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己烷雌酚免疫原的合成及其鼠源抗血清的制备

中国生物制品学杂志 2019年第7期32卷 798-802页

作者：杨兴东段宇莹李琳周口师范学院食品药品检验检测中心

目的合成己烷雌酚(hexestrol,HES)免疫原,并制备其鼠源多抗血清。方法在HES的适当位点上引入活性基团羧基(-COOH)得到HES的半抗原,采用EDC/NHS法合成人工免疫原HES-BSA和检测抗原HES-OVA,经紫外扫描和SDS-PAGE鉴定HES与载体蛋白BSA、OV... 详细信息

目的合成己烷雌酚(hexestrol,HES)免疫原,并制备其鼠源多抗血清。方法在HES的适当位点上引入活性基团羧基(-COOH)得到HES的半抗原,采用EDC/NHS法合成人工免疫原HES-BSA和检测抗原HES-OVA,经紫外扫描和SDS-PAGE鉴定HES与载体蛋白BSA、OVA是否成功偶联;用免疫原(HES-BSA)免疫3只BALB/c小鼠,获得抗HES多抗血清(polyclonal antibody serum,pAbs),ELISA法检测其效价,间接竞争ELISA法检测其敏感性,交叉反应(cross-reactivity,CR)试验检测其特异性。结果免疫的1号小鼠pAbs效价达到1.28×10^4,2号和3号小鼠均在6.4×10^3以上;1号小鼠HES pAbs对HES的50%抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)为19.93 ng/mL,除与己烯雌酚有11.63%的CR外,与其他结构类似物无CR。结论获得了效价高及敏感、特异的多抗血清,为进一步的免疫学快速检测提供了技术支持。

关键词：己烷雌酚免疫原抗血清 ELISA

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疫苗免疫原的研究进展和趋势

中国科学基金 2020年第5期34卷 554-564页

作者：李婷婷柳欣林张芝晴何茂洲张天英顾颖李少伟夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心/公共卫生学院/生命科学学院厦门361102

疫苗是预防和控制传染病最为经济有效的手段,也是肿瘤、代谢性疾病、老年认知性疾病等慢性病具有潜力的防治手段。免疫原作为疫苗最为关键的要素,决定了疫苗效应的特异性和靶向性。以新型冠状病毒全球大流行为代表的重大、多发、高发、... 详细信息

疫苗是预防和控制传染病最为经济有效的手段,也是肿瘤、代谢性疾病、老年认知性疾病等慢性病具有潜力的防治手段。免疫原作为疫苗最为关键的要素,决定了疫苗效应的特异性和靶向性。以新型冠状病毒全球大流行为代表的重大、多发、高发、新发传染病的持续出现,给疫苗研发带来了巨大的挑战。免疫原选择和设计的理论依据不足是创新疫苗研究的共性关键科学问题。本文梳理了国内外近年来在疫苗免疫原研究方面的进展,指出在新一代疫苗革命背景下免疫原研究趋势和研究前沿。结合当前复杂免疫原的研究难点,提出了未来工作的建议,如:利用现代疫苗学相关的交叉前沿和创新,重点开展新型疫苗靶标发现、免疫原性精准设计理论、新型免疫增强或调控技术、仿人免疫评价体系和人体疫苗免疫应答机制等领域的工作。

关键词：疫苗免疫原免疫原性理性设计

具有医学危害的有毒动物新型免疫原和毒素疫苗研究进展

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中国生物制品学杂志 2019年第2期32卷 215-219页

作者：张志晓张希郑颖范泉水成都军区疾病预防控制中心云南昆明650118 云南中医学院中药学院云南昆明650504

每年因有毒动物咬伤引发严重临床症状甚至死亡的病例众多。到目前为止,世界公认的最有效的救治药物为抗血清。但传统的抗血清往往通过采用有毒动物成分复杂的全毒免疫马和羊等动物获得,效价受到一定影响;另外,用于患者时不可避免地存在... 详细信息

每年因有毒动物咬伤引发严重临床症状甚至死亡的病例众多。到目前为止,世界公认的最有效的救治药物为抗血清。但传统的抗血清往往通过采用有毒动物成分复杂的全毒免疫马和羊等动物获得,效价受到一定影响;另外,用于患者时不可避免地存在异源过敏和血清病风险。而具有预防作用的毒素疫苗研究相对较少。因此,本文综述了近年来在有毒动物新型免疫原和毒素疫苗方面的研究进展,以期为制备更有效的抗血清和毒素疫苗提供参考。

关键词：毒素免疫原抗原佐剂疫苗

海豚链球菌3种免疫原对牙鲆血细胞吞噬及SOD、POD和ACP活力的影响

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中国海洋大学学报（自然科学版） 2012年第4期42卷 33-40页

作者：赵娜唐小千绳秀珍战文斌中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室山东青岛266003

本文制备海豚链球菌(Streptococcus iniae)强毒株NUF849的福尔马林灭活全菌(FKC)、胞外产物(ECPs)以及全菌与胞外产物的混合物(FKC+ECPs)3种免疫原,以其免疫牙鲆(Paralichthys olivaceus),并在免疫牙鲆后第42天分别以海豚链球菌NUF849和... 详细信息

本文制备海豚链球菌(Streptococcus iniae)强毒株NUF849的福尔马林灭活全菌(FKC)、胞外产物(ECPs)以及全菌与胞外产物的混合物(FKC+ECPs)3种免疫原,以其免疫牙鲆(Paralichthys olivaceus),并在免疫牙鲆后第42天分别以海豚链球菌NUF849和NUF812攻毒。在免疫牙鲆后第7、14、21、28、35、42天及攻毒后第7天分别取样,测定血细胞吞噬能力及血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和酸性磷酸酶(ACP)的活力,以比较3种免疫原对这些免疫指标的影响。结果显示,免疫后尤其攻毒后,红细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞等的吞噬率与吞噬指数均上升,FKC+ECPs组显著高于其他组(P免疫组SOD活力随时间延长而下降并趋于稳定,攻毒后各组数值有不同程度的升高,但FKC+ECPs组数值最低;免疫组POD活力先升高,第28天起下降,攻毒后各组均下降,FKC+ECPs组始终高于其他免疫组(P免疫组ACP活力也在免疫后第28天达到峰值,以某株NUF849攻毒后FKC+ECPs组水平上升(相对于免疫后第42天),其他组显著下降;FKC、ECPs、FKC+ECPs对菌株NUF849的相对免疫保护率分别为50%、40%和90%,对NUF812的相对免疫保护率分别为60%、30%和80%,FKC+ECPs组显著高于其他组(P免疫组均诱导了牙鲆的非特异性免疫应答,具有一定的免疫保护效果,其中FKC+ECPs组效果最佳。

关键词：海豚链球菌免疫原非特异性免疫牙鲆

免疫原快速激活系统血液固有免疫反应研究思路的演变与创新

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中国医药生物技术 2010年第1期5卷 15-18页

作者：郭峰第二军医大学附属长海医院输血科/血液免疫研究室上海200433

1953年Nelson发现人类红细胞可与特异调理过的梅毒螺旋体及肺炎双球菌结合,称为免疫黏附,并推测红细胞膜表面可能存在免疫黏附受体,免疫复合物与该受体结合可促进白细胞的吞噬作用，是宿主防御机制的一部分。后来证明此黏附受体即为C3b... 详细信息

1953年Nelson发现人类红细胞可与特异调理过的梅毒螺旋体及肺炎双球菌结合,称为免疫黏附,并推测红细胞膜表面可能存在免疫黏附受体,免疫复合物与该受体结合可促进白细胞的吞噬作用，是宿主防御机制的一部分。后来证明此黏附受体即为C3b受体（CR1、CD35）。

关键词：免疫反应激活系统免疫原演变血液宿主防御机制黏附受体肺炎双球菌

广谱新冠疫苗的免疫原:谱系嵌合-突变补丁刺突蛋白

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厦门大学学报（自然科学版） 2023年第1期62卷 1-1页

由新冠病毒(SARS-CoV-2)感染引起的肺炎持续大流行造成了巨大的公共卫生负担.目前尽管已有多个新冠疫苗上市,但SARS-CoV-2变异株的不断出现对疫苗的有效性带来了巨大挑战.重要的是,病毒刺突蛋白(S蛋白)的氨基酸突变可能导致病毒对由自... 详细信息

由新冠病毒(SARS-CoV-2)感染引起的肺炎持续大流行造成了巨大的公共卫生负担.目前尽管已有多个新冠疫苗上市,但SARS-CoV-2变异株的不断出现对疫苗的有效性带来了巨大挑战.重要的是,病毒刺突蛋白(S蛋白)的氨基酸突变可能导致病毒对由自然感染或疫苗接种诱导的免疫产生逃逸.与之前的变异株相比,Omicron(B.1.1.529)变异株(包括BA.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.2.75、BA.4和BA.5等)的传染性和免疫逃逸能力都显著增强[1-2].传统疫苗的研发思路可能难以应对SARS-CoV-2的快速变异,迫切需要发展能实现广谱保护的新冠疫苗.

关键词：疫苗接种免疫原刺突蛋白变异株传统疫苗 S蛋白公共卫生免疫逃逸

维氏气单胞菌3种免疫原对鲫鱼ACP、AKP、POD和SOD活力的影响

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黑龙江畜牧兽医 2017年第5期 12-15页

作者：毕建飞张海朋曲磊鞠安琪陈龙康元环孙武文单晓枫钱爱东吉林农业大学动物科学技术学院长春130118

为了研究维氏气单胞菌3种免疫原对鲫鱼酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活力的影响,制备维氏气单胞菌强毒株TH0426的甲醛灭活全菌(FKC)、胞外产物(ECPs)以及灭活全菌与胞外产物(FKC+ECPs)的混... 详细信息

为了研究维氏气单胞菌3种免疫原对鲫鱼酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活力的影响,制备维氏气单胞菌强毒株TH0426的甲醛灭活全菌(FKC)、胞外产物(ECPs)以及灭活全菌与胞外产物(FKC+ECPs)的混合物三种免疫原,以其免疫鲫鱼,在免疫后的7,14,21,28,35,42天分别取样,测定血清中ACP、AKP、SOD和POD活力。结果表明:免疫后四种酶活力均发生了变化。各免疫组ACP活力随时间延长升高并维持在稳定状态,FKC+ECPs组在28天达到峰值,ECPs组和FKC组在35天达到峰值;各免疫组AKP活力逐渐下降并趋于稳定;各免疫组SOD活力随时间延长先升高再下降,均在35天达到峰值;各免疫组POD活力同样随时间延长先升高再下降,在28天达到峰值。说明三种免疫原均可诱导鱼体产生非特异性免疫,而且这四种酶活力可作为评价鱼体免疫效果的指标。

关键词：维氏气单胞菌免疫原非特异性免疫酶活力鲫鱼

以Aβ4-11为免疫原制备Aβ1-42多克隆抗体

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生命科学研究 2017年第5期21卷 382-385页

作者：张松江赵献敏王权吕明惠苏少华河南中医药大学基础医学院中国河南郑州450046

β淀粉样蛋白1-42(βamyloid 1-42,Aβ1-42)是阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的主要致病蛋白,其抗体一直处于研发当中。现以Aβ4-11耦联KLH免疫2月龄雌兔,ELISA检测雌兔免疫血清中所产生的抗Aβ4-11 IgG滴度,Protein G-琼脂糖... 详细信息

β淀粉样蛋白1-42(βamyloid 1-42,Aβ1-42)是阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的主要致病蛋白,其抗体一直处于研发当中。现以Aβ4-11耦联KLH免疫2月龄雌兔,ELISA检测雌兔免疫血清中所产生的抗Aβ4-11 IgG滴度,Protein G-琼脂糖亲和层析纯化IgG,Bradford方法进行IgG蛋白含量测定,SDS-PAGE进行IgG纯度测定,最后运用所制备的多克隆抗体采用免疫组化的方法分别对正常小鼠和9月龄APP转基因小鼠进行老年斑的检测,以鉴定此抗体对Aβ1-42的特异性及亲和力。结果显示Aβ4-11具有良好的体液免疫原性,而且以其为免疫原制备的抗体对Aβ1-42表现出良好的特异性及亲和力。结果表明,以Aβ4-11亚单位片段为免疫原制备的Aβ1-42多克隆抗体,可以作为AD的一种有效研究工具,同时也为AD的诊断和治疗提供了一种新的可能。

关键词：阿尔茨海默病(AD) β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42) β淀粉样蛋白4-11(Aβ4-11) 免疫原抗体制备

产肠毒素性大肠杆菌F4-F5间接ELISA方法的建立及通用型免疫原的免疫反应研究

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产肠毒素性大肠杆菌F4-F5间接ELISA方法的建立及通用型免疫原的免...

作者：张强吉林农业大学

学位级别：硕士

猪大肠杆菌病是影响新生和断奶仔猪的重要疾病,其主要病原之一是产肠毒素性大肠杆菌（Enterotoxigenic Eseheriehia coli,ETEC）。ETEC血清型众多,主要包括k88（F4）、k99（F5）、987P（F6）、F41、O138、O139和O141等。目前对于ETEC的... 详细信息

猪大肠杆菌病是影响新生和断奶仔猪的重要疾病,其主要病原之一是产肠毒素性大肠杆菌（Enterotoxigenic Eseheriehia coli,ETEC）。ETEC血清型众多,主要包括k88（F4）、k99（F5）、987P（F6）、F41、O138、O139和O141等。目前对于ETEC的防控有抗菌药治疗、多价苗、高免血清等,但是无论是哪种防治措施都只针对某种（或者某几种）血清型,难以同时防控多个血清型。前期研究,运用反向疫苗学从II型分泌系统缺失的ETEC菌株中筛选到3个免疫原性良好的广谱靶标抗原,本研究旨在评估三个广谱免疫原混合使用的免疫效力,以不同免疫途径接种小鼠,多个血清型（本研究为F4血清型）作为攻击菌株,通过检测血清IgG和粪便SIgA,以及攻毒保护率,评价其免疫效力,为研制猪ETEC通用型疫苗奠定基础,以期同时防控多个血清型。同时构建F4-F5为检测靶标的二重间接ELISA技术,用于猪ETEC优势血清学流行病学分析提供有效手段。本研究的主要工作如下:（1）ETEC F4-F5融合基因蛋白间接ELISA方法的建立:根据GenBank中登陆F4和F5基因序列,分析保守区,优化密码子,合成F4-F5串联基因,克隆入原核表达载体,表达重组蛋白His-F4-F5。以纯化的His-F4-F5蛋白作为检测抗原,建立检测ETEC抗体的间接EIISA方法。经酶切和DNA序列分析,成功构建重组菌BL21（pCold I-F4-F5）,经SDS-PAGE和Western blot分析,融合表达的F4-F5分子量为29 kDa,与ETEC高免阳血清发生特异性反应,条带单一。经优化筛选的间接ELISA最佳反应条件为:抗原包被浓度6 ng/孔,待检血清稀释比例1:200,HRP-羊抗猪二抗的工作浓度1:15,000,5%脱脂奶封闭2 h,底物作用时间15 min。本研究建立F4-F5间接ELISA方法经过特异性试验、重复性试验和保质期试验,证明该方法具有较强的特异性、重复性和稳定性。（2）通用型免疫原的制备及小鼠实验:以原核表达系统表达大肠杆菌共有的三个蛋白,分别命名为734、739和696。将734、739和696按照1:1:1比例混合,分别与白油佐剂、水佐剂（gel 01）和粘膜免疫佐剂（LTMT）乳化制备疫苗,皮下和腹腔两种接种途径注射小鼠。二免后,攻击5MLD（minimum lethal dose）的F4。免疫前后采集血清和粪便,间接ELISA检测IgG和SIgA。攻毒后,观察小鼠的精神状态,记录死亡数,对于存活的小鼠七天后进行肠道冲洗液中SIgA的检测。结果显示:皮下免疫组,739+734+696+gel01（IV）和739+734+696+LTMT+白油（V）诱导极高滴度血清IgG,而粪便和肠道SIgA较低,其中V组SIgA滴度明显高于IV,表明LTMT通过皮下免疫仍然能够诱导粘膜抗体SIgA,但攻毒保护率（20%）明显低于IV组（80%）,原因有待分析。腹腔免疫组,696+739+734+LTMT,相比皮下免疫组739+734+696+LTMT（III）,粪便和肠道SIgA滴度相当,腹腔组诱导较高的血清IgG,说明LTMT通过皮下和腹腔接种,均能诱导SIgA。攻毒保护率,两组有较大区别,腹腔组保护率（80%）高于皮下III组（60%）。综合分析,可以初步得出结论,不管皮下免疫还是腹腔免疫,739+734+696+LTMT均是良好的多价免疫原;皮下免疫739+734+696和水佐剂gel 01乳化疫苗,是良好的多价免疫原。

关键词：肠毒素性大肠杆菌粘附素免疫原间接酶联免疫吸附实验