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克隆化LAK细胞及其培养上清对白血病细胞的细胞毒和分化诱导作用

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上海免疫学杂志 1994年第6期14卷 328-331页

作者：李秀森江飞子张明伟毛宁杜德林北京军事医学科学院基础医学研究所

用半固体－液体两步法克隆的人ＬＡＫ细胞不仅表现对ＮＫ敏感的Ｋ５６２细胞和ＮＫ抵抗的ＨＬ－６０细胞强烈的细胞毒性，在二次杀瘤过程中表现同样高的活性，而且ＬＡＫ细胞培养上清对白血病细胞系ＨＬ－６０和新鲜白血病细胞具有增殖... 详细信息

用半固体－液体两步法克隆的人ＬＡＫ细胞不仅表现对ＮＫ敏感的Ｋ５６２细胞和ＮＫ抵抗的ＨＬ－６０细胞强烈的细胞毒性，在二次杀瘤过程中表现同样高的活性，而且ＬＡＫ细胞培养上清对白血病细胞系ＨＬ－６０和新鲜白血病细胞具有增殖抑制和分化诱导作用。然而不同杀伤活性的ＬＡＫ细胞培养上清对新鲜白血病细胞增殖的影响不同。结果表明ＬＡＫ细胞在直接杀伤白血病细胞的同时，还通过分泌一些活性因子间接影响白血病细胞的增殖和促进其分化成熟，反映了ＬＡＫ细胞抗白血病作用的多向性。

关键词：克隆化自然杀伤细胞白血病细胞细胞毒

慢性乙型肝炎患者外周血CD8^+T细胞TCR Vβ基因亚家族克隆化的研究

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中国免疫学杂志 2011年第8期27卷 751-756页

作者：熊英宋玉国毕胜利谭岩北华大学生命科学研究中心吉林132011 北华大学医学部吉林132011 吉林省人民医院医学诊治实验中心长春130021

目的:分析慢性乙型肝炎(CHB)患者CD8+T细胞TCR Vβ基因亚家族克隆化特征。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增8例CHB患者外周血CD8+T细胞TCR Vβ基因22个亚家族的CDR3区,基因扫描技术对TCR Vβ亚家族的克隆化进行鉴定。结果:基... 详细信息

目的:分析慢性乙型肝炎(CHB)患者CD8+T细胞TCR Vβ基因亚家族克隆化特征。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增8例CHB患者外周血CD8+T细胞TCR Vβ基因22个亚家族的CDR3区,基因扫描技术对TCR Vβ亚家族的克隆化进行鉴定。结果:基因扫描显示所有8例CHB患者CD8+T细胞TCR Vβ基因亚家族均出现一个或一个以上单克隆或寡克隆增生。Vβ8、Vβ11、Vβ12出现单克隆增生的频率相对较高。8例健康者TCR Vβ基因亚家族均为多克隆。结论:CHB患者外周血CD8+T细胞TCR Vβ亚家族存在克隆性增生。

关键词：慢性乙型肝炎 T细胞抗原受体 Vβ基因互补决定区3(CDR3) 克隆化

HBxAg反式调节基因11剪切体的克隆化及生物信息学分析

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中国生化药物杂志 2011年第3期32卷 183-186页

作者：尹丽林原唐泽耀成军大连医科大学药学院药理学教研室辽宁大连116044 新疆维吾尔自治区食品药品检验所新疆乌鲁木齐830003 北京地坛医院传染病研究所北京100015

目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白反式调节的靶基因11(XTP11),获得未知功能的新基因-XTP11剪切体,对其进行生物信息学分析,探讨其结构和功能。方法从肝母细胞瘤细胞系HepG2中提取总RNA,逆转录为cDNA后,设计特异性引物克隆XTP11剪切体,生... 详细信息

目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白反式调节的靶基因11(XTP11),获得未知功能的新基因-XTP11剪切体,对其进行生物信息学分析,探讨其结构和功能。方法从肝母细胞瘤细胞系HepG2中提取总RNA,逆转录为cDNA后,设计特异性引物克隆XTP11剪切体,生物信息学技术获得编码序列、物理化学性质、蛋白质结构和功能等基本信息。结果成功扩增出XTP11剪切体基因,生物信息学分析推定ORF为1 314个核苷酸,编码产物为437个氨基酸残基。结论此文发现并鉴定了HBV XTP11剪切体,为阐明其在HBV X蛋白致病机制中的作用提供新的研究线索。

关键词：乙型肝炎病毒剪切体克隆化生物信息学

无症状HBV携带者外周血CD4^+TCR Vβ基因亚家族克隆化特征的研究

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现代免疫学 2012年第1期32卷 41-45页

作者：熊英宋玉国孙新毕胜利北华大学生命科学研究中心吉林132011 北华大学医学部吉林132011

分析无症状HBV携带者(AsC)CD4+TCR Vβ基因家族克隆化特征。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增7例AsC外周血CD4+TCR Vβ基因22个亚家族的CDR3区,基因扫描技术对CD4+TCR Vβ亚家族的克隆化进行鉴定。结果基因扫描显示,7例AsC CD4+TCR ... 详细信息

分析无症状HBV携带者(AsC)CD4+TCR Vβ基因家族克隆化特征。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增7例AsC外周血CD4+TCR Vβ基因22个亚家族的CDR3区,基因扫描技术对CD4+TCR Vβ亚家族的克隆化进行鉴定。结果基因扫描显示,7例AsC CD4+TCR Vβ基因亚家族均出现一个或一个以上单克隆或寡克隆增生;7例健康者CD4+TCR Vβ基因亚家族均呈正态分布。提示,AsC外周血CD4+TCR Vβ亚家族存在克隆性增生,这可能与AsC免疫耐受的形成有关。

关键词：无症状HBV携带者 T细胞抗原受体(TCR) Vβ基因互补决定区3(CDR3) 克隆化

丙型肝炎病毒F蛋白结合蛋白1基因的克隆化与序列分析

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解放军医学杂志 2007年第1期32卷 23-25页

作者：吴媛洪源成军陶明亮楚雍烈西安交通大学微生物与免疫学室西安710061 北京地坛医院传染病研究所

目的对命名为F蛋白结合蛋白1(FBP1)的未知基因,克隆其全长基因并进行生物信息学分析。方法应用酵母双杂交技术得到FBP1,应用分子生物学技术克隆FBP1的基因编码序列。结果经酶切和测序鉴定,结果完全正确,成功克隆了FBP1的基因编码序。结... 详细信息

目的对命名为F蛋白结合蛋白1(FBP1)的未知基因,克隆其全长基因并进行生物信息学分析。方法应用酵母双杂交技术得到FBP1,应用分子生物学技术克隆FBP1的基因编码序列。结果经酶切和测序鉴定,结果完全正确,成功克隆了FBP1的基因编码序。结论FBP1通过与F蛋白结合,在病毒蛋白与宿主细胞蛋白相互作用过程中发挥重要作用。

关键词：肝炎病毒 F蛋白结合蛋白1 克隆化序列分析

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因的克隆化研究

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解放军医学杂志 2003年第1期28卷 40-43页

作者：刘妍陆荫英成军王建军李莉张玲霞解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心

应用抑制性消减杂交技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白 5A(HCVNS5A)反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,克隆HCVNS5A蛋白反式激活相关基因。以HCVNS5A表达质粒pcDNA3 1(- ) NS5A转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1(- )为对照 ,制备转染... 详细信息

应用抑制性消减杂交技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白 5A(HCVNS5A)反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,克隆HCVNS5A蛋白反式激活相关基因。以HCVNS5A表达质粒pcDNA3 1(- ) NS5A转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1(- )为对照 ,制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,经RsaI酶切后 ,将实验组cDNA分成两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,将产物与T/A载体连接 ,构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。文库扩增后得到 12 1个阳性克隆 ,经菌落PCR分析 ,得到 115个 2 0 0～10 0 0bp的插入片段 ,对其中的 90个片段测序 ,并进行同源性分析 ,显示 31种已知基因编码蛋白和 15种未知功能基因序列 ,包括一些与细胞周期、细胞凋亡、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因 ,可能是NS5A反式激活靶基因。结果提示 ,成功构建了HCVNS5A反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,该文库的建立为进一步阐明HCVNS5A反式调节的靶基因及致肝细胞癌发生的分子生物学机制提供了理论依据。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A 反式激活基因克隆化

三氧化二砷反式激活基因AsTP2的克隆化及生物信息学分析

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解放军医学杂志 2005年第3期30卷 213-215页

作者：吴顺华郑玉建张跃新成军刘妍吴煜新疆医科大学公共卫生学院乌鲁木齐830054 北京地坛医院传染科解放军第302医院基因治疗研究中心

目的　三氧化二砷反式激活靶基因(AsTP2)的克隆化研究。方法　对构建的三氧化二砷差异表达的肝HepG2细胞 cDNA消减文库进行筛选,利用RT PCR技术获得新基因AstTP2的编码序列,结合生物信息学对其氨基酸序列、染色体定位和基因功能进行分... 详细信息

目的　三氧化二砷反式激活靶基因(AsTP2)的克隆化研究。方法　对构建的三氧化二砷差异表达的肝HepG2细胞 cDNA消减文库进行筛选,利用RT PCR技术获得新基因AstTP2的编码序列,结合生物信息学对其氨基酸序列、染色体定位和基因功能进行分析比较。结果　AsTP2基因编码区为1119nt,编码产物为372aa。经核苷酸序列数据库(GenBank)和蛋白质一级结构序列数据库(SwissProt)同源序列的搜寻,发现未知功能的同源蛋白,说明克隆的AsTP2基因属于未知功能新基因,GenBank注册号为 AY744366。该基因在三氧化二砷诱导的HepG2细胞中表达上调。结论　克隆了一条新的三氧化二砷反式激活靶基因AsTP2,为进一步研究三氧化二砷的反式激活作用和揭示砷致癌的生物学机制提供新线索。

关键词：三氧化二砷反式激活基因克隆化生物信息学分析

克隆化人淋巴因子激活的杀伤细胞治疗晚期肺癌的临床疗效初探

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中国肿瘤生物治疗杂志 1995年第4期2卷 302-303页

作者：樊薇贝珍珠蒋虹解放军三○四医院老年病房北京100037

自体LAK细胞和rhIL-2联台应用于化疗失败或不能耐受的晚期实体瘤病人，已取得了确切的疗效，但由于取血量大及大剂量应用IL-2的严重副反应，致使其应用受限，治疗中的死亡率高，而克隆化LAK细胞具有增殖力强，体外存活期长和长时间保存... 详细信息

自体LAK细胞和rhIL-2联台应用于化疗失败或不能耐受的晚期实体瘤病人，已取得了确切的疗效，但由于取血量大及大剂量应用IL-2的严重副反应，致使其应用受限，治疗中的死亡率高，而克隆化LAK细胞具有增殖力强，体外存活期长和长时间保存有效杀瘤活性的特点。我们自1991年开始应用军医科院采用半固体-液体两步法培养的克隆化自体LAK细胞治疗15例晚期肺癌病人，

关键词：治疗克隆化晚期肺癌淋巴因子激活自体LAK细胞杀伤细胞病人两步法液体

克隆化小麦Cys合成酶基因培育抗酸雨的针叶树木

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生物技术通报 1993年第5期9卷 20-21页

作者：孙国凤

秋田县农业短期大学附属生物工程研究所教授佐野浩等克隆了小麦的 Cys 合成酶基因,导入烟草。

关键词：合成酶基因 Cys 短期大学秋田县克隆化生物合成碱基序列半脱氨酸细胞生物学休野