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基于PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路探讨健骨颗粒对UMR-106细胞内质网应激凋亡的影响

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康复学报 2024年第1期34卷 34-43页

作者：陈赛楠周芬黄云梅林燕萍福建中医药大学中西医结合研究院福建福州350122 福建省中西医结合老年性疾病重点实验室福建福州350122 福建省中医药科学院骨质疏松证候基因组学重点研究室福建福州350003 福建中医药大学杂志社福建福州350122

目的探讨健骨颗粒含药血清对UMR-106成骨样细胞内质网应激ERS凋亡的影响和作用机制。方法选用UMR-106成骨样细胞,采用0、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05μmol/L不同浓度的GSK2606414(PERK抑制剂)对细胞进行干预,采用CCK8法筛选GSK260641... 详细信息

目的探讨健骨颗粒含药血清对UMR-106成骨样细胞内质网应激ERS凋亡的影响和作用机制。方法选用UMR-106成骨样细胞,采用0、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05μmol/L不同浓度的GSK2606414(PERK抑制剂)对细胞进行干预,采用CCK8法筛选GSK2606414最佳干预浓度。将生长状态较好的UMR-106细胞随机分为阴性对照组(NC组)、模型组(H_(2)O_(2)组)、健骨颗粒组(H_(2)O_(2)+JG组)和阳性对照组(H_(2)O_(2)+GSK2606414组)4组。NC组和H_(2)O_(2)组采用10%生理盐水血清干预12 h,H_(2)O_(2)+JG组采用10%健骨颗粒含药血清干预12 h,H_(2)O_(2)+GSK2606414组采用0.03μmol/L的GSK2606414和10%生理盐水血清干预12 h,除NC组外,其余各组在不更换新培养基的情况下,再分别加入10μmol/L H_(2)O_(2)干预12 h。采用激光共聚焦显微镜观察细胞内NC组和H_(2)O_(2)组GRP78和Caspase-12荧光表达情况,DCFH-DA检测活性氧(ROS)含量,激光共聚焦显微镜观察细胞内钙离子实时动态变化判断ROS/ERS模型是否成立。再采用An⁃nexin V-FITC/PI检测4组细胞晚期凋亡率,qPCR和Western blot检测4组ERS相关标志指标GRP78、PERK、eIf2α、ATF4和CHOP mRNA转录水平和蛋白相对表达量。结果与0μmol/L组比较,0.03μmol/L的GSK2606414是干预UMR-106细胞12 h后对细胞活力没有影响的最大浓度,故使用该浓度作为后续H_(2)O_(2)+GSK2606414组的实验干预条件。与NC组相比,H_(2)O_(2)组ROS含量显著增高(P健骨颗粒可通过PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路缓解内质网过度应激,降低成骨细胞凋亡率,发挥防治绝经后骨质疏松症的作用。

关键词：绝经后骨质疏松症内质网应激健骨颗粒 PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路成骨细胞凋亡

基于Nrf2/HO-1通路探讨健骨颗粒含药血清对氧化应激状态成骨细胞骨形成的调控机制

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福建中医药 2024年第1期55卷 10-14,28页

作者：周芬孙攀黄云梅王志强林燕萍福建中医药大学中西医结合研究院福建福州350122 福建省中西医结合老年性疾病重点实验室福建福州350122 上海中医药大学附属市中医医院上海200071

目的基于Nrf2/HO-1通路探讨健骨颗粒含药血清对氧化应激状态成骨细胞骨形成的调控机制。方法取6周龄SPF级雄性SD大鼠40只,随机分为健骨颗粒组和生理盐水组各20只。健骨颗粒组每天灌服含生药量7.8 g/kg健骨颗粒浸膏稀释液2 mL,生理盐... 详细信息

目的基于Nrf2/HO-1通路探讨健骨颗粒含药血清对氧化应激状态成骨细胞骨形成的调控机制。方法取6周龄SPF级雄性SD大鼠40只,随机分为健骨颗粒组和生理盐水组各20只。健骨颗粒组每天灌服含生药量7.8 g/kg健骨颗粒浸膏稀释液2 mL,生理盐水组每天灌服生理盐水2 mL,2组每日灌胃1次,灌胃7 d后取大鼠腹主动脉血制备健骨颗粒含药血清和生理盐水血清。将课题组前期选用UMR-106细胞构建的Nrf2敲减稳定株细胞和Nrf2阴性对照细胞,分别分为Nrf2-KD+JG组、Nrf2-KD+NS组和NC+JG组、NC+NS组。Nrf2-KD+JG组和NC+JG组分别采用10%健骨颗粒含药血清加高糖DMEM培养12 h;Nrf2-KD+NS组和NC+NS组分别采用10%生理盐水血清加高糖DMEM培养12 h,再用10μmol/L过氧化氢干预12 h;采用超氧化物阴离子荧光探针(DHE)检测4组超氧化物阴离子含量,茜素红染色实验观察4组矿化结节数量,Western blot检测4组Nrf2、核Nrf2、HO-1、RUNX2蛋白相对表达量。结果与NC+JG组比较,Nrf2-KD+JG组超氧化物阴离子含量增多(P健骨颗粒可以激活成骨细胞内Nrf2/HO-1信号通路,降低细胞内氧化应激水平,增强细胞矿化能力,促进成骨细胞骨形成。

关键词：绝经后骨质疏松症健骨颗粒 Nrf2/HO-1通路氧化应激骨形成

健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模型鼠尿脱氧吡啶酚及骨组织整合素β_1 mRNA表达的影响

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中国中西医结合杂志 2006年第5期26卷 435-438页

作者：林燕萍周瑞祥李异龙袁俊黄美雅福建中医学院骨伤系福州350003 福建医科大学基础医学院

目的从分子水平及骨代谢角度探讨健骨颗粒对成骨细胞功能的调控作用以及对骨吸收的影响。方法通过切除大鼠卵巢建立骨质疏松模型,药物干预,分别运用酶联免疫吸附法和原位杂交等手段,检测模型鼠尿脱氧吡啶酚(D-Pyr)水平和骨组织整合素β1... 详细信息

目的从分子水平及骨代谢角度探讨健骨颗粒对成骨细胞功能的调控作用以及对骨吸收的影响。方法通过切除大鼠卵巢建立骨质疏松模型,药物干预,分别运用酶联免疫吸附法和原位杂交等手段,检测模型鼠尿脱氧吡啶酚(D-Pyr)水平和骨组织整合素β1(Itgβ1)mRNA表达。结果切除卵巢后模型鼠尿D-Pyr水平明显升高(P骨组织成骨细胞Itgβ1mRNA表达降低。健骨颗粒治疗12周,骨质疏松模型鼠尿D-Pyr水平明显下降(P骨组织成骨细胞数量以及Itgβ1mRNA表达均显著增加。结论健骨颗粒通过降低骨质疏松模型鼠骨基质中Ⅰ型胶原纤维的分解代谢,提高成骨细胞的成骨活性,从而改善或扭转因E2下降出现的成骨不足病理态势,发挥“健骨”之功。

关键词：骨质疏松脱氧吡啶酚整合素健骨颗粒

健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨质量的影响

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中国中西医结合杂志 2004年第5期24卷 431-434页

作者：林燕萍周瑞祥郭世明黄美雅张安桢福建中医学院骨伤系福州350003 福建医科大学基础医学院

目的探讨健骨颗粒对骨质疏松模型大鼠骨质量的影响。方法运用切除大鼠卵巢方法建立去卵巢骨质疏松症模型,应用双能X线骨密度仪测定骨密度;运用不脱钙骨切片、甲苯胺蓝染色观察胫骨上端组织结构并作形态计量;运用光测弹性仪加力架测定... 详细信息

目的探讨健骨颗粒对骨质疏松模型大鼠骨质量的影响。方法运用切除大鼠卵巢方法建立去卵巢骨质疏松症模型,应用双能X线骨密度仪测定骨密度;运用不脱钙骨切片、甲苯胺蓝染色观察胫骨上端组织结构并作形态计量;运用光测弹性仪加力架测定第1腰椎压缩强度极限和弹性模量,以及股骨弯曲破坏荷载。结果健骨颗粒能有效提高模型大鼠骨密度、骨小梁面积和骨皮质厚度/髓腔直径比值,提高椎体骨压缩强度极限和股骨弯曲破坏荷载。结论健骨颗粒在增加骨质疏松模型大鼠骨密度的同时,能有效改善骨组织的结构状况,提高骨骼生物力学性能,提高骨质量。

关键词：健骨颗粒去卵巢大鼠骨质疏松生物力学骨质量

健骨颗粒对去卵巢大鼠骨质疏松症预防作用的研究

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中国中西医结合杂志 2002年第5期22卷 369-371页

作者：林燕萍马建华冯尔宥黄美雅福建中医学院骨伤系福州350003

目的 :探讨健骨颗粒对实验性Ⅰ型原发性骨质疏松症的预防作用。方法 :运用切除大鼠卵巢方法建立去卵巢骨质疏松症模型 ,采用双能X线骨密度测定法和放射免疫分析法等 ,检测实验鼠骨骼密度、血清骨钙素、雌二醇、降钙素水平以及子宫指数... 详细信息

目的 :探讨健骨颗粒对实验性Ⅰ型原发性骨质疏松症的预防作用。方法 :运用切除大鼠卵巢方法建立去卵巢骨质疏松症模型 ,采用双能X线骨密度测定法和放射免疫分析法等 ,检测实验鼠骨骼密度、血清骨钙素、雌二醇、降钙素水平以及子宫指数。结果 :健骨颗粒可明显升高骨密度和子宫指数 ,提高血清雌二醇、降钙素水平 ,降低骨钙素含量。结论 :健骨颗粒可通过调节机体相关内分泌功能 ,有效协调钙调节激素 ,降低骨的转换率 ,增加骨密度 ,对Ⅰ型原发性骨质疏松有预防或延缓发生的作用。

关键词：骨质疏松症预防健骨颗粒骨密度内分泌激素子宫指数实验研究

健骨颗粒含药血清对大鼠成骨细胞G_1期调节蛋白的影响

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中国中西医结合杂志 2010年第9期30卷 966-969页

作者：吴银生林燕萍卢天祥林煜黄云梅黄美雅福建中西医结合研究院骨病研究所福州350108 福建中西医结合研究院基础重点实验室

目的探讨健骨颗粒含药血清对成骨细胞G_1期调节蛋白的影响。方法采用酶消化法培养SD大鼠成骨细胞,健骨颗粒含药血清干预,以生理盐水大鼠血清为对照,运用流式细胞术检测成骨细胞增殖周期,免疫细胞化学法、RT-PCR法检测成骨细胞G_1期调节... 详细信息

目的探讨健骨颗粒含药血清对成骨细胞G_1期调节蛋白的影响。方法采用酶消化法培养SD大鼠成骨细胞,健骨颗粒含药血清干预,以生理盐水大鼠血清为对照,运用流式细胞术检测成骨细胞增殖周期,免疫细胞化学法、RT-PCR法检测成骨细胞G_1期调节蛋白细胞周期蛋白(Cyclin)D1、CDK4、P21表达。结果 20%健骨颗粒含药血清能推进成骨细胞增殖周期进程,促进其增殖;成骨细胞核中存在Cyclin D1、CDK4、P21等蛋白表达;与生理盐水血清比较,健骨颗粒含药血清干预24、48、72 h均能提高成骨细胞CyclinD1、CDK4蛋白及mRNA表达(P健骨颗粒含药血清能从mRNA及蛋白层面上提高体外培养成骨细胞Cyclin D1、CDK4表达,抑制负性调节因子p21的表达,调节G_1期调节蛋白,促进成骨细胞增殖。

关键词：成骨细胞细胞周期蛋白D1 细胞周期蛋白质依赖激酶癌基因蛋白P21 健骨颗粒

健骨颗粒含药血清调控miR-141对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

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中国骨质疏松杂志 2020年第4期26卷 497-501,584页

作者：张楚天张文明林燕萍魏振朴杨娟张志恒孙攀王志强福建中医药大学中西医结合研究院福建福州350122 河南省洛阳正骨医院郑州院区河南郑州450016 福建中医药大学针灸学院福建福州350122

目的观察健骨颗粒含药血清对去卵巢模型小鼠BMSCs成骨分化的影响,并研究其调控miR-141影响BMSCs分化的可能机制。方法流式细胞计数法鉴定BMSCs;含药血清和空白血清分别干预体外培养的BMSCs;显微镜下观察细胞形态结构,碱性磷酸酶染色、... 详细信息

目的观察健骨颗粒含药血清对去卵巢模型小鼠BMSCs成骨分化的影响,并研究其调控miR-141影响BMSCs分化的可能机制。方法流式细胞计数法鉴定BMSCs;含药血清和空白血清分别干预体外培养的BMSCs;显微镜下观察细胞形态结构,碱性磷酸酶染色、定量检测,茜素红染色;RT-PCR检测miR-141及DLx5、Msx2、Runx2的基因表达情况;Western blot检测DLx5、Msx2及Runx2的蛋白表达情况。结果流式细胞计数法鉴定提取细胞符合实验要求;镜下观察发现两组细胞有差异,含药血清组细胞群落间结晶更为密集;ALP染色及定量、茜素红染色结果含药血清组均优于空白血清组;RT-PCR检测Dlx5、Msx2、Runx2及miR-141的基因表达结果:含药血清组miR-141和Msx2基因表达较空白血清组显著降低(P健骨颗粒可以调低miR-141的表达,进而调高Dlx5的表达,削弱Dlx5的同源异形基因Msx2对Runx2抑制作用,通过miR-141调控Dlx5/Msx2/Runx2信号通路促进BMSCs成骨分化达到预防和治疗绝经后骨质疏松的目的。

关键词：中医中药绝经后骨质疏松症健骨颗粒 miR-141 Dlx5/Msx2/Runx2 去卵巢小鼠

健骨颗粒抗去卵巢大鼠骨质疏松的血清代谢组学研究

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中国骨质疏松杂志 2021年第12期27卷 1820-1826页

作者：刘文静杨娟黄美雅张楚天孙攀黄云梅福建中医药大学药学院福建福州350122 福建中医药大学中西医结合研究院福建福州350122 福建省中西医结合老年性疾病重点实验室福建福州350122

目的运用代谢组学方法从物质代谢角度探讨健骨颗粒治疗绝经后骨质疏松症的机制。方法 60只大鼠随机分为正常组、模型组和健骨颗粒组,健骨颗粒组给予健骨颗粒药液灌胃,其余组分别给予等量生理盐水灌胃干预。分别于术后6周和12周取股骨、... 详细信息

目的运用代谢组学方法从物质代谢角度探讨健骨颗粒治疗绝经后骨质疏松症的机制。方法 60只大鼠随机分为正常组、模型组和健骨颗粒组,健骨颗粒组给予健骨颗粒药液灌胃,其余组分别给予等量生理盐水灌胃干预。分别于术后6周和12周取股骨、胫骨、腰椎骨进行骨密度及骨生物力学检测,取腹主动脉血进行液相色谱-质谱(LC-MS)检测,综合单变量和多变量统计分析,鉴定并筛选血清代谢物。结果模型组较正常组骨密度和骨最大载荷显著下降,健骨颗粒组与模型组相比明显恢复,表明造模成功且健骨颗粒组有恢复正常的趋势。模型组血清代谢谱与正常组分离,健骨颗粒组接近正常组。筛选出硬脂酸、皮质酮及泛酸等27个差异代谢物,分别与不饱和脂肪酸、类固醇激素的生物合成及泛酸和辅酶A生物合成等通路有关,涉及脂代谢、核酸代谢及氨基酸代谢等。结论健骨颗粒可能通过调节多种代谢通路改善绝经后骨质疏松症。

关键词：健骨颗粒代谢组学血清去卵巢大鼠绝经后骨质疏松症

基于BMP2/Smad1/Runx2/Osterix信号通路探讨健骨颗粒氯仿萃取部位对体外成骨细胞分化的影响

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康复学报 2022年第3期32卷 224-231页

作者：周芬孙雨晴孙攀张楚天杨娟林燕萍福建中医药大学中西医结合研究院福建福州350122

目的:通过观察健骨颗粒氯仿萃取部位对体外培养成骨细胞的影响,研究其调控BMP2/Smad1/Runx2/Osterix信号通路影响成骨细胞分化的可能机制。方法:选用年龄<3 d的BALB/c小鼠,从其颅盖骨提取原代成骨细胞,并采用碱性磷酸酶染色法对所提取... 详细信息

目的:通过观察健骨颗粒氯仿萃取部位对体外培养成骨细胞的影响,研究其调控BMP2/Smad1/Runx2/Osterix信号通路影响成骨细胞分化的可能机制。方法:选用年龄骨提取原代成骨细胞,并采用碱性磷酸酶染色法对所提取的细胞进行鉴定;取生长状态良好的第3代成骨细胞作为实验对象,将健骨颗粒氯仿萃取部位稀释至不同的浓度梯度,即设置0、2、4、8、16、32、64 ng/mL 7个药物浓度组对细胞进行干预,采用MTT法筛选健骨颗粒氯仿萃取部位促进成骨细胞增殖的最佳浓度,作为最佳药物干预浓度进行后续实验。取第3代细胞,将其分为空白组、抑制剂组(BMP2抑制剂Noggin干预)、药物组(健骨颗粒氯仿萃取部位干预)和抑制剂加药物组(Noggin加健骨颗粒氯仿萃取部位干预),按组别干预后进行后续实验。采用RT-PCR检测各组BMP2、Smad1、Runx2、Osterix及成骨细胞分化相关基因ALP、CollagenⅠmRNA的表达水平;采用Western blot法检测各组BMP2、Smad1、Runx2、Osterix及ALP、CollagenⅠ的蛋白表达,观察健骨颗粒氯仿萃取部位对成骨细胞分化的影响。结果:经碱性磷酸酶染色法鉴定,所提取的原代细胞阳性率高达90%为成骨细胞;采用MTT法检测发现健骨颗粒氯仿萃取部位在药物浓度为32 ng/mL时,成骨细胞增殖速度最快,在干预2 d时达到增殖高峰,故选用32 ng/mL干预2 d作为健骨颗粒氯仿萃取部位最佳干预浓度进行后续实验;RT-PCR与Western blot检测结果显示,与空白组相比,抑制剂组BMP2、Smad1、Runx2、Osterix及ALP、CollagenⅠ各指标基因表达水平显著降低,蛋白相对表达量明显降低(P骨细胞分化相关指标ALP、CollagenⅠ基因和蛋白表达也明显下降,提示BMP2通路与成骨细胞分化密切相关。(2)健骨颗粒氯仿萃取部位干预原代成骨细胞后能够升高细胞内BMP2、Smad1、Runx2、Osterix与成骨细胞分化相关指标ALP、CollagenⅠ基因和蛋白的表达,促进成骨样细胞分化;提示健骨颗粒氯仿萃取部位可以通过调控BMP2/Smad1/Runx2/Osterix通路,促进成骨细胞分化,从而达到防治绝经后骨质疏松症的作用。

关键词：健骨颗粒 BMP2/Smad1/Runx2/Osterix信号通路成骨细胞细胞分化氯仿萃取部位