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酶联免疫电转移印迹技术在囊尾蚴病诊断中的应用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2004年第2期22卷 98-100页

作者：王丽娜葛凌云缪峰于振华刘玉冰甄天民李桂萍杨淑芳潍坊医学院基础部免疫教研室潍坊261042 山东省寄生虫病防治研究所济宁272133

目的　应用高度敏感、特异的酶联免疫电转移印迹技术 (EITB)诊断囊尾蚴病。　方法　用双向电泳法对囊液抗原进行分离、纯化 ,并通过免疫印迹 ,用囊尾蚴病患者、棘球蚴病患者和其他异源血清筛选高免疫反应性和高特异性抗原组分 ,以此建立... 详细信息

目的　应用高度敏感、特异的酶联免疫电转移印迹技术 (EITB)诊断囊尾蚴病。　方法　用双向电泳法对囊液抗原进行分离、纯化 ,并通过免疫印迹 ,用囊尾蚴病患者、棘球蚴病患者和其他异源血清筛选高免疫反应性和高特异性抗原组分 ,以此建立EITB诊断方法 ,与传统的ELISA法相比 ,并比较血清和滤纸干血浸出液两种样本的敏感性。　结果　得到了等电点为 9.4,相对分子质量为 14 0 0 0和 1660 0两组特异性抗原组分 ,以此为诊断抗原建立了EITB诊断方法 ,其敏感度和特异度分别高达 92 .5 %和 10 0 % ,显著高于ELISA法。在EITB中血清和滤纸干血浸出液的敏感性相似。　结论　EITB诊断囊尾蚴病较ELISA法敏感性高。

关键词：囊尾蚴病蠕虫抗原免疫印迹法双向免疫电泳免疫学试验酶联免疫吸附测定免疫学诊断

常见乙型肝炎病毒表面抗原突变体的抗原性分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2003年第1期17卷 31-34页

作者：白玉夏国良贾志远丛郁王晓黎郭敏卓詹美云中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室北京100052

目的　研究乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原突变株和野毒株对表面抗体结合能力的差异 ,探讨免疫漏检基因变异株的机制及对策。方法　应用基因重组技术构建HBsAg常见基因突变株和野毒株表达质粒 ,分别在COS 7细胞中瞬时表达 ,定量后用常规HB... 详细信息

目的　研究乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原突变株和野毒株对表面抗体结合能力的差异 ,探讨免疫漏检基因变异株的机制及对策。方法　应用基因重组技术构建HBsAg常见基因突变株和野毒株表达质粒 ,分别在COS 7细胞中瞬时表达 ,定量后用常规HBsAg免疫诊断试剂盒检测 ,观察重组抗原与不同抗 HBs的结合能力。结果　T 12 6S变异与单克隆抗体的结合力增高 ,G 145R ,K 141E和 2株三位点同时变异株则明显下降 ,对M 13 3T变异与单克隆抗体的结合力影响不大。变异株与多克隆抗体的结合力也有变化 ,但仍能检测到大部分变异株抗原。结论　“a”抗原决定簇氨基酸的置换影响了HBsAg与抗 HBs的结合能力 ,并且氨基酸的置换位置和特性对抗原性的影响各有不同。因此 ,建议应用HBsAg多克隆抗体或开发研制“免疫逃逸突变株”的特异性抗体 ,以完善HBsAg免疫诊断试剂的抗体组成。

关键词：乙型肝炎乙型肝炎表面抗原基因结构病毒免疫学试验

日本血吸虫核糖体蛋白S4基因的克隆、表达、纯化及免疫诊断价值的初步研究

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中华预防医学杂志 2010年第6期44卷 500-504页

作者：高冬梅汪世平余路新何卓陈秀春中南大学湘雅医学院血吸虫病免疫与传播控制重点实验室长沙410078

目的体外重组日本血吸虫核糖体蛋白S4（SjRPS4）,并评价其在日本血吸虫病免疫诊断中的应用价值.方法从日本血吸虫尾蚴cDNA文库获得了SjRPS4蛋白相关基因,将该段基因克隆入pQE30表达载体并转化到大肠杆菌M15中,异丙基-β-D-硫代半乳糖... 详细信息

目的体外重组日本血吸虫核糖体蛋白S4（SjRPS4）,并评价其在日本血吸虫病免疫诊断中的应用价值.方法从日本血吸虫尾蚴cDNA文库获得了SjRPS4蛋白相关基因,将该段基因克隆入pQE30表达载体并转化到大肠杆菌M15中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导融合蛋白表达.融合蛋白经Ni2＋-NTA树脂柱进行亲和层析纯化,并通过十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定蛋白反应,通过Western blot和ELISA对其免疫原性进行鉴定.结果成功构建了pQE30/SjRPS4重组菌.重组菌诱导培养后,SDS-PAGE电泳分析可见在相对分子质量约30×103处有SjRPS4融合蛋白的表达,经纯化获得纯度达90%以上的表达蛋白.Western blot检测结果表明该重组蛋白能被日本血吸虫病患者血清识别.用ELISA法检测疑似血吸虫病患者血清,敏感性为90.91%（70/77）,特异性为92.59%（25/27）,SjRPS4重组表达蛋白阳性率为67.30%（70/104）,与肺吸虫病患者血清无交叉反应.结论成功克隆表达了SjRPS4蛋白,初步证实了SjRPS4在诊断血吸虫病中具有良好的应用价值.

关键词：血吸虫日本重组蛋白质类核糖体蛋白质类免疫学试验

2018—2021年广州市中学和大学新生结核分枝杆菌潜伏感染情况分析

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结核与肺部疾病杂志 2023年第2期4卷 115-119页

作者：钟敏儿杜雨华张丹妮林莹吴桂锋王挺刘健雄广州市胸科医院结核病控制管理科广州510095 广州医科大学公共卫生学院广州511436

目的:了解广州市中学和大学新生结核分枝杆菌潜伏感染(latent tuberculosis infection,LTBI)的情况,为广州市学校结核病防控工作和策略制定提供参考依据。方法:选取广州市中学和大学共17所学校作为试点单位,对试点单位2018—2021年共计1... 详细信息

目的:了解广州市中学和大学新生结核分枝杆菌潜伏感染(latent tuberculosis infection,LTBI)的情况,为广州市学校结核病防控工作和策略制定提供参考依据。方法:选取广州市中学和大学共17所学校作为试点单位,对试点单位2018—2021年共计17632名入学新生(包括初高中、专科、高等院校的一年级学生)根据知情同意的原则进行结核菌素皮肤试验(tuberculin skin test,TST),对15岁以上学生同时加做胸部X线摄片检查;TST中度及以上阳性者(硬结平均直径≥10 mm)再进一步加做γ-干扰素释放试验(interferon gamma release assay,IGRA);TST和IGRA均为阳性或胸部X线摄片发现肺部异常阴影者,再进行痰涂片、痰培养等结核病辅助诊断检查。使用描述性流行病学方法对筛查结果进行分析。结果:实际筛查学生17204名,筛查率为97.57%(17204/17632)。TST阳性者共4449名,阳性率为25.87%(4449/17199),一般阳性率为15.98%(2748/17199),中度阳性率为7.65%(1315/17199),强阳性率为2.24%(386/17199)。高中组TST阳性率(33.81%,1408/4165)最高,初中组TST阳性率(30.58%,329/1076)次之,大学组TST阳性率(22.68%,2712/11958)最低,组间差异有统计学意义(χ^(2)=353.897,P学意义(χ^(2)=35.855,P学生胸片异常,其中1例TST阴性(IGRA未做),6例TST阳性(其中5例IGRA阳性,1例IGRA阴性)。最终确诊肺结核5例,肺结核检出率为29.06/10万(5/17204)。结论:广州市学生结核感染情况不容忽视,应加强初中、高中新生入学结核病体检工作,及时发现学生结核病患者和LTBI者。TST和IGRA联合筛查有助于提高筛查的准确性和防控效率,符合成本效益原则。

关键词：分枝杆菌,结核分枝杆菌感染结核菌素试验免疫学试验学生

免疫比浊法检测白蛋白的性能验证以及在恶性肿瘤诊断疗中的应用价值

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实用医技杂志 2022年第1期29卷 95-98页

作者：蔡振鑫广东省惠州市第一人民医院检验科 516003

目的通过研究溴甲酚绿法和免疫透射比浊法检测白蛋白之间的结果差异,探讨免疫透射比浊法检测血清白蛋白在恶性肿瘤疾病中的价值,为临床诊疗提供实验依据。方法根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)文件方案,在罗氏Cobas C702检测系统上... 详细信息

目的通过研究溴甲酚绿法和免疫透射比浊法检测白蛋白之间的结果差异,探讨免疫透射比浊法检测血清白蛋白在恶性肿瘤疾病中的价值,为临床诊疗提供实验依据。方法根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)文件方案,在罗氏Cobas C702检测系统上对免疫比浊法芬兰Orion Diagnostica公司生产的白蛋白试剂盒的精密度、准确度、线性范围和分析敏感度进行验证;收集恶性肿瘤患者血清样本308例,在罗氏Cobas C702全自动生化分析仪用溴甲酚绿法和免疫比浊法检测白蛋白,进行结果比对。结果免疫比浊法检测白蛋白高值和低值的批内变异系数(CV)分别为0.92%和0.78%,总CV分别为1.44%和1.33%;准确度、线性范围、空白检出限、生物参考区间验证,均符合厂商声明的性能。308例恶性肿瘤患者血清,溴甲酚绿法检测结果比免疫比浊法高,随着白蛋白浓度的降低,2种方法学的检测结果差异增大,特别是白蛋白在浓度低于30 g/L时,最大绝对偏差达9.0 g/L。结论免疫比浊法芬兰Orion Diagnostica公司生产白蛋白试剂盒的精密度、准确度、线性范围、分析敏感度和生物参考区间均符合相关质量规范要求,能够满足临床需要;在恶性肿瘤患者中,溴甲酚绿法检测白蛋白结果比免疫比浊法高,绝对偏差大部分在4.0~6.9 g/L范围内,应引起临床足够重视。

关键词：血清白蛋白,人免疫学试验肿瘤

腹腔积液结核感染T细胞斑点试验不同阈值在结核性腹膜炎中的诊断价值

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结核与肺部疾病杂志 2022年第6期3卷 501-505页

作者：石海萍仵倩红陕西省结核病防治院西安710100

目的:探讨腹腔积液结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)不同阈值在结核性腹膜炎中的诊断价值。方法:选取陕西省结核病防治院2016年1月至2020年12月期间48例确诊的腹腔积液患者作为研究对象,所有患者均在超声引导下进行了腹腔穿刺术及腹膜... 详细信息

目的:探讨腹腔积液结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)不同阈值在结核性腹膜炎中的诊断价值。方法:选取陕西省结核病防治院2016年1月至2020年12月期间48例确诊的腹腔积液患者作为研究对象,所有患者均在超声引导下进行了腹腔穿刺术及腹膜组织活检术,同时行外周血T-SPOT.TB、腹腔积液T-SPOT.TB、腹腔积液结核分枝杆菌涂片、腹腔积液BACTEC MGIT 960液体培养(MGIT 960液体培养)、腹腔积液分子生物学检查、腹膜组织病理检查及分子生物学检查。以临床复合标准作为参考,评价外周血T-SPOT.TB、腹腔积液T-SPOT.TB(分别设定6 SFC/10~6、30 SFC/10~6为阳性阈值)在结核性腹膜炎诊断中的敏感度、特异度、符合率及一致性。结果:48例患者中,31例确诊为结核性腹膜炎,其中3例经腹腔积液抗酸染色阳性确诊,11例经MGIT 960液体培养阳性确诊,13例经腹腔积液或腹膜组织分子生物学检查阳性确诊,2例经腹膜组织病理为肉芽肿伴干酪样坏死确诊,2例经腹膜组织病理为肉芽肿性炎,经抗结核治疗2个月有效后确诊。17例确诊为非结核性腹膜炎,其中恶性腹腔积液13例,细菌性腹腔积液2例,红斑狼疮1例,淋巴瘤1例;4例经腹腔积液病理确诊,11例经腹膜组织病理确诊,2例经腹腔积液细菌培养确诊。以临床复合标准作为参考标准,外周血T-SPOT.TB腹腔积液T-SPOT.TB.数值分别以6 SFC/10~6、30 SFC/10~6作为阳性阈值,3种检测方法在结核性腹膜炎中诊断的敏感度分别为83.9%(95%CI:65.5%~93.9%)、87.1%(95%CI:69.2%~95.8%)、83.9%(95%CI:65.5%~93.9%),特异度分别为76.5%(95%CI:48.8%~92.2%)、82.4%(95%CI:55.8%~95.3%)、94.1%(95%CI:69.2%~99.7%),符合率分别为81.2%(95%CI:68.7%~92.1%)、85.4%(95%CI:66.8%~97.2%)、87.5%(95%CI:72.1%~98.4%),Kappa值分别为0.596、0.685、0.778。结论:以临床复合标准作为参考标准,腹腔积液中设定不同T-SPOT.TB阳性阈值对结核性腹膜炎的诊断效能不同,将阳性阈值由6 SFC/10~6提升到30 SFC/10~6,诊断效能明显提升。

关键词：腹膜炎结核性免疫学试验对比研究

涂阳肺结核患者γ-干扰素释放试验假阴性的影响因素分析

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中国防痨杂志 2020年第12期42卷 1299-1304页

作者：马进宝马婷婷任斐杨翰谭淦纹西安市胸科医院耐药结核科 710100 西安市胸科医院妇儿结核科 710100 西安市胸科医院检验科 710100 西安市胸科医院影像科 710100

目的分析γ-干扰素释放试验(IGRA)检测痰涂阳肺结核患者出现假阴性结果的影响因素。方法搜集2019年6-12月就诊于西安市胸科医院的196例痰涂阳肺结核患者作为研究对象,其中,男145例(74.0%),女51例(26.0%);年龄中位数(四分位数)[M(Q1,Q3)]... 详细信息

目的分析γ-干扰素释放试验(IGRA)检测痰涂阳肺结核患者出现假阴性结果的影响因素。方法搜集2019年6-12月就诊于西安市胸科医院的196例痰涂阳肺结核患者作为研究对象,其中,男145例(74.0%),女51例(26.0%);年龄中位数(四分位数)[M(Q1,Q3)]为38(26,53)岁。按IGRA检测结果分为IGRA检测阳性组(106例)和假阴性组(90例)。收集研究对象一般资料、临床症状、实验室检验资料,以及胸部CT表现,采用多因素logistic回归分析IGRA检测痰涂阳肺结核患者出现假阴性结果的影响因素。结果196例研究对象中,IGRA检测阳性106例,阳性率为54.1%。IGRA阳性组白细胞计数的M(Q1,Q3)为6.3(5.0,7.5)×10^(9)个/L,低于IGRA假阴性组的7.4(5.8,9.2)×10^(9)个/L,差异有统计学意义(Z=-3.464,P=0.001);血红细胞沉降率的M(Q1,Q3)为34.5(16.0,58.0)mm/1 h,低于IGRA假阴性组的53.0(31.8,84.3)mm/1 h,差异有统计学意义(Z=-3.492,P=0.000);CD4^(+)T淋巴细胞计数的M(Q1,Q3)为553(371,737)个/μl,高于IGRA假阴性组的432(320,645)个/μl,差异有统计学意义(Z=-2.080,P=0.038)。多因素logistic回归分析显示,白细胞计数≥7.0×10^(9)个/L[OR(95%CI)=3.003(1.6185.572)]、ESR≥40 mm/1 h[OR(95%CI)=2.270(1.2284.195)]、CD4^(+)T淋巴细胞计数<400个/μl[OR(95%CI)=2.198(1.155~4.181)]是影响IGRA检测痰涂阳肺结核患者出现假阴性结果的独立危险因素。结论白细胞计数升高、血红细胞沉降率升高、CD4^(+)T淋巴细胞计数降低是IGRA检测涂阳肺结核患者出现假阴性结果的危险因素,临床应用IGRA辅助结核病诊断时需结合患者情况综合分析。

关键词：结核,肺干扰素γ 免疫学试验危险因素因素分析,统计学

日本血吸虫重组表膜蛋白Tetraspanin 2免疫诊断价值初探

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中国地方病学杂志 2010年第6期29卷 627-630页

作者：张云霞赵志荣安徽省马鞍山市疾病预防控制中心健康教育科 243000

目的探讨日本血吸虫重组表膜蛋白Tetraspanin 2（rSjTsp2）作为免疫诊断抗原的潜能.方法利用表达纯化的rSjTsp2建立间接ELISA法（rSjTsp2-ELISA）检测不同感染时期的感染日本血吸虫家兔血清特异性IgG抗体,并与成虫粗抗原（AWA）-ELIS... 详细信息

目的探讨日本血吸虫重组表膜蛋白Tetraspanin 2（rSjTsp2）作为免疫诊断抗原的潜能.方法利用表达纯化的rSjTsp2建立间接ELISA法（rSjTsp2-ELISA）检测不同感染时期的感染日本血吸虫家兔血清特异性IgG抗体,并与成虫粗抗原（AWA）-ELISA法进行比较.结果 rSjTsp2-ELISA对感染日本血吸虫2、4、6周家兔血清特异性IgG抗体检测的敏感性分别为75.4%（46/61）、77.6%（45/58）和81.5%（44/54）,AWA-ELISA法敏感性分别为68.9%（42/61）、86.2%（50/58）和88.9%（48/54）,同一时期两种方法检测抗体的效果比较,差异无统计学意义（x2值分别为0.652、1.454、1.174,P均＞0.05）.结论体外成功表达了日本血吸虫表膜蛋白rSjTsp2,其原核表达重组蛋白具有一定的诊断应用潜能.

关键词：血吸虫日本膜蛋白质类免疫学试验酶联免疫吸附测定

重组结核杆菌融合蛋白(EC)的免疫特性和临床前安全性研究

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中国防痨杂志 2020年第8期42卷 807-813页

作者：张凯陶立峰韦芬都伟欣仇晶晶陈伟陈保文朱银猛程兴苏城钟再新卢锦标蒲江安徽智飞龙科马生物制药有限公司合肥230000 中国食品药品检定研究院结核病疫苗和过敏原产品室中国医学科学院生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

目的通过对重组结核杆菌融合蛋白(EC)[该制品名称是国家药典委员会确定的药品中文通用名称,"EC"为重组融合蛋白"结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)"](简称"EC")的免疫特性和临床前安全性研究,探讨其临床... 详细信息

目的通过对重组结核杆菌融合蛋白(EC)[该制品名称是国家药典委员会确定的药品中文通用名称,"EC"为重组融合蛋白"结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)"](简称"EC")的免疫特性和临床前安全性研究,探讨其临床应用前景。方法(1)免疫特性研究:取6只雌性豚鼠,使用结核分枝杆菌H37Ra活菌菌液致敏,5周后,皮内注射2.5μg/ml EC原液0.2ml;取4只雌性豚鼠,使用卡介菌活菌菌液致敏,5周后,皮内注射20μg/ml EC原液0.2ml;观察注射部位平均硬结或红晕反应直径[(纵径+横径)/2],≥5mm判为阳性,试验:取80只ICR[(美国)Institute of Cancer Research]小鼠,分为单次肌内和皮内注射组,每组40只,雌雄各半;每组再分为4组,每组10只,雌雄各半。高剂量组(注射EC53.61μg/0.1ml)、低剂量组(注射EC 0.2μg/0.1ml)、溶剂对照组(注射EC稀释液0.1ml)、空白对照组(不给予任何受试物),观察小鼠的外观、运动功能、体质量、各脏器和药物注射部位皮肤等是否有异常。(3)豚鼠全身主动过敏试验:取豚鼠24只,分为4组,每组6只,雌雄各半,各组豚鼠分别隔日腹腔注射高剂量(5μg/kg)EC、低剂量(0.5μg/kg)EC、牛血清白蛋白(60mg)和0.9%NaCl(质量分数为0.9%的NaCl溶液)注射液(2ml),连续3次。致敏结束,末次致敏后第12天静脉快速注射2倍致敏剂量对以上相应的各组致敏豚鼠进行激发。致敏期间,每天观察豚鼠的症状,并于初次和最后一次致敏及激发当日测定每只豚鼠的体质量。(4)皮内刺激试验:取6只新西兰兔,单次皮内注射EC 10μg(0.2ml)/点,每侧5个点,观察皮内注射后的刺激反应情况。结果(1)免疫特性研究结果:EC原液对卡介菌活菌菌液致敏的4只豚鼠的皮肤试验,阳性为0只;EC原液对结核分枝杆菌H37Ra活菌菌液致敏的6只豚鼠的皮肤试验,阳性为6只。(2)急性毒性试验结果:所有小鼠未出现明显的急性中毒反应和显示急性中毒靶器官。小鼠皮内注射EC前、注射EC后1d、3d、5d、7d、8d、10d、12d、14d高剂量组、低剂量组小鼠平均体质量分别为(20.6±1.3)g^(24.9±2.1)g、(20.5±1.6)g^(26.0±3.1)g;注射后不同观察时间各组平均体质量与空白对照组[(21.0±1.1)g^(25.3±2.3)g]比较差异均无统计学意义(t值分别为0.571~0.392,0.695~0.615;P值分别为0.575~0.700,0.496~0.546);小鼠肌内注射EC前、注射EC后1d、3d、5d、7d、8d、10d、12d、14d高剂量组、低剂量组小鼠平均体质量分别为(21.0±1.5)g^(26.2±1.9)g、(20.5±2.1)g^(25.8±3.8)g;注射后不同观察时间各组平均体质量与空白对照组[(21.2±1.7)g^(25.8±3.1)g]比较差异均无统计学意义(t值分别为0.360~0.318,0.900~0.006;P值分别为0.723~0.754,0.380~0.995)。(3)豚鼠全身主动过敏试验结果:豚鼠无过敏反应。高剂量组、低剂量组豚鼠首次致敏、末次致敏、激发的平均体质量分别为(327.5±24.3)g、(347.2±32.7)g、(402.2±34.9)g;(331.3±26.7)g、(346.2±32.0)g、(411.3±38.9)g,与相应观察时间注射0.9%NaCl的阴性对照组[(329.5±27.4)g、(348.3±27.0)g、(399.4±25.4)g]比较,差异均无统计学意义(t值分别为0.328、0.181、0.284,0.474、0.366、0.875;P值分别为0.757、0.864、0.788,0.656、0.730、0.422)。(4)兔皮内刺激试验结果:单次皮内注射10μg(0.2ml)/点EC,无明显刺激反应。结论EC能够鉴别结核感染与卡介苗免疫,临床前动物试验安全性好,有望应用于人群结核感染的诊断与鉴别诊断。

关键词：重组结核杆菌融合蛋白(EC) 分枝杆菌结核动物实验免疫学试验免疫活性药物评价临床前