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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的原核表达、纯化及其黏膜免疫佐剂作用

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中国生物制品学杂志 2011年第12期24卷 1417-1420页

作者：崔文禹李媛媛单璞凌媛李计来徐静北京生物制品研究所第三研究室北京100024

目的原核表达、纯化大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(Heat-labile enterotoxin B subunit,LTB),并评价其黏膜免疫的佐剂作用。方法从产毒素大肠杆菌44815菌株中扩增出LTB基因,克隆至质粒pET-32a(+)中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-LTB,... 详细信息

目的原核表达、纯化大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(Heat-labile enterotoxin B subunit,LTB),并评价其黏膜免疫的佐剂作用。方法从产毒素大肠杆菌44815菌株中扩增出LTB基因,克隆至质粒pET-32a(+)中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-LTB,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,表达的LTB经纯化后进行神经节苷脂GM1结合活性及黏膜免疫佐剂活性鉴定。结果重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确;重组LTB主要为可溶性表达,表达量约占菌体总蛋白的15%;纯化的LTB纯度可达95%以上,可与兔抗CTB血清发生特异性反应,且具有GM1结合活性及良好的黏膜免疫佐剂活性。结论在大肠杆菌中成功表达了重组LTB蛋白,纯化的LTB具有良好的黏膜免疫佐剂活性。

关键词：大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位免疫,黏膜佐剂,免疫

肺炎链球菌溶血素ΔA146Ply黏膜免疫的保护效果

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中国生物制品学杂志 2011年第5期24卷 579-582页

作者：姚润崔亚利袁军王虹龚艺尹一兵张雪梅重庆医科大学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的探讨肺炎链球菌146位氨基酸缺失的溶血素ΔA146Ply蛋白的保护作用,评价其作为肺炎链球菌疫苗候选蛋白的可行性。方法将BALB/c小鼠分为2组:试验组(15μgΔA146Ply蛋白与1 mg/ml CT佐剂的混合物30μl)和对照组(PBS与CT佐剂的混合物30... 详细信息

目的探讨肺炎链球菌146位氨基酸缺失的溶血素ΔA146Ply蛋白的保护作用,评价其作为肺炎链球菌疫苗候选蛋白的可行性。方法将BALB/c小鼠分为2组:试验组(15μgΔA146Ply蛋白与1 mg/ml CT佐剂的混合物30μl)和对照组(PBS与CT佐剂的混合物30μl),经鼻腔免疫小鼠,每周1次,连续4周。末次免疫1周后,ELISA检测免疫小鼠血清及唾液中特异性抗体水平;并进行ΔA146Ply对多种血清型肺炎链球菌感染的主动保护试验及其特异性抗血清的被动保护试验;West-ern blot分析Ply蛋白在肺炎链球菌中的保守性;间接ELISA检测免疫小鼠血清IgG抗体亚型和细胞因子IL-17A水平。结果试验组小鼠血清中IgG效价为5.12×105,唾液中IgG及IgA效价分别为4.0×103和4.8×103;ΔA146Ply黏膜免疫可有效延长小鼠的生存时间,并提高其生存率;其对肺炎链球菌NCTC7466、CMCC(B)31436、CMCC(B)31614和CMCC(B)31207的保护率分别为50.0%、41.7%、50.0%和41.7%;被动免疫保护试验试验组小鼠的存活率为70%;ΔA146Ply黏膜免疫诱导的抗体亚型主要为IgG1和IgG2b,IL-17A的水平高达(678.55±189)pg/ml,于刺激后48 h达峰值。Ply在4种菌株中均具有良好的保守性。结论ΔA146Ply黏膜免疫可诱导小鼠产生体液免疫和细胞免疫反应,能有效抵抗多株致病性肺炎链球菌的感染,提示ΔA146Ply是肺炎链球菌较好的疫苗候选蛋白。

关键词：链球菌,肺炎链球菌溶血素类免疫,黏膜保护效果小鼠

人类免疫缺陷病毒DNA疫苗黏膜免疫小鼠免疫力研究

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中华医学杂志 2006年第44期86卷 3109-3113页

作者：黄相刚徐建青任莉仇超张宁刘连兴万延民彭虹邵一鸣中国疾病预防控制中心性病与艾滋病预防控制中心中国疾病预防控制中心传染病预防控制国家重点实验室北京100050

目的以人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）疫苗免疫BALB／c（H-2^d）小鼠为模型，探讨有效活化黏膜与系统免疫力的策略。方法将6～8周龄BALB／c小鼠随机分为6组，每组3只；利用DNA疫苗加或不加疫苗佐剂滴鼻途径进行黏膜引导免疫，利用重组痘... 详细信息

目的以人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）疫苗免疫BALB／c（H-2^d）小鼠为模型，探讨有效活化黏膜与系统免疫力的策略。方法将6～8周龄BALB／c小鼠随机分为6组，每组3只；利用DNA疫苗加或不加疫苗佐剂滴鼻途径进行黏膜引导免疫，利用重组痘苗天坛株疫苗进行系统加强的策略以提高机体免疫反应。DNA疫苗免疫时间是0、14、28d，剂量每只小鼠10μg/次；重组痘苗病毒加强免疫时间是第42天，剂量每只小鼠1×10^7PFU／次。初次免疫后第56天处死小鼠。ELISPOT和胞内染色测定T淋巴细胞免疫反应；ELISA法测血清特异的IgG和鼻咽部、肺部灌洗液特异的IgA。结果单独DNA疫苗黏膜免疫后只活化微弱的系统T细胞免疫（2±1）斑点形成细胞（spotformingcells．SFC／10^6个细胞），黏膜共同施用霍乱毒素可提高相应的系统T细胞免疫力（14±11SFC／10^6个细胞），重组痘苗天坛株疫苗系统加强后，分泌γ-干扰素（IFN-γ）的特异性T淋巴细胞升高4．5倍（61±35 SFC／10^6个细胞）；胞内染色可获得1．8％±1．4％HIV-1 Gag特异性CD8^＋T细胞免疫反应，同时，血清中特异性IgG抗体与肺部灌洗液的特异性IgA抗体水平在痘苗天坛株疫苗系统加强后分别提高2倍[吸光度（A）值：1．5±0．3]和2．5倍（A值：1．8±0．8）。结论黏膜进行引导免疫并辅以系统加强的免疫策略可诱发有效的黏膜、系统体液免疫反应和T淋巴细胞免疫。

关键词： HIV-1 疫苗,DNA 免疫,黏膜

黏膜免疫及其相关因素在IgA肾病进展的作用

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中华临床医师杂志（电子版） 2016年第20期10卷 3100-3102页

作者：伍刚刘昌华徐道亮高波朱合毕光宇扬州大学临床医学院苏北人民医院肾脏内科江苏省225001

IgA肾病由于发病机制不清,临床上缺乏对其针对性的治疗方法,有大量的证据认为异常糖基化IgA1可能是导致其发病的关键因素。黏膜免疫紊乱,其相关影响因子,如C1Gal T1、ST6Gal NAc2及记忆B细胞等,被认为能导致异常糖基化IgA1并在其发病机... 详细信息

IgA肾病由于发病机制不清,临床上缺乏对其针对性的治疗方法,有大量的证据认为异常糖基化IgA1可能是导致其发病的关键因素。黏膜免疫紊乱,其相关影响因子,如C1Gal T1、ST6Gal NAc2及记忆B细胞等,被认为能导致异常糖基化IgA1并在其发病机制中扮演着重要角色,那么其在影响异常糖基化IgA1到底起到了什么样的作用,我们对其最新进展进行了较为详细的阐述。

关键词：肾小球肾炎,IgA 免疫,黏膜异常糖基化IgA1

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支气管哮喘发病的黏膜免疫机制研究进展

实用儿科临床杂志 2007年第21期22卷 1662-1664页

作者：孙雯俞建复旦大学附属儿科医院中医科上海200032

无论哮喘发作期还是缓解期,黏膜免疫系统均会对其作出相应的应答反应。γδT细胞所分泌细胞因子在种类上和数量上均会有所变化,肥大细胞脱颗粒亦会受到影响,IgA、肺表面活性蛋白、防御素等活性物质也异于正常。因此,哮喘发病黏膜免疫机... 详细信息

无论哮喘发作期还是缓解期,黏膜免疫系统均会对其作出相应的应答反应。γδT细胞所分泌细胞因子在种类上和数量上均会有所变化,肥大细胞脱颗粒亦会受到影响,IgA、肺表面活性蛋白、防御素等活性物质也异于正常。因此,哮喘发病黏膜免疫机制是复杂的和多环节的。

关键词：哮喘免疫,黏膜机制

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急性呼吸窘迫综合征中的黏膜免疫

临床荟萃 2015年第6期30卷 718-720页

作者：王冠牛丙寅孙亚雄首都医科大学附属北京潞河医院重症医学科北京101149

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是临床上常见的急危重症,是肺组织受到直接或间接因素打击后,炎症反应过度进行,导致肺毛细血管通透性增加、肺水肿、肺透明膜变性和肺的纤维化。ARDS病死率高、存活者多遗有不同程度的肺功能障碍,而目前临床治... 详细信息

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是临床上常见的急危重症,是肺组织受到直接或间接因素打击后,炎症反应过度进行,导致肺毛细血管通透性增加、肺水肿、肺透明膜变性和肺的纤维化。ARDS病死率高、存活者多遗有不同程度的肺功能障碍,而目前临床治疗手段尚不足以从根本上治愈该病症。考虑到ARDS的主要损害发生在肺组织黏膜表面,从黏膜免疫的角度研究ARDS的发病机制,可能有助于开辟新的治疗方法,从而产生相应的社会和经济效益。

关键词：呼吸窘迫综合征,成人免疫,黏膜

吸入性糖皮质激素与呼吸道黏膜免疫系统的关系

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国际呼吸杂志 2014年第1期34卷 69-73页

作者：赵长芳张力燕徐鸥昆明医科大学第一附属医院呼吸内科 650032

呼吸道黏膜免疫系统（respiratory passage mucosa immune system，RMIS）是黏膜免疫系统的重要组成部分，它是保护机体免于病原体侵犯的重要屏障，其中分泌型IgA（sIgA）起到了重要作用。吸入皮质激素（ICSs）在慢性炎症性气道疾病中... 详细信息

呼吸道黏膜免疫系统（respiratory passage mucosa immune system，RMIS）是黏膜免疫系统的重要组成部分，它是保护机体免于病原体侵犯的重要屏障，其中分泌型IgA（sIgA）起到了重要作用。吸入皮质激素（ICSs）在慢性炎症性气道疾病中得到了广泛的运用。综述从RMIS的组成、sIgA的功能、口腔微生态以及ICSs对支气管黏膜免疫的影响等方面进行讨论，旨在更好的认识呼吸道黏膜免疫功能以及更好的使用ICSs。

关键词：免疫,黏膜吸入糖皮质激素免疫球蛋白A,分泌微生物学

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树突状细胞与生殖道黏膜免疫

国际妇产科学杂志 2011年第5期38卷 402-406页

作者：李莉黄丽丽浙江省肿瘤医院杭州310022 浙江大学医学院附属妇产科医院

树突状细胞是机体内功能最强大的抗原提呈细胞,广泛分布于机体黏膜表面,在固有免疫应答和适应性免疫应答中发挥重要作用。女性生殖道黏膜免疫既涉及对外来病原体的免疫防御,又涉及到对同种异体的精子及半同种异体移植物(胚胎)的免疫耐受... 详细信息

树突状细胞是机体内功能最强大的抗原提呈细胞,广泛分布于机体黏膜表面,在固有免疫应答和适应性免疫应答中发挥重要作用。女性生殖道黏膜免疫既涉及对外来病原体的免疫防御,又涉及到对同种异体的精子及半同种异体移植物(胚胎)的免疫耐受,必然具有特殊的免疫学机制。综述树突状细胞与生殖道黏膜免疫研究进展。

关键词：树突细胞生殖器,女(雌)性免疫,黏膜孕妇免疫耐受

重组乳酸菌抗原递送方式及黏膜免疫效果研究进展

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国际生物制品学杂志 2008年第2期31卷 54-57页

作者：靖吉芳张艳南华大学病原生物研究所

乳酸菌是一类能利用碳水化合物产生乳酸的革兰阳性菌的统称。作为重要的益生菌,乳酸菌已被广泛应用到食品工业、生物制药、疫苗研制等各个领域,是公认安全的食品级微生物。随着基因工程技术的发展,乳酸菌已被广泛用作基因工程宿主菌,用... 详细信息

乳酸菌是一类能利用碳水化合物产生乳酸的革兰阳性菌的统称。作为重要的益生菌,乳酸菌已被广泛应用到食品工业、生物制药、疫苗研制等各个领域,是公认安全的食品级微生物。随着基因工程技术的发展,乳酸菌已被广泛用作基因工程宿主菌,用于表达多种生物多肽和蛋白,并成为向黏膜免疫系统递送抗原的理想菌株。抗原的细胞定位可影响其免疫原性,近年来一系列递送系统的建立,可将异源蛋白和抗原靶向表达于乳酸菌胞质、细胞壁和胞外培养基。本文就重组乳酸菌这三种抗原递送方式及其对蛋白表达量和免疫原性的影响作一综述。

关键词：乳球菌,乳免疫,黏膜疫苗抗原