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幽门螺杆菌GroEL蛋白重组表达及表达产物小鼠免疫保护作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第4期32卷 340-345页

作者：王艳芳张慧王欢孙萍萍严杰孙爱华杭州师范大学基础医学部杭州310036 浙江树人大学生物工程学院杭州310015 浙江大学医学院病原生物学系浙江医学高等专科学校基础医学部杭州310053

目的检测幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列差异，确定重组表达的GroEL蛋白（rGroEL）抗原性、免疫反应性以及对幽门螺杆菌感染小鼠的免疫保护性。方法采用PCR及测序法了解幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列。构建幽门螺杆菌groEL基因*** ... 详细信息

目的检测幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列差异，确定重组表达的GroEL蛋白（rGroEL）抗原性、免疫反应性以及对幽门螺杆菌感染小鼠的免疫保护性。方法采用PCR及测序法了解幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列。构建幽门螺杆菌groEL基因*** BL21DE3原核表达系统，采用SDS-PAGE及凝胶图像分析系统确定rGroEL表达量，Ni-NTA亲和层析法提纯rGroEL。采用ELISA和Western blot检测rGroEL的抗原性和免疫反应性，采用幽门螺杆菌全菌为包被抗原的ELISA确定GruEL膜定位。采用幽门螺杆菌小鼠感染模型了解rGroEL免疫保护作用。结果35株幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列相似性高达99．4％～100％。rGroEL表达量可达细菌总蛋白的56％，SDS—PAGE后提纯的rGmEL在凝胶中显示为单一的条带。rGroEL可诱导家兔和小鼠产生高效价IgG抗体，同时也能被幽门螺杆菌全菌抗体（Hp-IgG）或rGroEL-IgG识别并与之结合。GroEL是幽门螺杆菌表面蛋白抗原。50、100或200μg rGroEL免疫可分别使50．0％（6／12）、75．0％（9／12）和91．7％（11／12）小鼠免于幽门螺杆菌SS1株的感染，200μg rGroEL免疫保护率（91．7％）显著高于50μg rGroEL（50．0％）（P〈0．05）。结论幽门螺杆菌GroEL蛋白是序列保守、具有良好免疫原性和免疫保护性的表面抗原，可作为基因工程疫苗候选抗原。

关键词：幽门螺杆菌 GroEL蛋白重组表达免疫保护作用

重组A型产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原的制备及初步免疫保护作用研究

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生物工程学报 2004年第1期20卷 63-65页

作者：林明辉荫俊邢洪光侯晓军王慧宋伟昆明总医院检验科昆明650032 军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

诱导表达重组工程菌pBV cpa4 0 8后 ,将表达菌体超声破碎 ,上清经 80 %饱和硫酸铵一次沉淀 ,经透析 ,上凝胶过滤层析柱进行分离纯化 ,薄层凝胶扫描结果显示 ,纯化的蛋白纯度达 95 %以上 ;用纯化蛋白免疫昆明小鼠 ,以 1 0MLD1 0 0 腹腔... 详细信息

诱导表达重组工程菌pBV cpa4 0 8后 ,将表达菌体超声破碎 ,上清经 80 %饱和硫酸铵一次沉淀 ,经透析 ,上凝胶过滤层析柱进行分离纯化 ,薄层凝胶扫描结果显示 ,纯化的蛋白纯度达 95 %以上 ;用纯化蛋白免疫昆明小鼠 ,以 1 0MLD1 0 0 腹腔进行攻击 ,被免疫小鼠获得了 10 0 %的保护。

关键词： a毒素保护性抗原免疫保护作用产气荚膜梭菌重组表达

表达幽门螺杆菌过氧化氢酶的减毒沙门氏菌疫苗株的构建及其免疫保护作用的观察

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中华医学杂志 2001年第10期81卷 613-616页

作者：廖文俊陈旻湖朱森林陈洁陈为胡品津中山医科大学附属第一医院消化内科

目的　探讨表达幽门螺杆菌 (Hp)过氧化氢酶 (KatA)的减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株在防御Hp感染中的作用。方法　构建表达KatA的重组质粒 ,用IPTG进行诱导表达 ,再将其转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1株中构建成口服活疫苗株 ,经口服免疫C5 ... 详细信息

目的　探讨表达幽门螺杆菌 (Hp)过氧化氢酶 (KatA)的减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株在防御Hp感染中的作用。方法　构建表达KatA的重组质粒 ,用IPTG进行诱导表达 ,再将其转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1株中构建成口服活疫苗株 ,经口服免疫C5 7BL/ 6小鼠 ,并以Hp悉尼株进行攻击 ,用快速尿素酶试验和Hp定量培养对胃粘膜中的Hp进行检测。结果　SDS PAGE凝胶电泳上显示一条相对分子质量约 790 0 0的新生蛋白带 ,占细菌总蛋白的 19% ,并能与抗谷胱甘肽 s 转移酶(GST)抗体发生特异性反应。动物实验结果显示 :免疫小鼠能有效防御Hp的感染。结论　表达KatA的减毒沙门氏菌疫苗株能诱导抗Hp保护性免疫反应。

关键词：幽门螺杆菌疫苗过氧化氢酶减毒沙门氏菌疫苗株构建免疫保护作用

免疫刺激序列增强日本血吸虫DNA疫苗的免疫保护作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第1期23卷 1-5页

作者：赵松朱荫昌 D.A.Harn 司进任建功殷旭仁何伟梁幼生徐明许永良江苏省血吸虫病防治研究所江苏省寄生虫分子生物学重点实验室无锡214064 哈佛大学公共卫生学院

目的　探讨免疫刺激序列在日本血吸虫Mr 2 3 0 0 0膜蛋白 (SjC2 3 )DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗血吸虫感染中的作用。　方法　将SjC2 3基因片段克隆到增加了免疫刺激序列的真核表达质粒 pcDNA3 1 CpG中 ,构建pcDNA3 1 SjC2 3 /CpG。 40... 详细信息

目的　探讨免疫刺激序列在日本血吸虫Mr 2 3 0 0 0膜蛋白 (SjC2 3 )DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗血吸虫感染中的作用。　方法　将SjC2 3基因片段克隆到增加了免疫刺激序列的真核表达质粒 pcDNA3 1 CpG中 ,构建pcDNA3 1 SjC2 3 /CpG。 40只雌性BALB/c小鼠随机分为 4组 ,① pcDNA3 1对照组 ;②pcDNA3 1 SjC2 3组 ;③ pcD NA3 1 CpG组 ;④ pcDNA3 1 SjC2 3 /CpG组。每鼠经两侧股四头肌注射质粒DNA共 10 0 μg ,隔 2周加强免疫 1次 ,共 3次。末次免疫后 4周经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴 45条 /鼠 ,45d后计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前和感染前 2d分别经尾静脉采血 ,检测IgG及IgG1、IgG2a。末次免疫后 3周取小鼠脾细胞 ,检测经伴刀豆球蛋白和SjC2 3重组蛋白刺激后小鼠白细胞介素 2 (IL 2 )、白细胞介素 4(IL 4)和γ干扰素 (IFN γ)。用51Cr释放法检测经SjC2 3重组蛋白刺激后脾细胞对小鼠淋巴瘤细胞的杀伤作用。　结果　②组和④组减虫率分别为 2 8 1%和 3 5 1% ,减卵率分别为 2 1 6%和 2 6 5 %。④组减虫率显著高于②组 (P <0 0 5 )。这两组均检测到特异性IgG ,IgG2a/IgG1比值分别为 10 1和 12 2。脾细胞经伴刀豆球蛋白和SjC2 3重组蛋白刺激后的IL 2水平 ,②组较①组、④组较③组均有升高。②组脾?

关键词：免疫刺激序列 pcDNA3 脾细胞 DNA疫苗日本血吸虫免疫保护作用小鼠白刺刀豆成虫

抗伤寒沙门菌SOD血清的制备及其免疫保护作用的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2000年第3期20卷 228-231页

作者：徐军发唐湘涓广东医学院检验系

目的　制备抗伤寒沙门菌Fe SOD血清 ,研究其免疫保护作用 ,探讨SOD与沙门菌毒力的关系。方法　用纯化的伤寒沙门菌 (Stw1)Fe SOD免疫家兔制备兔抗Fe SOD血清。利用ELISA法检测抗血清的效价。免疫电泳、双向琼脂扩散试验和抗体对酶活性... 详细信息

目的　制备抗伤寒沙门菌Fe SOD血清 ,研究其免疫保护作用 ,探讨SOD与沙门菌毒力的关系。方法　用纯化的伤寒沙门菌 (Stw1)Fe SOD免疫家兔制备兔抗Fe SOD血清。利用ELISA法检测抗血清的效价。免疫电泳、双向琼脂扩散试验和抗体对酶活性抑制试验分析抗血清的特性。用不同浓度的抗血清预先处理Stw1,然后进行小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬杀菌试验 ,并利用鼠伤寒沙门菌感染小鼠模型证明抗SOD血清的被动免疫保护作用。结果　抗血清的ELISA效价为 1∶10 2 40 ,免疫电泳结果显示纯化的Fe SOD及伤寒沙门菌无细胞溶解物与抗Fe SOD血清在相同位置各形成一条沉淀线。双向琼脂扩散试验结果显示该抗血清与牛红细胞SOD不形成沉淀线 ,抗血清对酶活性抑制试验结果显示抗血清可抑制伤寒沙门菌及鼠伤寒沙门菌无细胞溶解物中部分SOD活性 ,对牛红细胞SOD的抑制率较低。小鼠腹腔吞噬细胞对伤寒沙门菌的吞噬杀菌试验结果显示 ,经中浓度的抗血清处理的细菌在 6 0min、12 0min时和经高浓度抗血清处理的细菌在 30min、6 0min及 12 0min时CFU值明显低于对照组 (P <0 .0 1)。经抗血清处理过的 5LD5 0 鼠伤寒沙门菌攻击的小鼠 3d和 7d的存活率分别为90 %和 6 0 % ,均明显高于对照组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。

关键词：伤寒沙门菌 Fe-SOD 抗血清免疫保护作用

A型产气荚膜梭菌α毒素基因表达及其免疫保护作用的初步研究

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微生物学报 2006年第4期46卷 624-628页

作者：许崇波许崇利赵志军大连大学生物工程学院大连116622 宁夏大学生命科学学院银川750021

利用PCR技术,从A型产气荚膜梭菌标准株染色体DNA中扩增出α毒素基因,构建了含α毒素基因的重组菌株BL21(DE3)(pXETA02)。经酶切鉴定和序列测定证实,构建的表达质粒pXETA02含有α毒素基因序列。经SDS-PAGE、Western blot分析和ELISA检测... 详细信息

利用PCR技术,从A型产气荚膜梭菌标准株染色体DNA中扩增出α毒素基因,构建了含α毒素基因的重组菌株BL21(DE3)(pXETA02)。经酶切鉴定和序列测定证实,构建的表达质粒pXETA02含有α毒素基因序列。经SDS-PAGE、Western blot分析和ELISA检测,重组菌株表达的α毒素蛋白能够被α毒素单抗识别。表达优化结果表明,以IPTG为诱导剂诱导α毒素表达的优化条件是:培养基pH 7.5,培养温度37℃,IPTG浓度0.8mmol/L,菌体生长密度OD600达到0.8时加入IPTG,诱导时间5h,此时α毒素蛋白表达量为34.83%。以乳糖为诱导剂诱导α毒素表达的优化条件是:培养基pH7.5、培养温度37℃,乳糖浓度0.1g/L,菌体生长密度OD600达到0.8时加入乳糖,诱导时间5h,α毒素蛋白表达量为23.82%。动物实验结果表明,用重组菌株α毒素蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD的A型产气荚膜梭菌标准株C57-1毒素攻击。

关键词： A型产气荚膜梭菌 α毒素基因表达免疫保护作用

旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原诱导的肠道免疫保护作用研究

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中国人兽共患病学报 2023年第7期39卷 650-656页

作者：那皮沙·居热提何灵艾尼瓦尔·吾买尔白杰新疆医科大学药学院乌鲁木齐830011 重庆市奉节县医院重庆404600

目的研究旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原(Trichinella spiralis muscle larvae excretory-secretory, Ts-Es)诱导小鼠肠道保护性免疫能力以及免疫调节作用。方法 54只BALB/c小鼠随机分为3组,空白对照组、旋毛虫感染组(Ts)、旋毛虫Ts-Es抗原... 详细信息

目的研究旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原(Trichinella spiralis muscle larvae excretory-secretory, Ts-Es)诱导小鼠肠道保护性免疫能力以及免疫调节作用。方法 54只BALB/c小鼠随机分为3组,空白对照组、旋毛虫感染组(Ts)、旋毛虫Ts-Es抗原免疫组(Ts-Es)。空白组小鼠腹腔注射PBS;抗原免疫组小鼠腹腔注射0.1 mL的Ts-Es抗原与等量弗氏完全佐剂;旋毛虫感染组腹腔注射PBS和弗氏完全佐剂,每隔7 d注射1次,共3次,末次注射后7 d旋毛虫感染组和Ts-Es抗原免疫组用400条/mL旋毛虫感染性幼虫灌胃攻击感染。解剖取材,检查肠道成虫及肌肉幼虫减虫率,用HE染色法观察肠道病理变化,RT-qPCR法检测小肠中目的基因mRNA表达水平。结果与旋毛虫感染组相比Ts-Es抗原免疫组成虫和肌幼虫减虫率分别为49%(t=8.109,P0.05);与旋毛虫感染组相比Ts-Es抗原免疫组T-bet(t=4.23,P免疫组GATA3(t=6.4,P0.05)、T-bet(t=1.02,P>0.05)、IFN-γ(t=0.09,P>0.05)、IL-17A(t=1.80,P>0.05) mRNA表达量无统计学差异;肠道HE染色结果显示,与旋毛虫感染组相比抗原免疫组炎症好转,肠道HE染色结果显示,与旋毛虫感染组相比抗原免疫组炎症好转。结论 Ts-Es抗原免疫小鼠后可诱发转录因子GATA3,Foxp3相关的混合型免疫应答,并抑制旋毛虫感染引起的T-bet、RORγ-t所介导的炎症型免疫反应,抑制炎型细胞因子的释放,诱导宿主产生抗旋毛虫感染的免疫保护效果。

关键词：旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原肠道免疫免疫保护作用

可表达结核分枝杆菌融合蛋白Ag85A-ESAT-6重组卡介苗免疫保护作用研究

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免疫学杂志 2012年第11期28卷 921-925页

作者：邓仪昊何红云张本斯鲍朗大理学院基础医学院人体解剖学教研室 671000 四川大学华西感染免疫研究室成都610041

目的以Balb/c小鼠为动物模型,评价重组卡介苗新型结核病疫苗rBCG-Ag85A-ESAT-6(rBC-AE)的免疫保护效应。方法将重组卡介苗rBCG-AE免疫动物10周后,结核分枝杆菌H37Rv尾静脉注射进行感染攻击,分别于感染攻击后3、6和9周,通过观察肺组织大... 详细信息

目的以Balb/c小鼠为动物模型,评价重组卡介苗新型结核病疫苗rBCG-Ag85A-ESAT-6(rBC-AE)的免疫保护效应。方法将重组卡介苗rBCG-AE免疫动物10周后,结核分枝杆菌H37Rv尾静脉注射进行感染攻击,分别于感染攻击后3、6和9周,通过观察肺组织大体病变、脾肺组织细菌载荷量计数、肺组织抗酸染色、HE染色结合肺组织病理变化,综合评价该疫苗诱导的免疫保护作用。结果 rBCG-AE组脾肺组织细菌载荷量在各时间点均显著低于阴性对照组(PBST组,P免疫保护作用。

关键词：重组卡介苗 Ag85A ESAT-6 免疫保护作用

日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3DNA免疫保护作用的观察

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中国人兽共患病杂志 2004年第3期20卷 230-232页

作者：刘庆中沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室

目的　研究日本血吸虫 (中国大陆株 )重组信号蛋白 14 - 3- 3(rSj14 - 3- 3)DNA作为血吸虫病疫苗候选分子的潜能。方法　碱裂解法大量制备rSj14 - 3- 3和rSjGSTDNA ,将两种DNA分别免疫BALB/c小鼠进行攻击感染实验。结果　在尾蚴攻击感... 详细信息

目的　研究日本血吸虫 (中国大陆株 )重组信号蛋白 14 - 3- 3(rSj14 - 3- 3)DNA作为血吸虫病疫苗候选分子的潜能。方法　碱裂解法大量制备rSj14 - 3- 3和rSjGSTDNA ,将两种DNA分别免疫BALB/c小鼠进行攻击感染实验。结果　在尾蚴攻击感染 6w后 ,剖杀小鼠计算各组的减虫率 ,rSj14 - 3- 3DNA组为 34 2 0 % ,rSj14 - 3- 3+rSjGSTDNA组为32 4 0 % ;减卵率为 (按以上组序 ) 5 0 74 %和 5 5 2 3%。结论　重组Sj14 - 3- 3DNA具有一定的抗血吸虫病潜能 ,有可能作为日本血吸虫病的候选疫苗 ,但未见Sj14 - 3- 3、SjGST两种重组DNA的协同作用。

关键词：日本血吸虫重组信号蛋白 14—3—3 DNA 免疫保护作用