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1型嗜肺军团菌的光纤倏逝波生物传感器快速测定法

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环境与健康杂志 2013年第5期30卷 440-442页

作者：单聪陈西平中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所环境微生物室北京100021

目的利用光纤倏逝波生物传感器适合现场快速检测的优势,初步建立1型嗜肺军团菌的快速检测平台。方法优化最佳检测条件,并在此条件下确定检测Lp1的灵敏度和特异性,同时通过检测人工模拟样品确认该方法检测实际样本的灵敏度和特异性。结... 详细信息

目的利用光纤倏逝波生物传感器适合现场快速检测的优势,初步建立1型嗜肺军团菌的快速检测平台。方法优化最佳检测条件,并在此条件下确定检测Lp1的灵敏度和特异性,同时通过检测人工模拟样品确认该方法检测实际样本的灵敏度和特异性。结果该方法 40 min之内自动完成检测。捕获抗体与目标物最佳反应时间、反应体系与检测抗体的最佳反应时间均为10 min,捕获抗体最佳使用浓度是100μg/ml,检测抗体最佳使用浓度为20μg/ml。在此条件下得到该方法检测Lp1的灵敏度为1.8×103cfu/ml,检测的特异性强。结论光纤倏逝波生物传感器快速检测方法为大样本量Lp1污染严重水样的现场快速筛查提供一种新途径。

关键词：光纤倏逝波生物传感器快速检测 1型嗜肺军团菌

利用光纤倏逝波生物传感器检测食品中大肠杆菌O157:H7

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食品安全质量检测学报 2014年第4期5卷 1142-1146页

作者：刘金华刘韬孟日增聂丹丹刘阳薛力刚吉林出入境检验检疫局长春130062 长春科技学院长春130600

目的建立一种应用光纤倏逝波生物传感器快速检测食品中大肠杆菌O157:H7的方法。方法对光纤用大肠杆菌O157:H7抗体包被制备检测探针,用纳米量子点对抗体进行偶联制备检测抗体,并确定其检测的灵敏度和特异性,同时通过对人工污染样品的检... 详细信息

目的建立一种应用光纤倏逝波生物传感器快速检测食品中大肠杆菌O157:H7的方法。方法对光纤用大肠杆菌O157:H7抗体包被制备检测探针,用纳米量子点对抗体进行偶联制备检测抗体,并确定其检测的灵敏度和特异性,同时通过对人工污染样品的检测确认该方法检测实际样本的可行性。结果建立的光纤倏逝波生物传感器检测大肠杆菌O157:H7的灵敏度达到50 CFU/mL,并具有较强的特异性。结论利用光纤倏逝波生物传感器检测食品中污染的大肠杆菌O157:H7方法快速、准确,具有较强应用价值。

关键词：光纤倏逝波生物传感器检测大肠杆菌O157:H7

一种基于光纤倏逝波生物传感器检测单核细胞增生李斯特氏菌方法的建立

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中国实验诊断学 2014年第7期18卷 1045-1047页

作者：刘金华刘韬孟日增聂丹丹王玮琳王浩天吉林出入境检验检疫局吉林长春130062 吉林大学药学院吉林长春130021

目的建立一种应用光纤倏逝波生物传感器快速检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法。方法用单核细胞增生李斯特氏菌单克隆抗体对光纤进行包被,制备检测光纤探针,用纳米量子点对单增李斯特氏菌多克隆抗体进行偶联标记,建立基于光纤倏逝波生... 详细信息

目的建立一种应用光纤倏逝波生物传感器快速检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法。方法用单核细胞增生李斯特氏菌单克隆抗体对光纤进行包被,制备检测光纤探针,用纳米量子点对单增李斯特氏菌多克隆抗体进行偶联标记,建立基于光纤倏逝波生物传感器检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法。并对其检测的灵敏性及特异性进行了确定,同时通过对人工模拟样品的检测确认该方法检测实际样本的可能性。结果该方法检测单核细胞增生李斯特氏菌的灵敏度可达30CFU/mL,且具有较强的特异性同其他常见食源性病原菌无交叉反应,可用于实际样品的检测。结论应用该技术检测单核细胞增生李斯特氏菌是一种快速、准确的新方法,具有实际应用价值。

关键词：光纤倏逝波生物传感器检测单核细胞增生李斯特氏菌

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基于倏逝波的光纤溶血检测技术研究

基于倏逝波的光纤溶血检测技术研究

作者：白亚亚西安工业大学

学位级别：硕士

血液在人体心脏和毛细血管中不断循环,进而解决人体基本需求。血液内红细胞会因为人体病变或是其他因素而引起破坏,从而造成血红蛋白的溢出,即为溶血。溶血的即刻测定,能够准确有效的诊断疾病的出现。而溶血测定的关键,在于对红细胞与... 详细信息

血液在人体心脏和毛细血管中不断循环,进而解决人体基本需求。血液内红细胞会因为人体病变或是其他因素而引起破坏,从而造成血红蛋白的溢出,即为溶血。溶血的即刻测定,能够准确有效的诊断疾病的出现。而溶血测定的关键,在于对红细胞与游离血红蛋白的高效分离和对游离血红蛋白含量的精确测定。而现有的溶血测量方法存在过程复杂且会产生环境外污染等问题,因此高效准确、无污染地进行溶血测定意义重大,具有重要探讨价值。光纤倏逝波生物传感器具有免标记、实时性好、抗电磁干扰等诸多优点,并且不受纤芯表面除倏逝光波场以外的生物元素的影响,拥有超高的探测灵敏度。因此本文设计了基于光纤倏逝波测量的溶血检测新方案,主要研究内容如下:首先,全面探讨目前所用离心法缺陷问题,同时并针对血液中只含有游离的血红蛋白的需求,设计出微纳过滤结构进行红细胞滤除,另外通过刻蚀技术由单晶硅片上加工出布满5um孔微滤芯片。然后,根据光纤倏逝波传感原理,利用二氧化碳激光熔接机对多模光纤做拉锥处理,再与微滤芯片和保护外壳结合形成光纤倏逝波溶血检测传感器。最后,搭建了光纤倏逝波溶血检测系统,通过以FPGA为内核芯片的控制电路进行光谱数据采集,利用强度解调算法对光谱数据进行解算,以快速准确地得到血红蛋白浓度。根据以上研究内容,实验测得血液中血红蛋白含量准确度达到了5mg/L。由于人工溶血配置不同浓度的血红蛋白溶液过程中,实际、理想稀释程度间难免出现相应偏差,测量浓度与实际浓度相比,最大测量误差为9.35%。

关键词：光纤倏逝波生物传感器熔融拉锥溶血检测微滤芯片强度解调算法

空调冷却塔水嗜肺军团菌污染调查及其生物传感器快速检测方法的研究

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空调冷却塔水嗜肺军团菌污染调查及其生物传感器快速检测方法的研...

作者：单聪中国疾病预防控制中心

学位级别：硕士

近年来,随着人们生活水平的提高,军团病的发病率有着明显的上升趋势。1976年美国首次爆发“军团病”以来,已经有多个国家有军团病的报道。我国1982年在南京首次证实军团病病例。军团菌主要生长在各种有水的环境中,尤其在空调系统、供水... 详细信息

近年来,随着人们生活水平的提高,军团病的发病率有着明显的上升趋势。1976年美国首次爆发“军团病”以来,已经有多个国家有军团病的报道。我国1982年在南京首次证实军团病病例。军团菌主要生长在各种有水的环境中,尤其在空调系统、供水系统中较为常见。我国多个城市对空调冷却塔进行军团菌调查发现其中军团菌的阳性率为50%-80%。空调冷却塔水军团菌污染对于人类健康存在潜在的威胁。目前我国军团菌的检测依然以细菌分离培养法为主,培养周期较长,不利于军团病的预防和控制。本课题对南方某城市中央空调冷却塔水军团菌污染状况作了相关调查与分析,同时对分离的菌株进行了分子分型研究,建立了分子流行病学资料。另外,本课题还初步建立了光纤倏逝波生物传感器快速检测1型嗜肺军团菌的方法,为大样本量Lpl污染严重水样的现场快速筛查提供了一个新的方向。研究目的 1.对南方某城市酒店和宾馆、商场和超市、医院、写字楼等公共场所的空调冷却塔水进行军团菌的分离培养,了解军团菌的污染状况。初步了解空调冷却水军团菌污染状况与水温、细菌总数、空调使用年限、空调冷却塔水消毒情况等因素之间是否存在一定联系。 2.用SBT分型技术对常规分离培养出的嗜肺军团菌菌株进行分子生物学分型,分析分离菌株的多态性,确定菌株的遗传基础之间相互的联系和变异,了解该城市军团菌分布流行病学特征。 3.利用光纤倏逝波生物传感器适合现场快速检测的优势,初步建立1型嗜肺军团菌的快速检测平台。对该方法的检测条件进行优化,并在最佳检测条件下确定检测的灵敏度和特异性,并对人工感染样品进行检测,同时用传统方法进行计数,确认该方法的可行性。研究内容与方法 1.采用平皿计数法对中央空调冷却塔水进行军团菌的分离培养,用血清学方法对分离菌株进行初步鉴定。检测冷却塔水水温、细菌总数,调查空调冷却塔的使用年限及消毒情况,分析其与军团菌检出之间是否存在一定联系。 2.采用SBT基因分型技术（按照EWGLI标准）对所分离菌株进行分子分型。提取菌株基因组DNA,测定DNA在260nm,280nm处的吸光度值,计算DNA浓度。分别扩增7个管家基因（flaA、pile、asd、mip、momps、proA、neuA）的内部核酸序列片段,从394-710bp。获得的PCR扩增产物均进行纯化,并对纯化后产物测序。将测序结果上传至EWGLI数据库比对,得到菌株的等位基因图谱,确定分离菌株的序列分型。菌株ST分型结果利用MEGA4软件,按UPGMA绘制进化树,得到菌株的树形聚类图,观察菌株之间的相似度,分析菌株的亲缘关系。 3.研究光纤倏逝波生物传感器快速检测1型嗜肺军团菌的方法,根据双抗体夹心免疫反应原理建立了Lp1的检测平台。利用Alexa Fluor 647荧光染料标记检测抗体,标记后的抗体分装后-20℃避光保存备用。将光纤用异丙醇清洗后用链霉亲和素包被,生物素标记的捕获抗体与链霉亲和素作用后发生亲和素-生物素放大反应,更有效地将捕获抗体连接到光纤上。在此基础上,对检测的最佳条件进行了优化,包括：捕获抗体与目标物的最佳反应时间,反应体系与检测抗体的最佳反应时间,捕获抗体的最佳浓度,检测抗体的最佳浓度等。在最佳检测条件下,确定检测Lp1的灵敏度和特异性,同时通过检测人工感染样品确认该方法检测实际样本的灵敏度和特异性,初步建立了Lp1快速检测方法。研究结果 1.22户公共场所中有19户检出军团菌,阳性率高达86.4%;54份空调冷却塔的水样中有31份检出军团菌,总检出率为57.4%。不同类型场所采集的水样军团菌检出率无统计学意义（P＞0.05）。检出的菌株均为嗜肺军团菌,其中Lp1型占35.5%,Lp2-14型占64.5%。不同冷却塔水温、水样菌落总数、空调使用年限、水样消毒与否对军团菌检出率影响均不显著（P＞0.05）。 2.采用SBT基因分型技术对分离的嗜肺军团菌进行分子分型,31株分离的嗜肺军团菌共得到19种SBT分型。其中11株Lp1共有分为5种ST型别,分别为ST1、ST159、ST160、ST154、ST52。其中ST1型5株,占45.5%,ST159型2株,其他ST型别各1株。20株Lp2-14共分为14种ST型别,其中数据库已知型别为ST242、ST152、ST8、ST367、ST560五种,其中ST242有5株占30%,还有a～f五种新ST型别各一株,Oa、Ob、Oc型别只扩增出6种基因,其中Oa有3株,Ob和Oc各1株。 3.应用MEGA4软件对菌株的ST分型按UPGMA绘制进化树。对7个基因均扩增出的26株分离株遗传聚类分析结果显示可以将其分为两个同源谱系。其中2株ST159型、1株ST54型、1株ST160型及1株未知型别e属于一个同源系,提示有一定的亲缘关系;余下的序列型归属于另一个同源系。

关键词：空调冷却塔水军团菌 SBT 光纤倏逝波生物传感器快速检测