检索结果-南通市图书馆

腺胃型传染性支气管炎病毒的分离、鉴定及其免疫保护作用的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

腺胃型传染性支气管炎病毒的分离、鉴定及其免疫保护作用的研究

作者：王永玲山东农业大学

学位级别：硕士

1996年以来,胶东及其附近地区一些鸡群中发生了一种以鸡体慢性消瘦,腺胃严重肿大,腺胃乳头出血、溃疡为特征的疾病,发病鸡多数为30-60日龄的雏鸡,发病率为30-100%,死亡率为3%-95%不等,给养鸡业造成了巨大损失。为明确本病发生和流行的病... 详细信息

1996年以来,胶东及其附近地区一些鸡群中发生了一种以鸡体慢性消瘦,腺胃严重肿大,腺胃乳头出血、溃疡为特征的疾病,发病鸡多数为30-60日龄的雏鸡,发病率为30-100%,死亡率为3%-95%不等,给养鸡业造成了巨大损失。为明确本病发生和流行的病原,探索传染性支气管炎病毒在该病发生中的作用,为该病的防治提供理论依据,进行了本研究。研究内容包括: 1、传染性腺胃炎流行病学调查及组织病理学、超微结构的研究大量流行病学调查表明:本病有较强的水平传播能力,雏鸡和育成鸡易感,成年鸡有抵抗力。对肿胀的腺胃组织作的组织学及超微结构观察表明,感染的腺胃组织内有大量炎性细胞浸润,与鸡马立克氏病、淋巴细胞白血病有明显的不同。鸡传染性腺胃炎的发生过程中,IBV是重要的致病因子,但必需有其它疾病的协同作用时,才表现出典型的临床及剖检症状。临床分离毒株制备的油乳剂灭活疫苗对传染性腺胃炎有良好的防制效果。 2、腺胃型IBV的分离、鉴定及与呼吸型、肾型IBV的比较 1996年9月份从临床发现本病以来,先后从免疫过呼吸型和肾型IBV的发病鸡腺胃组织中分离到几十株病毒,选择其中有典型临床及剖检症状的6株病毒进行了电镜观察和鸡胚传代,初步鉴定为传染性支气管炎病毒;应用鸡胚气管环组织培养(TOC)方法对从青岛地区分离的鸡腺胃源型传支病毒(QXIBV)进行了理化特性鉴定,并与传统的呼吸型H120株和经分离鉴定的肾型H株毒株、肾型标准毒株Holt株进行了比较。结果表明,QXIBV与H120株和H株病毒理化特性基本一致,中和试验结

关键词：传染性支气管炎病毒分离鉴定油乳剂灭活疫苗免疫保护作用

堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫与和缓艾美耳球虫微线蛋白3及其结构域蛋白的免疫保护作用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫与和缓艾美耳球虫微线蛋白3及其...

作者：刘佳斌南京农业大学

学位级别：硕士

鸡球虫分为七种,对养禽业危害极大,包括堆型艾美耳球虫(***),早熟艾美耳球虫(***),巨型艾美耳球虫(***),毒害艾美耳球虫(***),和缓艾美耳球虫(***),布氏艾美耳球虫(***),柔嫩艾美耳球虫(***)。其中堆型艾美耳球虫、早熟艾美耳球虫主要... 详细信息

鸡球虫分为七种,对养禽业危害极大,包括堆型艾美耳球虫(***),早熟艾美耳球虫(***),巨型艾美耳球虫(***),毒害艾美耳球虫(***),和缓艾美耳球虫(***),布氏艾美耳球虫(***),柔嫩艾美耳球虫(***)。其中堆型艾美耳球虫、早熟艾美耳球虫主要寄生于小肠前段,巨型,毒害艾美耳球虫主要寄生于小肠中段,和缓,布氏艾美耳球虫主要寄生于小肠后段,柔嫩艾美耳球虫主要寄生于盲肠。实验室前期研究发现,顶复器的微线体分泌的微线蛋白(microneme,MIC)对鸡球虫入侵宿主细胞,具有关键作用。同时发现,MIC3蛋白不同的微线黏附重复序列(microneme adhesive regions,MAR)在虫体侵入过程中与宿主细胞的结合能力各不相同,可能是虫体侵入宿主细胞的关键分子。因此,本研究比较了堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫MIC3蛋白及其主要MAR对球虫感染的免疫保护作用,为进一步深入阐明MIC3蛋白及其MAR在虫体侵入过程中的作用提供依据,也为利用重组MAR蛋白构建新型疫苗奠定基础。本试验经原核表达和纯化,获得堆型艾美耳球虫的重组MIC3蛋白Ea MIC3、以及根据实验室前期试验选择出与小肠上皮细胞结合能力最强及最弱的结构域蛋白,Ea MAR3和Ea MAR6,巨型艾美耳球虫的重组MIC3蛋白Em MIC3、及重组结构域蛋白Em MAR2和Em MAR5,和缓艾美耳球虫的重组MIC3蛋白EmiMIC3、及重组结构域蛋白EmiMAR4和EmiMAR5,并制备其多克隆抗体。通过肌肉注射重组蛋白,翅静脉注射多克隆抗体;检测血清中Ig Y抗体水平,以及记录增重,卵囊减少率,肠病变计分等计算抗球虫指数(ACI),来评估其免疫保护作用。免疫结果显示,Ea MIC3、Ea MAR3和Ea MAR6均能够提高抗原特异性Ig Y抗体水平;重组蛋白免疫组中,Ea MIC3和Ea MAR3的ACI分别为178和165,而Ea MAR6的ACI为130;重组蛋白抗血清免疫组中,Ea MIC3和Ea MAR3的ACI分别为179和166,而Ea MAR6的ACI为158。上述结果表明,两种免疫方式与对照组相比,Ea MIC3和Ea MAR3都具有明显的免疫保护效果,在增重效果上表现尤为突出。启示MAR具有一定的免疫保护效果,可以在球虫侵入过程中发挥阻断作用,以此达到抵抗球虫感染的效果。免疫Em MIC3、Em MAR2和Em MAR5均能够提高抗原特异性Ig Y抗体水平;在腿部肌肉注射重组蛋白免疫组中,Em MIC3和Em MAR2的ACI分别为180和170,而Em MAR5的ACI为137;翅静脉注射重组蛋白抗血清免疫组中,Em MIC3和Em MAR2的ACI分别为180和164,而MAR5的ACI为137。上述结果表明,不管是重组蛋白免疫组还是重组蛋白抗血清免疫组,与对照组相比,Em MIC3和Em MAR2都具有较好的免疫保护效果,其中增重效果尤为明显。启示MAR在球虫侵入过程中,可能通过阻断作用,发挥较好的免疫保护能力。免疫EmiMIC3、EmiMAR4和EmiMAR5均能够提高抗原特异性Ig Y抗体水平;重组蛋白免疫组中,EmiMIC3和EmiMAR4的ACI分别为172和164,而EmiMAR5的ACI为153;重组蛋白抗血清免疫组中,EmiMIC3的ACI为183,而EmiMAR4和EmiMAR5的ACI的抗球虫指数为和153和142。结果表明,在两种免疫方式中,与对照组相比,EmiMIC3和EmiMAR4都具免疫保护作用,在增重方面的提升尤为明显,提示MAR在球虫寄生过程中,通过在侵入中发挥阻断作用,提供一定免疫保护能力。综上所述,Ea MIC3中Ea MAR3具有较好的免疫效果,Em MIC3的结构域蛋白中Em MAR2具有较好的免疫效果,EmiMIC3中EmiMAR4则具有较好的免疫效果。三种球虫中与肠上皮细胞结合能力强的MAR,具有一定的免疫保护作用,而结合能力弱的MAR则免疫保护能力较弱。上述结果说明,MAR的免疫保护作用与其和肠上皮细胞的结合能力一致,进一步证明了这些MAR在球虫侵入过程中的关键作用,也为亚单位疫苗抗原筛选提供了依据。

关键词：堆型艾美耳球虫巨型艾美耳球虫和缓艾美耳球虫微线蛋白结构域蛋白免疫保护作用

嗜水气单胞菌ompF和ompK的原核表达及对欧洲鳗鲡的免疫保护作用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

嗜水气单胞菌ompF和ompK的原核表达及对欧洲鳗鲡的免疫保护作用

作者：廖紫超福建农林大学

学位级别：硕士

嗜水气单胞菌是淡水养殖中的主要致病菌,可引起爆发性的败血症,给水产养殖产业带来了非常严重的经济损失。嗜水气单胞菌高效亚单位疫苗的制备和研发在减少抗生素的使用、保持水产品安全等方面具有积极的意义。本文以该菌外膜蛋白ompF和o... 详细信息

嗜水气单胞菌是淡水养殖中的主要致病菌,可引起爆发性的败血症,给水产养殖产业带来了非常严重的经济损失。嗜水气单胞菌高效亚单位疫苗的制备和研发在减少抗生素的使用、保持水产品安全等方面具有积极的意义。本文以该菌外膜蛋白ompF和ompK为研究对象,评价了其对欧洲鳗鲡的免疫保护效果,旨在为开发嗜水气单胞菌高效亚单位疫苗提供备选材料。以一株致病性鳗源嗜水气单胞菌作为研究材料,通过SDS-PAGE分析了该菌株外膜蛋白的组成,分别用欧洲鳗鲡感染嗜水气单胞菌全菌后的恢复期血清和兔抗嗜水气单胞菌外膜蛋白的血清进行Western-blot印迹分析,发现28、37、43和45 kD的4个蛋白条带都发生了阳性反应。同时通过SDS-PAGE对比了这5株不同气单胞菌的外膜蛋白组成,发现分子量为28 kD的外膜蛋白为这5株气单胞菌所共有。对含量最大的37 kD和不同菌株共有的28 kD这两种外膜蛋白进行质谱测序,匹配得到的外膜蛋白分别为ompF和ompK,以这两种外膜蛋白作为嗜水气单胞菌亚单位疫苗的进一步研究对象。以嗜水气单胞菌的总DNA作为模板,分别构建pET-32a-ompF和pET-32a-ompK两种原核表达质粒,制备得到高纯度的r-ompF和r-ompK。Western-blot证实两种重组蛋白都具有抗原性。分别用所制备的嗜水气单胞菌的重组蛋白r-ompF和r-ompK作为免疫原,腹腔注射免疫欧洲鳗鲡。在免疫后的第1h、3 h、6 h、12 h、24 h、72 h和10 d分别采取欧洲鳗鲡的肝脏组织,进行RNA的提取和逆转录,通过荧光定量PCR检测三个免疫相关基因(IRF3、IgMa1和IgMb1)的mRNA表达量。结果发现,r-ompF和r-ompK对于欧洲鳗鲡的三个免疫相关基因都具有上调作用,其中r-ompK上调幅度明显更大。在免疫后的第15d对欧洲鳗鲡进行嗜水气单胞菌活菌攻毒处理,评价r-ompF和r-ompK的免疫保护率。结果发现,r-ompF蛋白对欧洲鳗鲡的相对免疫保护率为35.3%,而r-ompK蛋白提供的相对免疫保护率可以达到70.0%。综合两种重组蛋白对欧洲鳗鲡的免疫保护效果和对其肝脏组织中三种免疫相关基因的调控作用的比较,本研究发现重组外膜蛋白r-ompK更适合于作为嗜水气单胞菌亚单位疫苗的候选成分。

关键词：嗜水气单胞菌外膜蛋白亚单位疫苗免疫保护作用

泌尿道致病性大肠埃希菌PapG重组蛋白对小鼠尿道上行感染的免疫保护作用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2005年第4期18卷 305-307页

作者：郑铃王芝敏刘超斌郑秀芬陈锦英福建医科大学病原生物学系福州350004 福建省妇幼保健院妇产科福州350001 天津医科大学天津300070

目的探讨泌尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)P菌毛粘附素PapG重组融合蛋白对小鼠尿道上行感染的免疫保护作用。方法纯化蛋白按一定程序免疫BALB/c雌性小鼠,末次免疫后第7天用UPEC临床分离株进行尿道上行攻击;攻击后第5天检测尿液和肾脏培养菌... 详细信息

目的探讨泌尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)P菌毛粘附素PapG重组融合蛋白对小鼠尿道上行感染的免疫保护作用。方法纯化蛋白按一定程序免疫BALB/c雌性小鼠,末次免疫后第7天用UPEC临床分离株进行尿道上行攻击;攻击后第5天检测尿液和肾脏培养菌,同时测定血清抗体效价。结果经GST-PapG重组蛋白和GST纯化蛋白免疫的小鼠体内均产生了相应的抗体,而仅经重组蛋白免疫的小鼠具有一定的抵抗毒株上行感染的能力,表现为肾脏培养菌量均明显减少。结论PapG粘附素与GST构成的重组融合蛋白对小鼠尿道上行感染具有一定的免疫保护作用。

关键词：泌尿道致病性大肠埃希菌PapG 重组蛋白小鼠尿道上行感染免疫保护作用粘附素

金黄色葡萄球菌Trap、IsdA、IsdB、GapC蛋白免疫保护作用比较研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

金黄色葡萄球菌Trap、IsdA、IsdB、GapC蛋白免疫保护作用比较研究

作者：杨轩黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起人和动物多种疾病的重要致病菌。一直以来人们主要采用抗生素控制和治疗***感染，但由于抗生素的广泛使用，导致耐药菌株不断出现，致使抗生素治疗几乎毫无效果。因此，研究和使用疫苗来防... 详细信息

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起人和动物多种疾病的重要致病菌。一直以来人们主要采用抗生素控制和治疗***感染，但由于抗生素的广泛使用，导致耐药菌株不断出现，致使抗生素治疗几乎毫无效果。因此，研究和使用疫苗来防制***感染已成为热点。过去的研究表明，金黄色葡萄球菌表面的TraP、IsdA、IsdB、GapC蛋白具有良好的免疫原性，为了比较金黄色葡萄球菌TRAP、IsdA、IsdB、GapC的免疫原性和免疫保护作用，应用PCR的方法，分别扩增出金黄色葡萄球菌Newman株的目的基因并进行序列分析，再将目的基因分别插入到pQE-30载体上，导入宿主菌Escherichia coliM15(pREP4)并诱导表达和纯化重组蛋白。用纯化的重组蛋白分别免疫小鼠，检测小鼠血清中抗体水平;在体外用相应的抗原刺激淋巴细胞，ELSPOT检测免疫脾淋巴细胞分泌IL-4和IFN-γ的细胞频数，ELISA检测脾细胞培养上清中IL-17的分泌水平。首次免疫后35d时用金黄色葡萄球菌Newman、Wod46、HLJ23-1株对小鼠攻毒，结果表明TraP、IsdA、IsdB、GapC重组蛋白在*** M15中均获得表达;在首次免疫后35d时血清抗体水平，免疫脾脏淋巴细胞分泌的细胞因子与对照组相比，均显著升高(P免疫保护作用。以上结果表明同一抗原对不同菌株攻毒所产生的免疫保护存在差异。

关键词：金黄色葡萄球菌 Trap IsdA IsdB GapC 免疫保护作用

经典型猪蓝耳病疫苗对高致病性蓝耳病的免疫保护作用研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

黑龙江畜牧兽医 2018年第17期 129-131页

作者：韩跃松李建喜福州大北农生物技术有限公司福州350014 江西省家畜血吸虫病防治站南昌330096

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）又称猪蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的猪的一种急性、高度接触性传染病,该病毒属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属（[1]）。临床症状主要表现为母猪发热、厌食、流产或产死胎和木乃伊胎,

关键词：猪蓝耳病猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫保护作用高致病性疫苗接触性传染病临床症状动脉炎

建立肝肠联合移植大鼠模型及移植肝对小肠的免疫保护作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南京医科大学学报（自然科学版） 2004年第2期24卷 135-136,146页

作者：肇毅成峰陆森沈历宗华一兵吴文溪南京医科大学第一附属医院普外科江苏南京210029

目的:建立新型肝肠联合移植大鼠模型,并研究移植肝是否对移植肠具有免疫保护作用。方法:肝肠联合移植切取移植物时,保留门静脉完整性,利用供体胸段下腔静脉在门静脉侧壁上建立一袖套,并安置套管。受体手术时,将此袖套与受体门静脉残端... 详细信息

目的:建立新型肝肠联合移植大鼠模型,并研究移植肝是否对移植肠具有免疫保护作用。方法:肝肠联合移植切取移植物时,保留门静脉完整性,利用供体胸段下腔静脉在门静脉侧壁上建立一袖套,并安置套管。受体手术时,将此袖套与受体门静脉残端套管法吻合。动脉重建通过供体肠系膜上动脉与受体右肾动脉端端吻合。免疫保护作用通过术后病理学检查评估。结果:用此法建立肝肠联合移植大鼠模型手术无肝期显著缩短,与Kamada双套管法肝移植无肝期相同,血流动力学影响小,手术成功率高。术后7、14天异基因小肠移植组出现重度排斥反应,而肝肠联合移植组仅表现为中度排斥。结论:用该方法建立一期大鼠肝肠联合移植模型方便可行,且成功率高。肝肠联合移植时移植肝对移植小肠具有免疫保护作用。

关键词：肝肠联合移植动物模型免疫保护作用大鼠

Prokineticin-2在脓毒症中通过调控巨噬细胞功能发挥免疫保护作用的机制研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Prokineticin-2在脓毒症中通过调控巨噬细胞功能发挥免疫保护作用...

作者：余小燕重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:脓毒症（Sepsis）的定义是宿主抗感染免疫失调引起的危及生命的器官功能障碍。脓毒症发病率高,病情凶险,病死率高,是导致感染患者死亡的主要原因。但脓毒症发病机制复杂,目前尚未明确。为研究脓毒症致病机制,近期我们通过全基因组... 详细信息

目的:脓毒症（Sepsis）的定义是宿主抗感染免疫失调引起的危及生命的器官功能障碍。脓毒症发病率高,病情凶险,病死率高,是导致感染患者死亡的主要原因。但脓毒症发病机制复杂,目前尚未明确。为研究脓毒症致病机制,近期我们通过全基因组表达谱芯片筛选到一个在脓毒症中发挥关键免疫调节作用的新分子—Prokineticin-2（PROK2或者PK2）。PK2属于Prokineticin（前动力蛋白）家族,可高表达于外周血细胞、树突状细胞、淋巴细胞等重要免疫细胞,具有调节神经发育、血管生成、炎症性疼痛等多种生物学效应,但PK2在脓毒症中的作用目前尚无相关报道。因此,本研究拟检测脓毒症患者和脓毒症小鼠中PK2的表达水平,明确其作为脓毒症诊断标志物的潜在临床价值,并进一步阐明PK2在脓毒症中发挥免疫调节作用的具体分子机制,为脓毒症机制研究提供新的实验室证据,为脓毒症的临床治疗提供新的策略。方法:从重庆医科大学附属第一医院收集47例成人脓毒症患者和30例健康体检者血清标本;从重庆医科大学附属儿童医院收集31例儿童脓毒症患者以及20例健康体检者血清标本,采用ELISA法检测血清中PK2表达水平;通过脓毒症经典动物模型-CLP术构建的小鼠脓毒症模型,ELISA检测脓毒症小鼠不同时间点血液、腹腔灌洗液（PLF）中PK2的表达规律;建模后给予鼠源性重组蛋白rmPK2,通过生存率试验、细菌载量检测、多器官组织病理评分以及器官损伤生化标志物测定来明确PK2在脓毒症中的免疫调节作用;通过流式细胞术检测炎症细胞浸润、通过吞噬杀菌实验探索PK2对巨噬细胞功能的调控,并进一步通过Western Blot实验初步揭示PK2调控巨噬细胞功能的分子机制,最终阐明PK2在脓毒症中发挥免疫调控作用的分子机制。结果:相较于成人和儿童健康体检者,成人和儿童脓毒症患者血清中的PK2水平显著降低。PK2在脓毒症小鼠血液、PLF中的表达呈时间依赖性,即感染早期呈一过性升高,随脓毒症进展逐渐降低。盲肠结扎术构建小鼠重症脓毒症模型,给予rmPK2处理后,脓毒症小鼠血液、PLF、脾中的细菌载量显著降低,并伴有肺脏、肝脏等多器官病理损伤减轻,生存率显著提高。提示在脓毒症中,PK2发挥了关键的免疫保护作用。ELISA检测发现rmPK2处理组的脓毒症小鼠外周血和PLF中多种细胞因子水平发生变化,无显著性改变,但以IL-10分泌水平降低显著,回补rmIL-10后PK2的保护作用显著减弱。流式细胞术分析PLF中的白细胞结果显示rmPK2处理后对脓毒症小鼠PLF中的白细胞总数、巨噬细胞和中性粒细胞比例无明显影响。吞噬杀伤试验结果显示rmPK处理的巨噬细胞的吞噬杀菌功能显著增强,进一步的通路研究发现PK2促进了巨噬细胞中STAT3的磷酸化水平。结论:PK2在脓毒症发生发展过程中发挥了重要的免疫保护作用。一方面,PK2通过激活STAT3调节巨噬细胞的吞噬杀伤功能,增强宿主抗菌天然免疫,改善多器官损伤情况,提高生存率;另一方面通过抑制IL-10的表达而解除重症脓毒症介导的免疫抑制,恢复巨噬细胞这种重要免疫细胞的功能,上调宿主受抑制的免疫应答能力。

关键词： Prokineticin-2 脓毒症巨噬细胞免疫保护作用

重组质粒pET-OmpU的构建、表达及其对锦鲤的免疫保护作用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

重组质粒pET-OmpU的构建、表达及其对锦鲤的免疫保护作用

作者：李世东安徽农业大学

学位级别：硕士

水产动物腹水病是由拟态弧菌(Vibrio mimicus，Vm)引起的一种重要的细菌性疾病。现阶段尚无有效的疫苗用于该病的免疫预防。外膜蛋白U（Outer membraneprotein U，OmpU）是存在于多种病原弧菌中比较保守的主要外膜蛋白，且已探明该蛋白... 详细信息

水产动物腹水病是由拟态弧菌(Vibrio mimicus，Vm)引起的一种重要的细菌性疾病。现阶段尚无有效的疫苗用于该病的免疫预防。外膜蛋白U（Outer membraneprotein U，OmpU）是存在于多种病原弧菌中比较保守的主要外膜蛋白，且已探明该蛋白是霍乱弧菌和创伤弧菌的保护性抗原。但拟态弧菌OmpU蛋白对水产动物是否具有免疫保护作用至今尚不明了。本研究利用原核表达系统成功表达了拟态弧菌安徽分离株的OmpU蛋白，并检测分析了可溶性重组OmpU蛋白的免疫原性、免疫反应性以及对实验鱼的免疫保护作用。研究结果为进一步研制拟态弧菌OmpU蛋白疫苗奠定了基础。为了制备抗拟态弧菌抗体，将04-13安徽分离株的甲醛灭活菌体（200亿个/mL）与双相乳化佐剂充分乳化制成免疫原免疫家兔。经三次免疫后，免疫兔血清中抗菌抗体的凝集价高达1:225，完全可用于后续的Western blot检测分析。为了获得高效表达的可溶性重组OmpU蛋白，首先应用SignalP在线分析软件对拟态弧菌04-13菌株OmpU基因全序列（GenBank收录号：DQ846743）进行信号肽分析，发现其5’端66bp编码的22个氨基酸组成信号肽。对此，设计特异性引物，PCR扩增切除信号肽的OmpU基因（1004bp），将PCR扩增产物定向插入pET-32a（+）载体，构建出原核表达重组质粒pET-32a-OmpU。然后采用正交试验设计L9（34）方案，通过SDS-PAGE分析培养基种类、诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度等因素对蛋白表达的影响，优化出OmpU蛋白最佳表达条件，即重组菌pET-32a-OmpU/Rosseta接种LB培养液，37℃振荡培养3h，然后加入0.5mmol/L IPTG继续诱导4h，即可获得较高表达量（496mg/L）的可溶性重组OmpU蛋白。为了分析可溶性重组OmpU蛋白的免疫原性、免疫反应性以及对实验鱼的免疫保护作用，在优化条件下诱导重组菌大量表达，使用镍离子金属螯合亲和层析柱对可溶性重组OmpU蛋白进行纯化并做Western blot分析。结果显示纯化后蛋白纯度达98%，浓度为3.2mg/mL，能与抗菌抗体发生特异性反应。以重组OmpU蛋白、标签蛋白His和灭活菌体免疫锦鲤，四免后第7天心脏采血，采用ELISA检测试剂盒测定血清IgM含量，同时以浓度为3×109cfu/mL的菌液（100LD50）人工感染锦鲤。结果显示，四免后实验鱼血清IgM含量分别为3.32mg/mL、2.95mg/mL和4.51mg/mL，与阴性血清IgM含量相比（2.39mg/mL），均有不同程度升高。OmpU蛋白免疫组和灭活菌体免疫组的鱼免疫保护率分别为73%和87%，His蛋白免疫组和PBS对照组鱼全部死亡。表明重组OmpU蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性，对实验鱼有一定的免疫保护作用。

关键词：拟态弧菌外膜蛋白U 可溶性表达锦鲤免疫保护作用