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六味地黄丸、金匮肾气丸及健骨二仙丸含药血清对BMSCs成脂、成骨细胞分化相关基因的影响

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中国中西医结合杂志 2013年第2期33卷 261-265页

作者：程志安韩凌危建安孙静段晓栋广州中医药大学第二临床医学院骨科广州510120 广州中医药大学第二临床医学院分子生物学实验室广州510006 广州中医药大学第二临床医学院研究生院广州510120

目的研究补肾方药对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的前脂肪细胞向成骨分化的影响。方法采用全骨髓贴壁法培养BMSCs,用经典化学方法诱导BMSCs为前脂肪细胞,用六味地黄丸、金匮肾气丸和健骨二仙丸含药血清(含量浓度均为10%,分别代表补... 详细信息

目的研究补肾方药对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的前脂肪细胞向成骨分化的影响。方法采用全骨髓贴壁法培养BMSCs,用经典化学方法诱导BMSCs为前脂肪细胞,用六味地黄丸、金匮肾气丸和健骨二仙丸含药血清(含量浓度均为10%,分别代表补肾阴、补肾阳和补肾填精方药),干预前脂肪细胞成骨分化过程;采用反转录-实时荧光定量PCR技术(RT-real time qPCR),分别于第6、12和18天,检测成骨分化相关基因RUNX2、ALP、BGP、BMP2、BMP4、SPP1和IGF1 mRNA,及成脂分化相关基因LPL、FABP4和PPARγ mRNA表达水平。结果对于成骨分化相关基因,与对照组比较,第6天各组基因表达无显著变化(2.0>Ratio>0.5);第12天,金匮肾气丸组IGF1和RUNX2 mRNA表达升高较为显著,相对表达量(Ratio)分别为2.97和1.81;第18天,各组IGF1 mRNA表达均显著上升,六味地黄丸组、金匮肾气丸组和健骨二仙丸组Ratio值分别为3.74、12.60和8.35;各组SPP1 mRNA表达也显著升高,Ratio值分别为2.94、3.18和2.62。对于成脂分化相关基因,第6天,六味地黄丸组和金匮肾气丸组FABP4mRNA表达显著下降(Ratio分别为0.47和0.40),其他基因表达均下调,但不显著;第12天和第18天,成脂分化基因表达变化均无显著变化(2.0>Ratio>0.5)。结论成骨分化相关基因在补肾方药作用较晚时间出现表达上调的变化,而成脂分化相关基因在补肾方药作用较早时间即出现表达下调的改变,并且提示补肾阳法促进成骨分化、抑制成脂分化作用更为显著。

关键词：六味地黄丸金匮肾气丸健骨二仙丸骨髓间充质干细胞前脂肪细胞成骨分化

健骨二仙丸对成骨细胞IGF-ImRNA表达的影响

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中国中西医结合杂志 2003年第S1期 170-173页

作者：程志安吴艳峰李红毅曾志勇萧劲夫中山大学孙逸仙纪念医院骨科导师广东省中医院深圳市中医药研究所脐血库(广州510120)

目的:探讨健骨二仙丸含药血清调节成骨细胞增殖、分化以及防止成骨细胞凋亡的机制。方法:采用原代成骨细胞培养,定量 RT-RCR 和 Northern 印迹杂交等方法观察成骨细胞胰岛素样生长因子(in-sulin-like growth factor-1)IGF-ImRNA 的表达... 详细信息

目的:探讨健骨二仙丸含药血清调节成骨细胞增殖、分化以及防止成骨细胞凋亡的机制。方法:采用原代成骨细胞培养,定量 RT-RCR 和 Northern 印迹杂交等方法观察成骨细胞胰岛素样生长因子(in-sulin-like growth factor-1)IGF-ImRNA 的表达。结果:健骨二仙丸能显著增加成骨细胞 IGF-ImRNA 的表达。结论:健骨二仙丸促进成骨细胞 IGF-ImRNA 的表达,从而进一步促进成骨细胞的增殖、分化,改善成骨细胞功能,调节骨重建偶联。表明健骨二仙丸不仅能增加成骨细胞胶原蛋白的合成,而且能促进非胶原蛋白地表达。促进骨的形成是健骨二仙丸防治骨质疏松症的主要机制。

关键词：骨质疏松症成骨细胞胰岛素样生长因子-I 信使核糖核酸健骨二仙丸

健骨二仙丸含药血清对成骨细胞分化及Ⅰ型前胶原mRNA表达的影响

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中国中西医结合杂志 2003年第S1期23卷 170-173页

作者：程志安吴艳峰谢文峰曾志勇萧劲夫中山大学孙逸仙纪念医院骨科脐血库广州510120 深圳市中医药研究所

目的:在临床研究和动物实验的基础上,进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响。方法:分离、培养人的原代成骨细胞,采用 PNPP 法、RIA 法、茜素红染色法以及定量 RT-PCR 之法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素含量、矿化结节形成和Ⅰ型... 详细信息

目的:在临床研究和动物实验的基础上,进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响。方法:分离、培养人的原代成骨细胞,采用 PNPP 法、RIA 法、茜素红染色法以及定量 RT-PCR 之法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素含量、矿化结节形成和Ⅰ型前胶原 mRNA 的表达,从而了解健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响。结果:健骨二仙丸中、高剂量能显著增加碱性磷酸酶的活性及矿化结节形成的数量,促进成骨细胞骨钙素和Ⅰ型前胶原 mRNA 的表达(P健骨二仙丸能有效促进成骨细胞的分化。

关键词：成骨细胞分化 Ⅰ型前胶原健骨二仙丸

人工关节周围界膜白细胞介素6的表达及健骨二仙丸的干预效应

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第25期11卷 4887-4890页

作者：林远方辛本忠卿茂盛萧劲夫陈伟梅广州中医药大学附属深圳市中医院骨科广东省深圳市518033

目的:观察中药健骨二仙丸对体外培养人工关节假体周围界膜白细胞介素6表达的抑制作用,为健骨二仙丸防治人工关节假体周围骨溶解提供科学依据。方法:实验于2006-09/12在深圳市中医院中心实验室(国家级P2实验室)完成。①体外界膜组织培养... 详细信息

目的:观察中药健骨二仙丸对体外培养人工关节假体周围界膜白细胞介素6表达的抑制作用,为健骨二仙丸防治人工关节假体周围骨溶解提供科学依据。方法:实验于2006-09/12在深圳市中医院中心实验室(国家级P2实验室)完成。①体外界膜组织培养:将备用的人工关节假体周围界膜(20g,取自右股骨颈骨折人工关节置换术后11年出现假体无菌性松动来深圳市中医院行翻修术患者,女性,74岁,对实验知情同意并经医院伦理委员会批准)放入Hank’s液中清洗后置于RPMI培养液中,然后将界膜标本用眼科剪剪成1mm3大小组织悬浮液。②含药血清制备:按每日中药健骨二仙丸生药12.0g/kg大鼠体质量灌胃(相当于临床剂量的6.25倍),每日固邦用量为1.04mg/kg体质量(相当于临床剂量的6.25倍)。2次/d,间隔5h,连续灌胃3d。末次灌药1h后,从腹主动脉取血,离心获取血清。③分组:取24孔培养板2块,分空白对照组、健骨二仙丸组、固邦组,各组又分别分100g/L,200g/L两个质量浓度亚组,共计6个组,每组8个培养孔。100g/L质量浓度组相应加入0.9mL组织悬液和0.1mL空白血清或健骨二仙丸、固邦含药血清。200g/L质量浓度组相应加入0.8mL组织悬液和0.2mL空白血清或健骨二仙丸、固邦含药血清。④实验评估:各组添加空白血清或含药血清后在体积分数为0.05CO2、37℃饱和湿度下培养72h,取上清液,用酶联免疫吸附法测定白细胞介素6的含量。上述界膜组织标本同时做细菌培养。结果:48个培养孔中的组织培养均成功,全部进入结果分析。①白细胞介素6水平:100g/L与200g/L空白对照组比较差异无显著意义[(97.113±11.989),(96.275±13.087)ng/L,P>0.05]。100g/L健骨二仙丸组[(92.288±10.397)ng/L]与空白对照组相比差异无显著性(P>0.05);200g/L健骨二仙丸组[(82.263±9.580)ng/L]低于空白对照各组(P健骨二仙丸组与100g/L和200g/L固邦组比较,差异无显著性。②人工关节周围界膜组织细菌培养结果为阴性。结论:健骨二仙丸能够抑制磨损颗粒诱导的人工关节假体周围界膜细胞因子的分泌,进而阻止假体周围破骨细胞性骨溶解,对人工关节假体无菌性松动可能具有较好的防治作用。

关键词：白细胞介素6/界膜人工关节健骨二仙丸中医中药

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健骨二仙丸防治骨质疏松症的实验研究

健骨二仙丸防治骨质疏松症的实验研究

作者：李全广州中医药大学

学位级别：硕士

目的：研究健骨二仙丸提取物对大鼠骨质疏松的防治作用。研究方法：进行三个试验：①16只6.5月龄雌性Wistar大鼠随机分为假手术组和模型组，分别行假手术和去卵巢手术，6周后测定体重、骨密度、血钙、血磷、血清碱性磷酸酶(ALP)、抗酒... 详细信息

目的：研究健骨二仙丸提取物对大鼠骨质疏松的防治作用。研究方法：进行三个试验：①16只6.5月龄雌性Wistar大鼠随机分为假手术组和模型组，分别行假手术和去卵巢手术，6周后测定体重、骨密度、血钙、血磷、血清碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、骨钙素(BGP)。②42只SPF级／清洁级6.5月龄雌性WA／Jic Wistar近交系大鼠随机分为假手术组11只，模型组10只，阳性对照组10只，药物治疗组11只。除假手术组行假手术外，其余各组行双侧去卵巢手术。术后6周假手术组和模型组以每只生理盐水1.6ml灌胃，阳性对照组以倍美力0.0651mg·kg、药物治疗组以健骨二仙丸提取物1.85ml·kg灌胃，治疗10周。测定上述指标、左股骨最大弯曲力、最大弯曲应力、最大剪切力和最大剪切应力以及第5腰椎最大压缩力。③14只18月龄雄性SD大鼠随机分为空白对照组和药物治疗组7只，空白对照组大鼠每只生理盐水2.0ml灌胃，药物治疗组以健骨二仙丸提取物1.85ml·kg灌胃，治疗10周后取左侧股骨进行生物力学测定。结果：分别是：①手术后6周，模型组与假手术组相比，体重增加，骨密度下降，血磷、ALP、TRAP、BGP升高。②给药后10周，模型组与假手术组相比较，体重增加，骨密度下降，ALP、TRAP、BGP增加，各项生物力学性能下降。阳性对照组和药物治疗组与模型组比较，体重部分控制，ALP、TRAP、BGP降低，各项骨生物力学性能提高，除阳性对照组的最大剪切应力外，数据均与假手术组接近。药物治疗组与阳性对照组相比无显著性差异。③药物治疗组最大剪切应力高于空白对照组。结论：大鼠去卵巢6周可确立绝经后骨质疏松症模型，表现为高转换型骨质疏松;健骨二仙丸能抑制去卵巢大鼠的骨高转换状态，提高去卵巢大鼠的骨生物力学性能，防止其骨密度下降及骨量流失，其治疗后的各项指标与倍美力疗效接近;健骨二仙丸对老年大鼠松质骨生物力学性能也有部分改善作用。因此，健骨二仙丸对绝经后和老年性骨质疏松症有一定的防治作用。

关键词：健骨二仙丸原发性骨质疏松症大鼠

健骨二仙丸对成骨细胞分化及IGF-ImRNA表达的影响

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中国中医骨伤科杂志 2004年第2期12卷 4-9页

作者：程志安吴燕峰曾志勇谢文峰沈慧勇萧劲夫中山大学附属第二医院骨科广东广州510120 深圳市中医药研究所

目的 :在临床研究和动物实验的基础上 ,进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响及其作用机制。方法 :分离、培养人的原代成骨细胞 ,采用 PNPP法、RIA法、茜素红染色法以及定量 RT-PCR法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素含量、矿化结... 详细信息

目的 :在临床研究和动物实验的基础上 ,进一步探讨健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响及其作用机制。方法 :分离、培养人的原代成骨细胞 ,采用 PNPP法、RIA法、茜素红染色法以及定量 RT-PCR法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素含量、矿化结节形成和型前胶原 m RNA的表达 ,从而了解健骨二仙丸对成骨细胞分化的影响。定量 RT-PCR和 Northern印迹杂交等方法交观察成骨细胞胰岛素样生长因子 ( insulin-like growth factor-I) IGF-Im RNA的表达。结果 :健骨二仙丸中、高剂量能显著增加碱性磷酸酶的活性 ,及矿化结节形成的数量 ,促进成骨细胞骨钙素的释放 ( P骨细胞型前胶原 m RNA和 IGF-Im RNA的表达。结论 :健骨二仙丸促进成骨细胞 IGF- m RNA的表达 ,从而进一步促进成骨细胞的增殖、分化 ,改善成骨细胞功能 ,调节骨重建偶联。表明健骨二仙丸不仅能增加成骨细胞胶原蛋白地合成 ,而且能促进非胶原蛋白地表达。促进骨的形成是健骨二仙丸作用的主要机制。

关键词：成骨细胞分化 I型前胶原胰岛素样生长因子-I 健骨二仙丸

健骨二仙丸对人工关节周围界膜TNF-α表达的影响

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中国医药指南 2008年第7期6卷 13-16页

作者：辛本忠邸振福林远方李昂曹亚飞肖劲夫广东省广州中医药大学附属深圳市中医院骨科 (518033) 广东省广州中医药大学附属深圳市中医院骨科

目的探讨中药健骨二仙丸对体外培养假体周围界膜TNF-α表达的抑制作用,为健骨二仙丸防治假体周围骨溶解提供科学依据。方法将备用的人工关节周围界膜组织培养液加入实验用大鼠含中药健骨二仙丸生药含药血清中,分空白对照组,健骨二仙丸... 详细信息

目的探讨中药健骨二仙丸对体外培养假体周围界膜TNF-α表达的抑制作用,为健骨二仙丸防治假体周围骨溶解提供科学依据。方法将备用的人工关节周围界膜组织培养液加入实验用大鼠含中药健骨二仙丸生药含药血清中,分空白对照组,健骨二仙丸组、固邦组,各组又分别分10%、20%两个浓度亚组,共计6个组,每组8个培养孔,各组添加空白血清或含药血清后在5%CO、37℃饱和湿度下培养72h。取上清液,用ELISA法测定TNF-α的含量,上述界膜组织标本同时做细菌培养。结果48个培养孔中的组织培养均成功,全部进入结果分析。①TNF-α水平:10%与20%空白对照组比较差异无显著意义(P>0.05)。10%健骨二仙丸组与空白对照各组相比差异无显著意义(P>0.05);20%健骨二仙丸组低于空白对照各组(P健骨二仙丸组与10%和20%固邦组比较,差异无显著意义(P>0.05)。②人工关节周围界膜组织细菌培养结果为阴性。结论健骨二仙丸能够抑制磨损颗粒诱导的假体周围界膜细胞因子的分泌,进而阻止假体周围破骨细胞性骨溶解,对假体无菌性松动可能具有较好的防治作用。

关键词： TNF-α界膜人工关节健骨二仙丸中医中药实验研究

健骨二仙丸介导间充质干细胞的成骨细胞定向诱导及其成骨活性

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中国中医骨伤科杂志 2005年第1期13卷 8-11页

作者：程志安宋少云吴燕峰曾志勇沈慧勇刘尚礼中山大学附属第二医院骨科广东广州510120

目的 :研究健骨二仙丸对间充质干细胞 (Mesenchymal Stem Cells,MSCs)成骨细胞定向分化及其成骨活牲的影响。方法 :采用标准 Ficoll-Hypaque技术分离人脐血 MSCs,以地塞米松、β-磷酸甘油和维生素 C为辅剂定向诱导成骨细胞 ,碱性磷酸酶... 详细信息

目的 :研究健骨二仙丸对间充质干细胞 (Mesenchymal Stem Cells,MSCs)成骨细胞定向分化及其成骨活牲的影响。方法 :采用标准 Ficoll-Hypaque技术分离人脐血 MSCs,以地塞米松、β-磷酸甘油和维生素 C为辅剂定向诱导成骨细胞 ,碱性磷酸酶、骨矿化结节、骨钙素及上清钙含量与型胶原作为成骨细胞鉴定与活性评价的指标。另以健骨二仙丸或健骨二仙丸合地寒米松、β-磷酸甘油与维生素 C为辅剂诱导 ,用正常培养液作为空白对照 ,1 5 d后观测对比上述相关指标。结果 :健骨二仙丸不能单独诱导 MSCs向成骨细胞转化 ,对 MSCs成骨细胞诱导前后的细胞形态无任何影响。定向成骨细胞诱导后 ,健骨二仙丸能显著提高其标志性产物碱性磷酸酶、骨矿化结节和上清钙、骨钙素以及型胶原的表达。结论 :健骨二仙丸作为补肾益气药能促进 MSCs成骨细胞定向转化 ,提高其成骨活性。

关键词：脐血间充质干细胞成骨细胞健骨二仙丸

健骨二仙丸对人工关节周围界膜TNF-α表达的影响

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中国医药指南（学术版） 2008年第7期6卷 13-16页

作者：辛本忠邸振福林远方李昂曹亚飞肖劲夫广东省广州中医药大学附属深圳市中医院骨科 518033

目的探讨中药健骨二仙丸对体外培养假体周围界膜TNF-α表达的抑制作用,为健骨二仙丸防治假体周围骨溶解提供科学依据。方法将备用的人工关节周围界膜组织培养液加入实验用大鼠含中药健骨二仙丸生药含药血清中,分空白对照组,健骨二仙丸组、固邦组,各组又分别分10%、20%两个浓度亚组,共计6个组,每组8个培养孔,各组添加空白血清或含药血清后在5%CO_2、37℃饱和湿度下培养72h。取上清液,用ELISA法测定TNF-α的含量,上述界膜组织标本同时做细菌培养。结果48个培养孔中的组织培养均成功,全部进入结果分析。①TNF-α水平:10%与20%空白对照组比较差异无显著意义(P>0.05)。10%健骨二仙丸组与空白对照各组相比差异无显著意义(P>0.05);20%健骨二仙丸组低于空白对照各组(P健骨二仙丸组与10%和20%固邦组比较,差异无显著意义(P>0.05)。②人工关节周围界膜组织细菌培养结果为阴性。结论健骨二仙丸能够抑制磨损颗粒诱导的假体周围界膜细胞因子的分泌,进而阻止假体周围破骨细胞性骨溶解,对假体无菌性松动可能具有较好的防治作用。

关键词： TNF-α界膜人工关节健骨二仙丸中医中药实验研究