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胸膜肺炎放线杆菌NarQ/P双组份系统介导的儿茶酚胺类激素信号传导通路的研究

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胸膜肺炎放线杆菌NarQ/P双组份系统介导的儿茶酚胺类激素信号传导...

作者：王栋华中农业大学

学位级别：硕士

微生物内分泌学是近年来新兴的研究领域,主要研究细菌和宿主激素间的相互作用。胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,APP）是造成养猪产业严重损失的重要病原菌,引起猪的传染性胸膜肺炎。APP中存在YgiY/YgiX,NarQ/NarP,C... 详细信息

微生物内分泌学是近年来新兴的研究领域,主要研究细菌和宿主激素间的相互作用。胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,APP）是造成养猪产业严重损失的重要病原菌,引起猪的传染性胸膜肺炎。APP中存在YgiY/YgiX,NarQ/NarP,CpxA/CpxR,ArcB/ArcA,PhoR/PhoB五对双组份系统（TCS）,仅ArcB/ArcA的功能有报道,其余TCS的功能均不清楚。本实验室之前的研究发现,APP的双组分系统中有两对受到宿主儿茶酚胺类激素肾上腺素和去甲肾上腺素的调控,本研究选取了其中一对双组份系统NarQ/NarP进行了研究,目的是研究这一对双组份系统的功能以及其感应激素信号的机制,有助于进一步了解APP的致病机理以及探索新的药物靶标。本研究通过凝胶迁移率实验和构建荧光报告载体,鉴定了响应调控蛋白NarP的下游靶基因,并通过测量生长曲线研究了缺失narP的突变株与亲本菌之间的生长的差异,取得的主要研究成果如下:1、EMSA实验对NarP下游靶基因的鉴定本研究在DAP-Seq技术筛选出了一批能与NarP结合的基因的基础上,从中选取了18个与APP代谢,毒力,运动性等相关的基因,利用EMSA实验技术,进行了进一步的验证。实验结果发现,18个基因中有14个可与NarP蛋白结合,且这14个基因中大部分与铁代谢相关。2、pBT-promoter-GFP报告载体的构建及应用为了在细菌体内验证NarP对基因的调控,我们构建了基因启动子的荧光报告载体,在将报告基因GFP克隆到pBT载体上后,再将基因启动子插入到GFP基因的上游,构建pBT-promoter-GFP荧光报告载体。随后将荧光报告载体与表达NarP蛋白的原核表达载体一同转入大肠杆菌BL21感受态细胞中,通过报告基因的功能,在细菌体内研究NarP对基因的调控。实验结果发现18个报告载体中有6个在转入大肠杆菌后能够顺利表达GFP蛋白,其中有5个报告载体在NarP存在时表达受到抑制,细菌荧光显著减弱。这5个基因分别是appser1＿11590（hgbA）,appser1＿14210,appser1＿16100（ftpA）,appser1＿16110和appser1＿20850（mutL）。3、缺narP突变株与亲本菌生长曲线的测量本研究还对APP缺失突变株ΔnarP和亲本菌4074在不同条件下的生长曲线进行了测量,并且研究了激素对APP在不同条件下生长的影响,实验结果表明,在缺铁的生长环境下,突变株ΔnarP的生长要快于亲本菌4074,而在其他条件下,例如普通,厌氧,高温等条件下两者并无显著区别,此外,激素对于APP在缺铁环境的生长有促进作用,不论突变株ΔnarP还是亲本菌均是如此。综合以上实验得出的结果,发现NarP蛋白的功能很可能与APP的铁代谢有关,且在报告载体的实验中,NarP对铁代谢相关基因的作用均表现为抑制,暗示NarP可能抑制APP对铁的摄取,而后续的表型实验也印证了这一猜想。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌双组份系统儿茶酚胺类激素信号通路

硼酸功能化磁性POSS的合成与尿液中儿茶酚胺类激素的富集分析

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硼酸功能化磁性POSS的合成与尿液中儿茶酚胺类激素的富集分析

第二十届全国色谱学术报告会及仪器展览会

作者：何海波董晨周子晴薄田雨余琼卫冯钰锜上海大学理学院化学系武汉大学生物医学分析化学教育部重点实验室

硼酸及取代硼酸与顺式邻二羟基化合物的结合作用在160年前就被人们所认识。硼酸及取代硼酸能与顺式二羟基化合物在碱性条件下形成五元环或六元环的脂,而产物酯在酸性条件下解离,该反应为受p H调控的可逆共价反应1]。由于很多重要的生物... 详细信息

硼酸及取代硼酸与顺式邻二羟基化合物的结合作用在160年前就被人们所认识。硼酸及取代硼酸能与顺式二羟基化合物在碱性条件下形成五元环或六元环的脂,而产物酯在酸性条件下解离,该反应为受p H调控的可逆共价反应1]。由于很多重要的生物分子,如RNA、糖蛋白、糖、儿茶酚胺和核苷等都含顺式邻二羟基,基于硼酸络合作用的分子识别体系是生物样品富集和分离的一个重要分析工具。显然,若硼酸基团固载到磁性材料上,将对硼酸基团的分子识别性和磁性纳米粒子的大比表

关键词：硼酸功能化磁性POSS 儿茶酚胺类激素尿液

来源： cnki会议评论

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刺参对生境的选择性及其行为生理响应

水生生物学报 2022年第6期46卷 847-855页

作者：姜玉山宋亚彩方玲吕菲张沛东中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室青岛266003

在室内模拟环境条件下,研究了刺参(Apostichopus japonicus)对鳗草(Zostera marina)、裸沙和石块生境的选择性和偏好性,比较分析了刺参在不同生境的平均聚集率、行为特征(爬行、摄食与排泄行为)和生理状态(刺参肌肉ATP含量、体腔液多巴... 详细信息

在室内模拟环境条件下,研究了刺参(Apostichopus japonicus)对鳗草(Zostera marina)、裸沙和石块生境的选择性和偏好性,比较分析了刺参在不同生境的平均聚集率、行为特征(爬行、摄食与排泄行为)和生理状态(刺参肌肉ATP含量、体腔液多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素和皮质醇含量)。结果显示:(1)刺参对鳗草生境的选择和偏好显著高于裸沙生境与石块生境,其在鳗草生境的平均聚集率达到64%,是裸沙生境的4.5倍;(2)刺参在鳗草生境的行为活动显著高于石块生境与裸沙生境,其爬行行为和摄食行为的出现频率是石块生境的2倍,排泄行为明显,刺参粪便的长度和厚度分别是裸沙生境的1.9倍和2.5倍;(3)刺参在鳗草生境的肌肉ATP含量是裸沙生境和石块生境的2倍。结果表明,刺参对鳗草生境具有明显的选择性,其在鳗草生境行为活跃,免疫功能提高,说明鳗草草床是刺参绿色生态牧场构建的优良生境。

关键词：平均聚集率行为特征生理状态儿茶酚胺类激素鳗草刺参

微生物内分泌学:揭示微生物与激素相互作用对感染的影响机制

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微生物学报 2013年第9期53卷 901-907页

作者：徐福洲吴村林军北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097 美国田纳西大学动物科学系诺克斯维尔tn37996

微生物内分泌学是一门将微生物学、神经生理学和内分泌学等学科结合在一起形成的交叉学科。本文以儿茶酚胺类激素作用于细菌为例,介绍了此类激素对细菌的作用机制,特别是促进细菌生长以及增强细菌对宿主细胞的吸附和侵染能力的机制,而... 详细信息

微生物内分泌学是一门将微生物学、神经生理学和内分泌学等学科结合在一起形成的交叉学科。本文以儿茶酚胺类激素作用于细菌为例,介绍了此类激素对细菌的作用机制,特别是促进细菌生长以及增强细菌对宿主细胞的吸附和侵染能力的机制,而且对激素与细菌作用的受体及与细菌群居效应的相关性进行了简要介绍。该学科的提出不但有助于深入认识细菌与宿主的相互作用,而且对畜牧生产中的健康养殖和动物性食品安全均具有重要指导意义。

关键词：微生物内分泌学儿茶酚胺类激素促生长毒力群居效应

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应激激素对胸膜肺炎放线杆菌生长调控的研究

应激激素对胸膜肺炎放线杆菌生长调控的研究

作者：陈召辉华中农业大学

学位级别：硕士

胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)属于巴氏杆菌科,放线杆菌属,能引起猪传染性胸膜肺炎,对世界养猪业造成了严重危害。应激因素是引起APP感染的重要因素之一。近年来有报道表明微生物能够感应并将宿主在应激状态... 详细信息

胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)属于巴氏杆菌科,放线杆菌属,能引起猪传染性胸膜肺炎,对世界养猪业造成了严重危害。应激因素是引起APP感染的重要因素之一。近年来有报道表明微生物能够感应并将宿主在应激状态下释放的激素作为一种环境信号,调节自身的致病性和生长等行为,进而影响宿主感染疾病的过程。本实验室前期研究发现儿茶酚胺类激素能广泛调控APP基因的表达,包括重要的毒力、代谢和调控基因,说明APP能主动响应宿主的应激激素。在受到激素影响的差异表达基因中,存在一批APP铁代谢相关基因。本课题以APP为研究对象,研究了在缺铁环境下儿茶酚胺类激素对APP生长的调节作用。进一步通过APP几种基因突变体的生长情况检测以及APP全基因组表达谱芯片,探索了儿茶酚胺类激素影响APP生长的作用机制。1.人工缺铁条件下儿茶酚胺类激素对APP生长的影响在人工培养基(CDM)中添加铁离子螯合剂2,2-联吡啶时,APP生长受到明显抑制,当添加血清时,APP生长也受到抑制,并且添加Mg2+, Ca2+, Fe3+时,只有Fe3+能解除血清的生长抑制。同时发现未结合铁的转铁蛋白(ATF)与血清作用类似,都能抑制APP生长,而含有饱和铁的转铁蛋白(HTF)则无此作用。这些现象说明添加血清或ATF后造成了缺铁的培养环境。在这两种缺铁环境下绘制了APP生长曲线,发现三种儿茶酚胺类激素肾上腺素(Epi)、去甲肾上腺素(NE)和多巴胺(DA)能促进APP生长,激素受体抑制剂并不能抑制激素对APP的促生长作用,APP双组份系统基因缺失突变体ΔqseB、ΔqseC和ΔqseBC的生长情况与亲本菌也并无明显区别,这说明激素不是通过高等动物类似的受体以及细菌中已知的激素受体来调节APP的生长。铁代谢相关基因突变体ΔtonB1、Δfur和ΔtonB2在缺铁环境中生长能力减弱,但添加激素后也能促进三种突变体在血清培养基中的生长,而添加ATF的培养基中ΔtonB1和Δfur的生长依然受到激素的促进,但ΔtonB2的生长却不再受到激素的促进,说明tonB2在激素促进APP生长过程中可能有重要作用。这些结果说明儿茶酚胺类激素能够在铁限制的环境下促进APP的生长,这种调节不是通过高等生物的肾上腺素能受体以及细菌中已知的激素受体完成的,而是通过细菌的铁摄取系统完成的。2.儿茶酚胺类激素对APP缺铁环境下基因表达的调控为了继续探索儿茶酚胺类激素调控APP生长的分子机制,通过表达谱芯片方法比较了APP分别在CDM、CDM+血清(S)、CDM+S+Epi、CDM+S+NE、 CDM+S+DA这5种不同培养条件下基因转录水平的差异。将CDM+S与CDM培养环境相比,CDM+S+Epi/NE/DA与CDM+S培养环境相比,受到血清调控的差异基因共有363个,其中172个基因上调,191个基因下调;受到Epi调控的基因有255个,其中139个基因上调,116个基因下调;受到NE调控的基因有723个,其中336个基因上调,387个基因下调：受到DA调控的基因有716个,其中339个基因上调,377个基因下调。差异基因按功能可分为21类,包括了能量代谢,物质转运,信号传导,转录翻译等。受血清、Epi、NE和DA共同调控的铁代谢相关基因有21个,其中有20个基因都在血清培养基中显著上调,而在血清培养基中添加了Epi, NE或DA后又显著下调。这些基因编码的蛋白中,包括了APP两个重要的铁摄取系统TonB1-ExbB-ExbD和TonB2-ExbB2-ExbD2,及螯合铁转运蛋白YfeD、血红蛋白转运蛋白HgbA 及转铁蛋白结合蛋白TbpA1-TbpB1等。这说明了三种激素能够通过这些复杂的铁摄取系统影响APP的铁代谢,进而调节APP的生长。这也可能是单一的铁摄取基因突变体不能改变激素促进APP生长现象的原因。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌儿茶酚胺类激素生长调控机制基因芯片

慢性压力刺激对小鼠胃组织上皮-间质转化及肿瘤干细胞特性的影响

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慢性压力刺激对小鼠胃组织上皮-间质转化及肿瘤干细胞特性的影响

作者：卢骁西南医科大学

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目的:上皮—间质转化(Epithelial-mesenchymal Transition,EMT)在肿瘤性疾病的发生、侵袭转移中有着至关重要的作用,本研究拟通过分析慢性压力刺激对小鼠外周血慢性儿茶酚胺相关激素的影响、分析慢性压力刺激对小鼠胃组织中上皮—间质转... 详细信息

目的:上皮—间质转化(Epithelial-mesenchymal Transition,EMT)在肿瘤性疾病的发生、侵袭转移中有着至关重要的作用,本研究拟通过分析慢性压力刺激对小鼠外周血慢性儿茶酚胺相关激素的影响、分析慢性压力刺激对小鼠胃组织中上皮—间质转化(EMT)相关特征性蛋白表达(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)的影响及慢性压力刺激对小鼠胃组织中肿瘤干细胞相关指标(CD133和CD44)的影响来研究阐释慢性压力刺激对胃组织上皮—间质转化及肿瘤干细胞特性的影响,为胃部肿瘤的发生以及发展机制提供可靠的理论依据。方法:选用适龄BALB/c小鼠,构建慢性压力刺激小鼠模型作为实验组(Chronic Stress,CS),正常饲养小鼠作为阴性对照组(Negative control,NC),采用旷场实验(Open Field Test,OFT)检测 2组小鼠的行为学差异(中央格停留时间及移动距离);采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测对照组小鼠及实验组小鼠外周血中儿茶酚胺类激素水平(肾上腺素(EPI)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA));采用蛋白质免疫印迹法(Western blot,WB)、免疫组织化学技术、荧光染色分析及实时定量聚合酶链锁反应(Quantitative real time polymerase chain reaction,qPCR)检测2组小鼠胃组织中EMT相关特征性蛋白(上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin))及肿瘤干细胞相关指标(CD133和CD44)的表达。结果:1、旷场实验显示,实验组小鼠较对照组小鼠移动距离明显减少、活动范围多位于旷场边缘,对照组小鼠在中央格的停留时间较实验组小组更长,两组小鼠的行为差异具有统计学意义(P儿茶酚胺类激素(肾上腺素、去甲肾上腺素及多巴胺)水平高于对照组小鼠(P儿茶酚胺类激素分泌、能够促进胃组织细胞的上皮—间质转化及影响肿瘤干细胞特性。

关键词：慢性压力上皮-间质转化(EMT) 儿茶酚胺类激素肿瘤干细胞特性

具核梭杆菌群体感应分子AI-2通过树突状细胞NF-κB信号通路在结直肠癌免疫调控中的体外机制研究

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具核梭杆菌群体感应分子AI-2通过树突状细胞NF-κB信号通路在结直...

作者：闫丽川北医学院

学位级别：硕士

目的:结直肠癌(CRC)是世界上第三大最常见的癌症。根据最近的研究发现,结直肠癌患者的肿瘤微环境和粪便样本富含有具核梭杆菌。人类胃肠道中有大量应激相关的儿茶酚胺类激素,可影响肠道细菌的生长。但是目前尚无研究报道儿茶酚胺类激素... 详细信息

目的:结直肠癌(CRC)是世界上第三大最常见的癌症。根据最近的研究发现,结直肠癌患者的肿瘤微环境和粪便样本富含有具核梭杆菌。人类胃肠道中有大量应激相关的儿茶酚胺类激素,可影响肠道细菌的生长。但是目前尚无研究报道儿茶酚胺类激素对具核梭杆菌的影响以及具核梭杆菌自诱导剂-2(AI-2)感染后对人体免疫细胞的影响及分子机制。为进一步探讨儿茶酚胺类激素对具核梭杆菌的影响及具核梭杆菌参与结直肠癌发生的机制,本实验研究了儿茶酚胺类激素对具核梭杆菌生长的影响及具核梭杆菌对树突状细胞的影响,并对其潜在机制进行了阐述。方法:(1)通过qPCR检测儿茶酚胺类激素对具核梭杆菌的毒力因子FadA表达的影响;(2)通过细菌平板计数检测儿茶酚胺类激素对具核梭杆菌生长的影响;(3)通过哈维氏弧菌与经儿茶酚胺类激素处理后提纯具核梭杆菌AI-2共培养诱导生物发光,检测儿茶酚胺类激素对具核梭杆菌AI-2的影响;(4)跨孔测定检测具核梭杆菌AI-2对巨噬细胞迁移能力的影响,及具核梭杆菌AI-2抑制剂D-核糖对AI-2诱导巨噬细胞迁移的影响;(5)MTT实验检测具核梭杆菌AI-2对T淋巴细胞、中性粒细胞、树突状细胞增殖的影响;(6)CCK8实验检测具核梭杆菌AI-2对NK细胞杀伤活性的影响;(7)用流式细胞仪检测具核梭杆菌AI-2对树突状细胞吞噬功能的影响;(8)Luminex液体悬浮芯片检测具核梭杆菌AI-2对树突状细胞分泌常见细胞因子的影响;(9)定量蛋白质组学实验进一步筛选树突状细胞中的AI-2相互作用蛋白,对数据进行生物信息学分析,筛选出信号通路并在体外通过细胞免疫荧光进行验证。结果:(1)在肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺的作用下,生长相同时间,与对照组相比加入儿茶酚胺类激素的组Fn细菌表达的毒力基因FadA显著增高、Fn菌落数显著增加、Fn分泌的AI-2浓度显著增高(P儿茶酚胺类激素的组结肠癌细胞吸光值更高(P2.0倍。45种蛋白质被上调,6种蛋白质被下调。AI-2感染树突状细胞显著激活了 15条途径(P儿茶酚胺类激素促进具核梭杆菌的AI-2分泌,并有助于增强其毒力和增殖。(2)儿茶酚胺类激素促进结肠癌细胞增殖。(3)具核梭杆菌AI-2促进巨噬细胞迁移、抑制T淋巴细胞增殖、促进中性粒细胞增殖、促进NK细胞杀伤功能、促进树突状细胞增殖及吞噬功能。(4)体外实验发现具核梭杆菌AI-2可能通过特异性信号传导途径NF-κB影响树突状细胞。

关键词：具核梭杆菌树突状细胞结直肠癌儿茶酚胺类激素 Autoinducer-2

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嗜铬细胞瘤的非典型临床特征识别

医学综述 2018年第17期24卷 3388-3392,3397页

作者：邢丽婧索丽霞陈晓鸥张倩为上海健康医学院附属嘉定区中心医院内分泌科上海201800

嗜铬细胞瘤是引起继发性高血压的疾病之一,近年来因其突发的致死性高血压危象的临床特点,已引起临床医生的极大重视。然而嗜铬细胞瘤常常会被一些非典型的首发临床症状所掩盖,以致误诊、漏诊,延误治疗,失去最佳治疗时机,造成心、脑、肾... 详细信息

嗜铬细胞瘤是引起继发性高血压的疾病之一,近年来因其突发的致死性高血压危象的临床特点,已引起临床医生的极大重视。然而嗜铬细胞瘤常常会被一些非典型的首发临床症状所掩盖,以致误诊、漏诊,延误治疗,失去最佳治疗时机,造成心、脑、肾等靶器官的严重损害,严重危及患者生命。因此对嗜铬细胞瘤的一些特殊临床表现的准确识别显得尤为重要。该文将近年来临床中发现的一些非典型的症状做一介绍,以加深对本病的认识,提高临床诊断的准确率。

关键词：嗜铬细胞瘤非典型表现儿茶酚胺类激素血管活性肠肽副甲状旁腺激素相关肽

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激素作用的机理

江西医药 1987年第3期 293-300页

激素作用是从它与特定受体蛋白结合开始的。多肽和儿茶酚胺类激素与细胞表面的受体结合,类固醇和甲状腺激素则与细胞内受体结合。多肽或儿茶酚胺类激素受体的相互作用,常促使细胞内介质的产生或水平发生改变,而激素作用是由介质介导的... 详细信息

激素作用是从它与特定受体蛋白结合开始的。多肽和儿茶酚胺类激素与细胞表面的受体结合,类固醇和甲状腺激素则与细胞内受体结合。多肽或儿茶酚胺类激素受体的相互作用,常促使细胞内介质的产生或水平发生改变,而激素作用是由介质介导的。类固醇和甲状腺激素的受体相互作用,似可刺激或抑制特定基因的转录,而由产生的 mRNA 转译产物介导激素作用。但以上一般规律也有例外。

关键词：激素作用儿茶酚胺类激素受体蛋白细胞内受体类皮质激素激素受体前列腺素受体结合激素释放生长激素抑制素