检索结果-南通市图书馆

作者：上官丁从合肥工业大学

学位级别：硕士

α-氨基酸酯酰基转移酶(SAET)是一种以α-氨基酸甲酯为酰基供体、氨基酸为酰基受体,催化合成二肽的合成酶,能够催化丙氨酸甲酯与谷氨酰胺合成丙谷二肽(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺,L-alanyl-L-glutamine)。丙谷二肽具有较为优良的稳定性和水溶... 详细信息

α-氨基酸酯酰基转移酶(SAET)是一种以α-氨基酸甲酯为酰基供体、氨基酸为酰基受体,催化合成二肽的合成酶,能够催化丙氨酸甲酯与谷氨酰胺合成丙谷二肽(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺,L-alanyl-L-glutamine)。丙谷二肽具有较为优良的稳定性和水溶性,代谢迅速且无毒副作用,是谷氨酰胺营养补充剂的最佳替代品。本实验室前期构建了高效表达SAET工程菌QC01,获得了高活力的SAET,在此基础上,进行如下研究:(1)优化了SAET游离酶催化制备丙谷二肽的条件。经过一系列实验,得到了该酶的最佳催化条件:反应体系p H值维持在8.5、反应温度为27℃、底物比例(丙氨酸甲酯:谷氨酰胺)为1:0.8、底物浓度为200m M、加酶量为10U/m L、反应时间为40min,此时丙谷二肽的摩尔转化率高达84.22%。虽然使用SAET游离酶可以高效的合成丙谷二肽,转化率达到预期,但实验过程中,制酶工序较为繁琐、酶易失活,且在反应过程中需维持体系p H值,不利于工业生产应用。(2)优化了工程菌QC01全细胞催化制备丙谷二肽的条件。通过响应面实验,得出了最优的催化条件为:菌体浓度3g/L、底物比例为1:0.6、反应温度30℃、底物浓度300m M、反应起始p H值9.0、反应时间为40min,以此条件催化反应,丙谷二肽的摩尔转化率可以达到73.85%,比初始反应条件下的摩尔转化率提高了51.10%。(3)对SAET游离酶和表达菌QC01全细胞进行了固定化研究。实验表明,SAET游离酶稳定性不好,固定化效果较差;但在全细胞固定化中,通过对比不同包埋材料固定后的酶活回收率、固定化酶机械强度以及五轮反应表现等指标,最终确定了琼脂包埋固定法,具体操作为:1.5%的琼脂包埋2g(湿重)菌体。以此法固定全细胞,酶活力回收率高达86.94%,且有着较好的机械强度;经过10轮次反应后,酶活力留存率仍有57.03%。固定化后的酶稳定性优于游离酶和全细胞状态下的酶。(4)对SAET的催化机理进行了初步研究。通过序列比对、分子建模对接、定点诱变等手段,最终确定SAET属于丝氨酸水解酶家族,其催化三联体为Ser、Asp以及His,并对SAET催化合成丙谷二肽的机理进行了合理推断。本文还根据该酶的催化特性,建立了SAET突变株的高通量筛选的方法,为该酶的分子改造及定向进化打下了基础。本文优化了SAET游离酶及全细胞催化制备丙谷二肽的条件,探究了该酶的固定化方法,为SAET的工业化应用提供了借鉴;本文还对SAET的催化机理进行了初步研究,为该酶的分子改造奠定了基础。

关键词： α-氨基酸酯酰基转移酶催化条件优化全细胞催化酶固定化催化机理

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稀土元素Ce掺杂纳米ZnO催化降解罗丹明B条件优化

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湖南农业科学 2019年第4期 97-99,107页

作者：徐家豪陈柔霖杨舒怡李梦杰俞群娣宋茹浙江海洋大学食品与医药学院

以罗丹明B(RhB)为碱性染料代表,研究掺杂稀土元素Ce的纳米ZnO(Ce-ZnO催化剂)的光催化性能,优化催化反应条件。结果表明:掺杂Ce有效地提高了纳米ZnO催化降解RhB效果,选取催化剂用量、催化时间和Ce掺杂比进行三因素三水平正交实验,得出自... 详细信息

以罗丹明B(RhB)为碱性染料代表,研究掺杂稀土元素Ce的纳米ZnO(Ce-ZnO催化剂)的光催化性能,优化催化反应条件。结果表明:掺杂Ce有效地提高了纳米ZnO催化降解RhB效果,选取催化剂用量、催化时间和Ce掺杂比进行三因素三水平正交实验,得出自然光下Ce-ZnO催化降解5mg/LRhB的最优条件为催化剂用量50mg/50ml、催化时间90min、Ce掺杂比2%。在最优催化条件下,Ce-ZnO对浓度为5mg/L的RhB催化降解率接近90%。

关键词：纳米ZnO Ce掺杂光催化罗丹明B 催化条件优化

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响应面法优化重组大肠杆菌全细胞催化合成丙谷二肽

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中国食品添加剂 2021年第9期32卷 58-65页

作者：上官丁从范玉娜郭冯喆李琪杨静文张洪斌胡雪芹合肥工业大学食品与生物工程学院合肥230009

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(L-alanyl-L-glutamine,丙谷二肽)是重要的肠外营养补充剂,有着广泛的应用。本文利用表达α-氨基酸酯酰基转移酶的重组大肠杆菌QC01,进行全细胞催化法合成丙谷二肽。通过最陡爬坡实验筛选出对全细胞催化影响最显著... 详细信息

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(L-alanyl-L-glutamine,丙谷二肽)是重要的肠外营养补充剂,有着广泛的应用。本文利用表达α-氨基酸酯酰基转移酶的重组大肠杆菌QC01,进行全细胞催化法合成丙谷二肽。通过最陡爬坡实验筛选出对全细胞催化影响最显著的三个因素:QC01细胞浓度、底物比例和反应温度,再利用响应面实验,研究了这三个因素的交互作用。最终确定全细胞催化条件为:QC01细胞浓度3g/L、底物丙氨酸甲酯盐酸盐与谷氨酰胺的摩尔比为1∶0.6、反应温度30℃、底物浓度(以丙氨酸甲酯为准)300mmol/L、反应起始pH9.0、反应时间为40min,优化后底物转化率从22.75%提高到73.85%,为全细胞法制备丙谷二肽的工业化生产提供借鉴。

关键词：丙谷二肽全细胞催化响应面催化条件优化

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