胞坏死核分裂像

急性B或T淋巴母细胞性白血病／淋巴瘤及伯基特淋巴瘤的转录因子表达谱：PAX5可作为前体B细胞的免疫染色标志物

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中华病理学杂志 2010年第8期39卷 507-507页

作者：刘勇江西省人民医院病理科南昌330006

多数造血系统恶性肿瘤主要依据其免疫表型进行细胞谱系分类，但是一些淋巴瘤和白血病病例所表达的膜表面或胞质标志物可能与其细胞谱系不一致，因而导致诊断困难以及影响治疗方案的选择。未成熟恶性淋巴瘤如急性B或T淋巴母细胞性白血病... 详细信息

多数造血系统恶性肿瘤主要依据其免疫表型进行细胞谱系分类，但是一些淋巴瘤和白血病病例所表达的膜表面或胞质标志物可能与其细胞谱系不一致，因而导致诊断困难以及影响治疗方案的选择。未成熟恶性淋巴瘤如急性B或T淋巴母细胞性白血病／淋巴瘤（B或T-ALL）的谱系鉴定主要依据流式细胞检测分析结果。

关键词：伯基特淋巴瘤细胞性白血病标志物前体B细胞免疫染色 PAX5 转录因子急性

亚甲基蓝对比染色法在黑色素瘤组织免疫组织化学染色中的应用

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中华病理学杂志 2022年第11期51卷 1167-1170页

作者：万维松王乐刘宇飞胡余昌三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院病理科宜昌443000

目的探讨亚甲基蓝对比染色法在黑色素瘤组织免疫组织化学染色中的应用。方法收集存档的黑色素瘤组织42例,采用免疫组织化学染色苏木精对比染色后,用亚甲基蓝染液对比染色(实验组)和未用亚甲基蓝对比染色(对照组)2种方法,应用EnVision法... 详细信息

目的探讨亚甲基蓝对比染色法在黑色素瘤组织免疫组织化学染色中的应用。方法收集存档的黑色素瘤组织42例,采用免疫组织化学染色苏木精对比染色后,用亚甲基蓝染液对比染色(实验组)和未用亚甲基蓝对比染色(对照组)2种方法,应用EnVision法检测Melan A、HMB45、S-100蛋白、SOX-10和Ki-67的表达,分析2种方法对含黑色素的黑色素瘤组织不同免疫组织化学指标结果判读的影响。结果经亚甲基蓝对比染色处理后黑色素被染成了墨绿色,与二氨基联苯胺(DAB)显色的棕黄色对比鲜明,免疫组织化学染色结果定位准确,易于判读。黑色素和肿瘤细胞染色对比度和染色清晰度评分显著高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。在中少量黑色素含量的组织中,Melan A、HMB45、S-100蛋白、Ki-67和SOX-10的免疫染色中黑色素与DAB的区分度均较明显,实验组和对照组评分比较差异具有统计学意义(P染色法是一种具有耗时短、操作简单、对比鲜明、不影响抗原表达及不破坏组织结构等优点的具有较高应用和推广价值的处理黑色素的方法,特别是在中少量黑色素含量肿瘤组织中推荐使用。

关键词：二氨基联苯胺黑色素瘤 HMB45 免疫组织化学染色抗原表达亚甲基蓝对比染色免疫染色