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粘虫不同发育期体内储存蛋白的检测及苦皮藤素Ⅴ对其含量的影响

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昆虫学报 2006年第1期49卷 58-63页

作者：马彩霞刘惠霞吴文君西北农林科技大学农药研究所陕西杨凌712100

采用PAGE和SDS_PAGE以及Westernblot的方法,分析了粘虫Mythimnaseparata幼虫、蛹及成虫体内的储存蛋白。结果表明,粘虫体内存在两种储存蛋白,其中一种为SP_1,即幼虫特异性储存蛋白,从6龄粘虫幼虫的2日龄开始出现在血淋巴中,到末日龄时... 详细信息

采用PAGE和SDS_PAGE以及Westernblot的方法,分析了粘虫Mythimnaseparata幼虫、蛹及成虫体内的储存蛋白。结果表明,粘虫体内存在两种储存蛋白,其中一种为SP_1,即幼虫特异性储存蛋白,从6龄粘虫幼虫的2日龄开始出现在血淋巴中,到末日龄时达到峰值,停止取食后从血淋巴中消失;另一种为SP_3,在化蛹时开始出现在脂肪体中,一直到成虫期仍可持续表达,因此属于持续性储存蛋白。SP_1为分子量约94kD和100kD的2种亚基组成的蛋白质,而SP_3为分子量约94kD的1种亚基组成的蛋白质。SP_1含8.16%的芳香类氨基酸,3.06%的甲硫氨酸。经苦皮藤素Ⅴ亚致死剂量处理5龄粘虫幼虫后的6龄2、3、4日龄粘虫幼虫体内储存蛋白的含量明显低于对照组,对5日龄后粘虫处理组和对照组体内储存蛋白的含量及雌性成虫产卵量没有明显影响。

关键词：粘虫苦皮藤素V 储存蛋白血淋巴脂肪体亚致死剂量 PAGE

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中华剑角蝗储存蛋白基因的克隆及表达分析

中国农业科技导报 2015年第4期17卷 78-84页

作者：董丽君张晓红李艳丽陆珊珊印红河北大学生命科学学院河北省动物系统学与应用重点实验室河北保定071002

昆虫储存蛋白是昆虫生长发育过程中一种关键的功能性蛋白。为了分析中华剑角蝗(Acrida cinerea)储存蛋白基因Ac Hex-2的结构特性和时空表达特性,采用RACE技术获得Ac Hex-2全序列为2 217 bp,编码673个氨基酸,预测分子量78.80 k Da。采用R... 详细信息

昆虫储存蛋白是昆虫生长发育过程中一种关键的功能性蛋白。为了分析中华剑角蝗(Acrida cinerea)储存蛋白基因Ac Hex-2的结构特性和时空表达特性,采用RACE技术获得Ac Hex-2全序列为2 217 bp,编码673个氨基酸,预测分子量78.80 k Da。采用RT-PCR方法对该基因的时空表达进行相对表达量分析,结果显示Ac Hex-2基因在若虫和成虫阶段均表达,进入三龄若虫后表达量明显提高,5龄时达到最高,成虫初期表达量降低;成虫阶段腹部、脂肪体和12日龄精巢、卵巢中表达量最高,中肠表达量极低,12日龄成虫在精巢和卵巢中的表达量显著高于5日龄成虫。表明该储存蛋白在整个发育时期和繁殖过程中起重要作用,为进一步探讨储存蛋白的生理功能、作用机制及害虫防治对策提供参考。

关键词：中华剑角蝗储存蛋白序列分析基因表达

东亚飞蝗储存蛋白基因LmiHex-2的克隆与表达分析

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中国农业科技导报 2016年第6期18卷 65-71页

作者：李艳丽郝金凤赵学乾印红河北大学生命科学学院河北省动物系统学与应用重点实验室河北保定071002

昆虫储存蛋白是在昆虫体内普遍存在的一种特异性淋巴蛋白,在昆虫的生长发育过程中发挥着重要作用。为分析东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis储存蛋白基因Lmi Hex-2的结构和时空表达特性,通过RACE技术获得了Lmi Hex-2基因2 171 bp全... 详细信息

昆虫储存蛋白是在昆虫体内普遍存在的一种特异性淋巴蛋白,在昆虫的生长发育过程中发挥着重要作用。为分析东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis储存蛋白基因Lmi Hex-2的结构和时空表达特性,通过RACE技术获得了Lmi Hex-2基因2 171 bp全长c DNA序列,其中开放阅读框2 022 bp,编码673个氨基酸,预测分子量78.79 k Da。序列比对结果显示Lmi Hex-2基因c DNA序列与直翅目蝗总科储存蛋白基因c DNA序列的相似性达到82%~89%。RT-PCR结果显示Lmi Hex-2基因在东亚飞蝗卵和若虫阶段均有表达,5龄6 d时表达量最大;成虫中脂肪体表达量最高。通过贝叶斯法构建的系统发育树显示直翅目储存蛋白为单系群,昆虫血蓝蛋白与昆虫储存蛋白聚为姐妹群,二者均由甲壳纲血蓝蛋白进化而来。

关键词：东亚飞蝗储存蛋白基因表达序列分析进化树

中国南部5个红树群落来源的木榄叶片中储存蛋白的分析

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药物生物技术 2009年第2期16卷 127-131页

作者：刘睿孙伟郑艳影管悦王旻吴梧桐叶波平中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009

为探讨植物储存蛋白在植物适应环境中的作用,本研究利用2-D和质谱技术从中国南部3省5个红树群落来源的木榄叶片总可溶性蛋白中鉴定到6种主要储存蛋白(181、182、188、194、198和204,相对分子质量约为33000～34000,等电点介于5.5～6.45之... 详细信息

为探讨植物储存蛋白在植物适应环境中的作用,本研究利用2-D和质谱技术从中国南部3省5个红树群落来源的木榄叶片总可溶性蛋白中鉴定到6种主要储存蛋白(181、182、188、194、198和204,相对分子质量约为33000～34000,等电点介于5.5～6.45之间)以及2种营养型储存蛋白(266和274,相对分子质量约为23500,等电点分别为5.1和5.3)。进一步的相关性分析结果显示:在上述几种植物储存蛋白中,182、198和204含量的变化与环境中的年均气温之间具有明显的正相关性(P储存蛋白含量的变化可能与环境中的年均气温和土壤pH之间具有直接的相关性。

关键词：木榄蛋白质组储存蛋白环境因子相关性

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小菜蛾储存蛋白基因的克隆与表达分析

福建农林大学学报（自然科学版） 2017年第3期46卷 311-317页

作者：陈伟军尤燕春仲帆任娜娜许贤美谢苗福建农林大学应用生态研究所福建农林大学生命科学学院农业部闽台作物有害生物综合治理重点实验室闽台特色作物病虫生态防控协同创新中心福建福州350002

克隆和分析了2个小菜蛾的储存蛋白基因——Px AJSP-1和Px BJHSP-2.其中,Px AJSP-1属于芳基贮存蛋白,而Px BJHSP-2属于富甲硫氨酸储存蛋白.进化树分析表明,它们在同一目昆虫中相对保守.利用实时荧光定量PCR分析其表达模式,发现Px AJSP-1... 详细信息

克隆和分析了2个小菜蛾的储存蛋白基因——Px AJSP-1和Px BJHSP-2.其中,Px AJSP-1属于芳基贮存蛋白,而Px BJHSP-2属于富甲硫氨酸储存蛋白.进化树分析表明,它们在同一目昆虫中相对保守.利用实时荧光定量PCR分析其表达模式,发现Px AJSP-1和Px BJHSP-2在4龄幼虫和蛹期高表达,且在脂肪体中的表达量远高于其他组织.

关键词：储存蛋白小菜蛾实时荧光定量PCR 表达分析

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昆虫幼虫储存蛋白

生物学通报 1998年第1期33卷 4-5页

作者：李毅平龚和中国科学院动物研究所

本文对昆虫幼虫血淋巴内一种特殊性质的蛋白——幼虫储存蛋白的命名、生化特性、合成部位、生理作用和体内脂肪体合成、贮存和利用的调节机制等方面的研究进展进行了综述。

关键词：幼虫储存蛋白芳基蛋白昆虫

温度对韭菜迟眼蕈蚊储存蛋白的影响和土壤含水量对该害虫生存与生殖的影响

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温度对韭菜迟眼蕈蚊储存蛋白的影响和土壤含水量对该害虫生存与生...

作者：徐志松山东农业大学

学位级别：硕士

本文针对韭菜迟眼蕈蚊(Bradysia odoriphaga)的储存蛋白展开研究,探究其幼虫和蛹期体内储存蛋白的主要特性,如分子量、亚基分子量和周期动态变化等特性及不同环境温度对其幼虫期和蛹期储存蛋白含量的影响。同时对韭菜迟眼蕈蚊受土壤含... 详细信息

本文针对韭菜迟眼蕈蚊(Bradysia odoriphaga)的储存蛋白展开研究,探究其幼虫和蛹期体内储存蛋白的主要特性,如分子量、亚基分子量和周期动态变化等特性及不同环境温度对其幼虫期和蛹期储存蛋白含量的影响。同时对韭菜迟眼蕈蚊受土壤含水量的影响做了相应的研究。主要结果如下:1.韭菜迟眼蕈蚊储存蛋白分子量测定及其在血淋巴中动态变化趋势对韭菜迟眼蕈蚊的储存蛋白展开研究,通过提取不同发育阶段的韭菜迟眼蕈蚊幼虫和蛹期的血淋巴蛋白样品,进行变性电泳,结合非变性电泳发现,推测韭菜迟眼蕈蚊储存蛋白为六聚体蛋白,且分子量为471.2 kD。有一种类型的亚基,且亚基的分子量为77.9 kD。韭菜迟眼蕈蚊血淋巴中储存蛋白含量自四龄后期至蛹后期先升高后降低。雌雄虫对比可以看出,预蛹期雄虫体内的储存蛋白明显少于雌虫;初蛹时雌雄虫相差不多。2.不同温度下韭菜迟眼蕈蚊血淋巴、脂肪体中储存蛋白的动态变化通过提取不同温度下韭菜迟眼蕈蚊血淋巴和脂肪体中蛋白样品,进行变性电泳发现,在相同时期的20℃和25℃的血淋巴中,25℃条件下比20℃下韭菜迟眼蕈蚊血淋巴中含有更多的储存蛋白。4个不同温度下(15℃、20℃、25℃和30℃)4龄后期随温度的升高(15℃0℃),其体内储存蛋白含量增加。预蛹期随温度的升高(15℃0℃),其血淋巴中储存蛋白含量增加。蛹后期4个温度下差异不明显,均含量较低。4龄后期(L41)脂肪体中有很少的储存蛋白,温度对不同阶段的脂肪体含量的影响差异不显著。3.土壤含水量对韭菜迟眼蕈蚊存活率和生殖力的影响通过设置不同土壤含水量条件饲养试虫,观察韭菜迟眼蕈蚊的存活率和生殖力的变化,得出韭菜迟眼蕈蚊适宜的土壤含水量范围为15%2%。不同土壤含水量对韭菜迟眼蕈蚊的生长发育和生殖力有很大影响,并且对其生长发育的影响因发育阶段不同而异。卵期适宜土壤含水量为10%2%,幼虫期为15%0%,蛹期适宜土壤含水量范围为5%0%。20%土壤含水量条件下的平均产卵量最大为128粒。

关键词：韭菜迟眼蕈蚊储存蛋白温度血淋巴脂肪体土壤含水量存活率产卵量

粘虫体内储存蛋白及苦皮藤素V对其影响的研究

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粘虫体内储存蛋白及苦皮藤素V对其影响的研究

作者：马彩霞西北农林科技大学

学位级别：硕士

储存蛋白是昆虫体内普遍存在的一类特异性血淋巴蛋白且具有多种功能。本文采用PAGE、SDS-PAGE、Western印迹法及应用氨基酸自动分析仪研究了1-6龄粘虫幼虫、蛹及成虫体内储存蛋白的种类、分子量、亚基分子量、氨基酸组分及含量以及苦皮... 详细信息

储存蛋白是昆虫体内普遍存在的一类特异性血淋巴蛋白且具有多种功能。本文采用PAGE、SDS-PAGE、Western印迹法及应用氨基酸自动分析仪研究了1-6龄粘虫幼虫、蛹及成虫体内储存蛋白的种类、分子量、亚基分子量、氨基酸组分及含量以及苦皮藤素V亚致死剂量对粘虫体内储存蛋白的含量和产卵量的影响，结果表明：粘虫体内储存蛋白从1日龄的6龄幼虫开始出现在血淋巴中，其在血淋巴中的浓度随日龄的增长而增高，到末日龄达到峰值。幼虫停止取食后，由脂肪体吸收螯合，使其在血淋巴中的浓度降低。粘虫蛹中发现两种储存蛋白SP-1和SP-3。成虫体内只发现一种储存蛋白SP-3。SP-3从化蛹时开始出现在脂肪体中，一直到成虫期仍可持续表达，为持续性储存蛋白。 SP-1为分子量约94kDa和100kDa的两种亚基组成的六聚体，SP-3为分子量约94kDa的亚基组成的六聚体，这两种六聚体储存蛋白的分子量约为550kDa。粘虫储存蛋白SP-1的氨基酸含量与海灰翅夜蛾Spodoptera litura中的储存蛋白SL-1的芳香类氨基酸(酪氨酸和苯丙氨酸)含量一致，为8.16％，而甲硫氨酸的含量不一致，为3.06％。经苦皮藤素V亚致死剂量处理5龄粘虫幼虫后的6龄第1、2、3、4、5日龄粘虫幼虫体内储存蛋白的含量明显低于对照组，6日龄后(6日龄)粘虫体内储存蛋白的含量及成虫产卵量与对照组没有显著差异。

关键词：粘虫储存蛋白苦皮藤素V

亚洲玉米螟丝氨酸蛋白酶抑制因子Serpin1的组织分布及储存蛋白SP的表达

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亚洲玉米螟丝氨酸蛋白酶抑制因子Serpin1的组织分布及储存蛋白SP...

作者：汤小伟扬州大学

学位级别：硕士

丝氨酸蛋白酶抑制因子(Serpins)属于一个对丝氨酸蛋白酶水解有抑制作用的蛋白大家族,它们中的大部分可以控制蛋白酶介导的生理过程并且可调节丝氨酸蛋白酶。迄今为止,从动物、植物、细菌和病毒体内鉴定出超过800种Serpins。为了探究Serp... 详细信息

丝氨酸蛋白酶抑制因子(Serpins)属于一个对丝氨酸蛋白酶水解有抑制作用的蛋白大家族,它们中的大部分可以控制蛋白酶介导的生理过程并且可调节丝氨酸蛋白酶。迄今为止,从动物、植物、细菌和病毒体内鉴定出超过800种Serpins。为了探究Serpin1在昆虫免疫中的功能,本文通过已制备的亚洲玉米螟Serpin1的多克隆抗体,利用间接免疫荧光标记以及Western blot技术来检测Serpin1在亚洲玉米螟幼虫不同组织的分布情况,为进一步研究Serpin在PPO激活系统中的功能和作用机制提供基础,并有助于发现昆虫发育和免疫反应中的蛋白质酶激活途径。本文的间接免疫荧光标记实验结果表明：在粒血细胞、浆血细胞和类绛色细胞中Serpin1蛋白呈现绿色荧光,细胞表面有Serpin1蛋白的表达。根据Western blot实验杂交得到的条带深浅粗细可以判断Serpin1在体壁中表达量最高,然后是血淋巴,再者是脂肪体,中肠表达量最低。采用胶体金标记的免疫电镜观察,统计分析10个视野内金颗粒数,检测Serpin1蛋白的表达情况。实验表明：Serpinl在体壁中表达量最高,其次是脂肪体,中肠中最少。昆虫储存蛋白(storage protein, SP)是一种由6个亚基聚合而成的球形六聚体蛋白,同血蓝蛋白有很大的同源性。储存蛋白是昆虫作为营养物质储存起来供以后使用的一种蛋白质,它是全变态昆虫幼虫主要的体液蛋白,作为氨基酸储存库对成虫变态发育和雌性卵发育起着重要的作用。为了进一步研究储存蛋白的生化特性,我们利用从亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis 5龄幼虫体内克隆获得的SP基因,构建pET-30a-SP原核表达载体,对原核表达条件进行优化,在大肠杆菌中重组表达了亚洲玉米螟SP蛋白。

关键词：亚洲玉米螟丝氨酸蛋白酶抑制因子 Western blot 储存蛋白间接免疫荧光标记免疫电镜