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健脾祛湿和络方调控肾小球足细胞及系膜细胞的分子机制研究

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健脾祛湿和络方调控肾小球足细胞及系膜细胞的分子机制研究

作者：赵雯中国中医科学院

学位级别：硕士

第一章:文献综述健脾祛湿和络方常用于缓解肾病的蛋白尿及血尿,具有减轻肾损害,保护肾功能的作用。目前关于肾脏的生理病理研究表明,足细胞作为高度分化的终末期细胞,较易受到致病刺激的影响,受损后影响了肾小球滤过屏障的完整,进而导... 详细信息

第一章:文献综述健脾祛湿和络方常用于缓解肾病的蛋白尿及血尿,具有减轻肾损害,保护肾功能的作用。目前关于肾脏的生理病理研究表明,足细胞作为高度分化的终末期细胞,较易受到致病刺激的影响,受损后影响了肾小球滤过屏障的完整,进而导致蛋白尿的产生;此外,GMCs受到致病刺激后,会过度增殖并表达大量ECM,导致肾小球内系膜区膨胀,挤压毛细血管袢影响肾小球正常结构,进而引发血尿和蛋白尿。近年相关实验研究表明,多种中草药或中药复方对减轻足细胞、系膜细胞损伤,缓解肾脏疾病具有显著作用。故本研究旨在通过探索健脾祛湿和络方对肾小球内足细胞及GMCs的作用,构建该方临床疗效的实验基础。第二章:健脾祛湿和络方对损伤足细胞作用机制研究研究目的:通过氨基核苷嘌呤霉素(PAN)诱导体外足细胞损伤。探索健脾祛湿和络方含药血清对损伤模型的相关标志蛋白及mTOR相关自噬因子表达的影响。探索健脾祛湿和络方对损伤足细胞的作用机制。研究方法:(1)健脾祛湿和络方及替米沙坦、RAP、激素大鼠灌胃提取含药血清。(2)用10%FBS+DMEM配成的培养基于细胞箱内培养足细胞。(3)使用氨基核苷嘌呤霉素(PAN)诱导足细胞损伤模型。(4)检测各组含药血清对正常足细胞的毒性后,将含药血清作用于足细胞损伤模型,采用CCK-8法,酶标仪检测各组OD值,检测损伤模型在各组血清作用后的活性变化。(5)western blot法检测健脾祛湿和络方作用于足细胞模型后,细胞标志蛋白nephrin、podocalyxin及细胞内mTOR相关自噬蛋白表达的水平,以判断健脾祛湿和络方对损伤模型的作用。研究结果:(1)健脾祛湿和络方及对照组的血清对足细胞无毒副作用;(2)嘌呤氨基核苷(PAN)对足细胞具有损伤作用,100μg/mlPAN作用下,足细胞损伤为正常组50%左右,为较为理想的造模药物浓度;(3)健脾祛湿和络方含药血清作用于损伤足细胞后,低、中含药血清组与正常组间差别无统计学意义(P>0.05),高剂量健脾祛湿和络方含药血清较模型组相比,可减轻足细胞的损伤(P0.05);(4)健脾祛湿和络方组成药物防己的提取物——汉防己甲素,其药量在6.25μg/ml以下对足细胞无毒性作用,6.25μg/ml以上对足细胞损伤作用明显(P健脾祛湿和络方可改善损伤足细胞模型的细胞活性,促进足细胞标志蛋白nephrin、podocalyxin的表达,且安全无毒性;(6)PAN诱导的损伤足细胞模型内mTOR自噬相关因子明显激活,其下游蛋白P-P70S6K、P-4EBP1等合成显著增多,同时,损伤模型内与自噬水平呈正相关的LC3-Ⅱ含量明显减少。表明PAN诱导的损伤模型内mTOR活性增强且正常的自噬程度降低。健脾祛湿和络方高剂量组含药血清可明显上调细胞模型内LC3-Ⅱ表达,减少mTOR及其相关因子的合成,改善细胞内降低的自噬水平。且健脾祛湿和络方高剂量组与西药对照组间的差别不具有统计学意义。(p>0.05)。研究结论:健脾祛湿和络方对PAN诱导的损伤足细胞有修复作用。第三章:健脾祛湿和络方对增殖GMCs作用研究研究目的:研究健脾祛湿和络方对脂多糖(LPS)介导的体外GMCs增殖模型分泌层粘连蛋白、纤维连接蛋白及生长因子TGF-β1的影响。探讨健脾祛湿和络方临床可治疗慢性肾炎的细胞作用机制。研究方法:健脾祛湿和络方及对照组药物给实验大鼠灌胃后制备各组含药血清。用10%FBS+DMEM配制培养基于体外培养脂多糖(LPS)介导的增殖GMCs模型。采用酶联免疫法吸附试验(ELISA)测定含药血清作用于增殖的GMCs后,GMCs上清液中细胞外基质主要组成物质(LN、FN、TGF-β1)含量。研究结果:(1)LPS可诱导增殖GMCs大量分泌ECM组成成分,且作用时间越长,分泌越多;(2)健脾祛湿和络方中高剂量含药血清在24h、48h、72h对LPS诱导的增殖GMCs细胞上清液中LN、FN、TGF-β1表达均有抑制作用,差值具有统计学意义(P健脾祛湿和络方药物浓度的升高及作用时间的增加,GMCs分泌量越少。健脾祛湿和络方低药量组与正常组间差值不具有统计学意义(P>0.05)。研究结论:健脾祛湿和络方能显著抑制病理状态下LPS诱导的增殖GMCs过度分泌层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)、转化生长因子(TGF-β1)。这可能是健脾祛湿和络方治疗慢性肾炎血尿和蛋白尿,预防肾脏纤维化的作用机制。第四章:问题与展望

关键词：健脾祛湿和络方足细胞系膜细胞自噬mTOR FN TGF-β1 汉防己甲素(TET)

健脾祛湿和络方对LPS诱导的小鼠系膜细胞FN、LN及TGF-β_1表达的影响

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中国中西医结合肾病杂志 2017年第2期18卷 102-105页

作者：赵雯余仁欢李澎吕海波刘巧巧梁昌昌王新慧中国中医科学院西苑医院肾病科北京100091 中国中医科学院实验研究中心北京100091 北京中医药大学研究生院北京100029

目的:探索健脾祛湿和络方(JQHD)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的增殖系膜细胞外基质(extracellular matrix,ECM)中FN、LN及TGF-β_1的影响。方法:空白组、福辛普利钠(ACEI)组及低、中、高剂量JQHD含药血清培养LPS诱导的小鼠肾... 详细信息

目的:探索健脾祛湿和络方(JQHD)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的增殖系膜细胞外基质(extracellular matrix,ECM)中FN、LN及TGF-β_1的影响。方法:空白组、福辛普利钠(ACEI)组及低、中、高剂量JQHD含药血清培养LPS诱导的小鼠肾小球系膜细胞株,收集上清液,ELISA法检测上清中FN、LN及TGF-β_1指标。结果:与正常组比较,模型组上清LN、FN及TGF-β_1含量明显增高(P0.05)。结论:健脾祛湿和络方可以抑制增殖GMCs对ECM的分泌,进而缓解肾脏病进展。

关键词：系膜细胞健脾祛湿和络方 FN LN TGF-β1

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健脾祛湿和络方治疗特发性膜性肾病内涵探讨

山东中医杂志 2024年第5期43卷 466-470页

作者：郎睿王新慧闫蕾杨嘉仪余仁欢中国中医科学院西苑医院肾病科北京100091

从多维论治角度结合部分健脾祛湿和络方的研究进展,阐释健脾祛湿和络方有效治疗特发性膜性肾病(IMN)的中医学内涵。IMN以脾虚证、肾虚证为核心证候,健脾祛湿和络方立方以调理脾胃为基础,脾肾同治。从肺肾相关、肠肾相关、肺与大肠相表... 详细信息

从多维论治角度结合部分健脾祛湿和络方的研究进展,阐释健脾祛湿和络方有效治疗特发性膜性肾病(IMN)的中医学内涵。IMN以脾虚证、肾虚证为核心证候,健脾祛湿和络方立方以调理脾胃为基础,脾肾同治。从肺肾相关、肠肾相关、肺与大肠相表里等理论看,健脾祛湿和络方亦体现出了脾肺同治、肠肾同治、肠肺同治的中医学内涵,脾、肺、肠、肾相结合的多维论治是健脾祛湿和络方取效之根本。

关键词：特发性膜性肾病健脾祛湿和络方调理脾胃脾肾同治脾肺同治肠肾同治肠肺同治

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健脾祛湿和络方治疗原发性肾小球疾病蛋白尿50例临床观察

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中医杂志 2013年第21期54卷 1834-1836页

作者：屈欢欢陈小娟何岩全春梅张晶晶余仁欢中国中医科学院西苑医院北京市海淀区西苑操场1号100091

目的观察健脾祛湿和络方治疗原发性肾小球疾病蛋白尿的临床疗效。方法将50例原发性肾小球疾病蛋白尿患者进行自身前后对照。给予自拟健脾祛湿和络方辨证加减,每天1剂,共治疗1年。伴有高血压者,予以血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)或血管... 详细信息

目的观察健脾祛湿和络方治疗原发性肾小球疾病蛋白尿的临床疗效。方法将50例原发性肾小球疾病蛋白尿患者进行自身前后对照。给予自拟健脾祛湿和络方辨证加减,每天1剂,共治疗1年。伴有高血压者,予以血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)或血管紧张素受体拮抗剂(ARB),上述药物不耐受者,予以钙拮抗剂。治疗后观察临床疗效,治疗过程中观察药物起效时间,治疗前后采用酶联免疫方法测定24h尿蛋白定量。结果药物平均起效时间为(1.919±0.975)个月。患者治疗后24h尿蛋白定量明显降低,与治疗前比较差异有统计学意义(P健脾祛湿和络方治疗原发性肾小球疾病蛋白尿疗效确切。

关键词：健脾祛湿和络方原发性肾小球疾病蛋白尿 24h尿蛋白定量

健脾祛湿和络方治疗特发性膜性肾病的临床观察

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健脾祛湿和络方治疗特发性膜性肾病的临床观察

作者：张荣融中国中医科学院

学位级别：硕士

目的通过健脾祛湿和络方为主治疗IMN12个月的临床观察,评价健脾祛湿和络方治疗IMN的有效性和安全性。方法采用自身前后对照的研究方法,对2016年6月至2019年1月就诊于中国中医科学院西苑医院肾病科门诊,以健脾祛湿和络方为主治疗的IMN患... 详细信息

目的通过健脾祛湿和络方为主治疗IMN12个月的临床观察,评价健脾祛湿和络方治疗IMN的有效性和安全性。方法采用自身前后对照的研究方法,对2016年6月至2019年1月就诊于中国中医科学院西苑医院肾病科门诊,以健脾祛湿和络方为主治疗的IMN患者进行12个月的临床观察,观察时间节点为治疗前及治疗后3、6、12个月,主要观察指标为24小时尿蛋白定量、血浆白蛋白、中医证候积分等。同时根据患者既往是否接受激素和/或免疫抑制剂治疗情况,将患者分为初始中医治疗组和难治性IMN中医治疗组并进行疗效分析。结果:(1)共纳入符合标准IMN患者179例,其中脱落2例,剔除3例,47例未满12个月观察时间,实际完成127例。其中既往未应用激素和/或免疫抑制剂治疗者60例,为初始中医治疗组,既往曾接受激素和/或免疫抑制剂规范治疗6个月无效或对激素依赖或反复复发者67例,为难治性IMN中医治疗组。(2)总体疗效情况:127例患者经12个月治疗,完全缓解33例(26.0%),部分缓解75例(59.06%),无效19例(14.96%),总有效率85.04%。在治疗12个月后,24小时尿蛋白定量由治疗前的5.31±3.13降至治疗后的1.67±1.09(P0.05),差异无统计学意义。(6)不良反应和不良事件:在治疗过程中,出现1例腹泻患者、1例肺部感染、2例上呼吸道感染、1例肝功能一过性升高的患者。结论1.健脾祛湿和络方为主的中医治疗方案对IMN治疗安全有效,可显著减少I MN患者的尿蛋白,提升血浆白蛋白水平。2.健脾祛湿和络方还可以改善IMN患者的血脂代谢。3.健脾祛湿和络方对难治性IMN患者亦有较好的临床疗效,且不良反应较少。***的主要病机为脾肾气虚兼有风、湿、瘀邪,运用健脾祛湿和络方以健脾益气,升阳除湿,祛风和络为主治疗,可以较好地改善患者的中医临床症状,提高患者的生存质量。

关键词：健脾祛湿和络方特发性膜性肾病难治性膜性肾病中医治疗临床观察

健脾祛湿和络方治疗难治性膜性肾病的临床观察

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中华肾病研究电子杂志 2019年第1期8卷 30-37页

作者：史彬张荣融王新慧梁莹赵宗江余仁欢北京中医药大学研究生院北京100029 中国中医科学院西苑医院肾病科北京100091

目的探讨健脾祛湿和络方治疗脾虚水湿血瘀证难治性膜性肾病患者的有效性及安全性。方法入选病例来自2013年10月至2017年1月就诊于中国中医科学院西苑医院肾病科门诊及住院的18例经肾穿刺明确诊断为特发性膜性肾病(IMN)、经标准治疗无效... 详细信息

目的探讨健脾祛湿和络方治疗脾虚水湿血瘀证难治性膜性肾病患者的有效性及安全性。方法入选病例来自2013年10月至2017年1月就诊于中国中医科学院西苑医院肾病科门诊及住院的18例经肾穿刺明确诊断为特发性膜性肾病(IMN)、经标准治疗无效、中医辨证属脾虚水湿血瘀证的难治性膜性肾病患者。健脾祛湿和络方由生黄芪、炒白术、汉防己、当归等成分组成,疗程24周,随访24周。随访期间,完全缓解患者停用健脾祛湿和络方,其余患者继续本方治疗。主要观察指标为24 h尿蛋白定量,次要疗效指标为中医证积分变化、血清白蛋白、血肌酐、估算的肾小球滤过率(e GFR)。同时观察不良事件的发生。采用SPSS 21. 0软件包进行统计学分析。结果健脾祛湿和络方治疗至24周时较基线水平,尿蛋白下降(t=4. 493,P=0. 041)、中医证候积分降低(t=-13. 872,P=0. 033),血白蛋白升高(t=2. 434,P=0. 018),并随着治疗周期延长,其疗效更显著:随访至48周时与24周的24 h尿蛋白定量、中医证候积分下降差值、血白蛋白升高差值比较差异有统计学意义(F=29. 45,P=0. 043; F=64. 32,P=0. 010; F=54. 24,P=0. 028)。随访48周的西医指标总缓解率高于24周的总缓解率(83. 3%与66. 7%,χ~2=15. 635,P 0. 05)。结论健脾祛湿和络方治疗难治性膜性肾病在降低尿蛋白及减轻临床症状方面疗效显著,且有更好的安全性。

关键词：难治性膜性肾病健脾祛湿和络方中医药治疗

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健脾祛湿和络方治疗慢性肾炎脾虚湿热证

中医学报 2020年第12期35卷 2653-2656页

作者：郎睿余仁欢梁莹史彬徐建龙李爱峰中国中医科学院西苑医院北京100091

目的:评价健脾祛湿和络方对慢性肾炎患者蛋白尿的影响。方法:采用平行、随机、阳性药物对照方法,将慢性肾炎脾虚湿热证患者89例分为两组。治疗组给予健脾祛湿和络方治疗,对照组给予氯沙坦钾治疗,每天50~100 mg,治疗24周。主要观察指标... 详细信息

目的:评价健脾祛湿和络方对慢性肾炎患者蛋白尿的影响。方法:采用平行、随机、阳性药物对照方法,将慢性肾炎脾虚湿热证患者89例分为两组。治疗组给予健脾祛湿和络方治疗,对照组给予氯沙坦钾治疗,每天50~100 mg,治疗24周。主要观察指标为24小时尿蛋白定量、尿红细胞数、中医证候积分及临床疗效。结果:治疗24周后,治疗组有效率为76.19%,对照组为24.4%,治疗组显著高于对照组(P健脾祛湿和络方能够有效减少慢性肾炎脾虚湿热证患者尿蛋白水平,且安全性良好。

关键词：慢性肾炎脾虚湿热证健脾祛湿和络方尿蛋白

健脾祛湿和络方治疗脾虚水湿血瘀证难治性膜性肾病患者的有效性及安全性分析

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2022年第7期 52-56页

作者：赵荣程立媛翟春艳刘丽柴丽娟石家庄合泰恒医院股份有限公司河北石家庄050011 石家庄市藁城人民医院河北石家庄050011 河北省故城县医院河北石家庄050011

探讨健脾祛湿和络方治疗脾虚水湿血瘀证难治性膜性肾病患者的有效性及安全性分析。方法选取2020年8月-2022年5月本院收治的难治性膜性肾病者(脾虚水湿血瘀证)48例纳入研究,所分对照组(24例)给予常规药物治疗,观察组(24例)予以健脾祛... 详细信息

探讨健脾祛湿和络方治疗脾虚水湿血瘀证难治性膜性肾病患者的有效性及安全性分析。方法选取2020年8月-2022年5月本院收治的难治性膜性肾病者(脾虚水湿血瘀证)48例纳入研究,所分对照组(24例)给予常规药物治疗,观察组(24例)予以健脾祛湿和络方治疗,对比效果。结果缓解率(观察组),比对照组高(P0.05);中医证候积分、24h尿蛋白定量、白蛋白、胆固醇、三酰甘油,要优于对照组(P0.05);并发症发生率,要低于对照组(P0.05)。结论对脾虚水湿血瘀证难治性膜性肾病患者,健脾祛湿和络方治疗,能提高疗效,有效缓解临床症状,降低尿蛋白,改善肾功能,不良反应少,安全性高。

关键词：难治性膜性肾病健脾祛湿和络方脾虚水湿血瘀证

健脾祛湿和络方治疗特发性膜性肾病的队列研究

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空军医学杂志 2021年第6期37卷 510-514页

作者：郎睿王新慧张涛闫蕾梁莹李爱峰余仁欢中国中医科学院西苑医院肾病科北京100091 北京中医药大学第一临床医学院北京100700

目的应用健脾祛湿和络方为主的中医方案治疗特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN),评价其有效性、安全性。方法采用队列研究方法,纳入2016年7月-2018年12月在西苑医院就诊的IMN患者147例,140例完成随访。中医治疗组(7... 详细信息

目的应用健脾祛湿和络方为主的中医方案治疗特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN),评价其有效性、安全性。方法采用队列研究方法,纳入2016年7月-2018年12月在西苑医院就诊的IMN患者147例,140例完成随访。中医治疗组(75例):健脾祛湿和络方治疗为主,对照组(65例):中西医结合常规治疗。随访时间6个月以上。以尿蛋白定量、血浆白蛋白、肾功能、血脂、中医证候积分、终点事件、并发症等为观察指标进行临床疗效和安全性评价。结果治疗后,中医治疗组血浆白蛋白升高、尿蛋白定量下降、中医证候积分降低(P0.05);治疗12个月,中医治疗组血浆白蛋白高于对照组、尿蛋白定量低于对照组、中医证候积分较对照组更低(P0.05)。终点事件差异无统计学意义(P>0.05);在安全性上,糖尿病、肝功能异常的发生率对照组较中医治疗组更高(P健脾祛湿和络方为主的中医方案治疗IMN,疗效和安全性良好。

关键词：特发性膜性肾病健脾祛湿和络方中医治疗队列研究